PD- 1、TIM- 3 的表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

姚軍

淄博市中醫(yī)醫(yī)院病理科，山東淄博 255000

乳腺癌是一種較為常見的惡性腫瘤， 較少發(fā)于男性。 雖然目前醫(yī)學(xué)發(fā)展較快，乳腺癌治療也相應(yīng)取得一定進(jìn)展，但仍有部分乳腺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，造成死亡，威脅女性健康[1-2]。 癌細(xì)胞具有較高的適應(yīng)和誘變能力，可成功躲避免疫系統(tǒng)反擊，且生存環(huán)境決定癌細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育速度， 因此乳腺癌的發(fā)生和惡化不僅和腫瘤性質(zhì)有關(guān)，也和機(jī)體的免疫系統(tǒng)有關(guān)[3]。 最新研究表明，T 淋巴細(xì)胞的免疫功能和癌細(xì)胞的行為有關(guān)，可降低治療敏感性。 但T 淋巴細(xì)胞不能消退腫瘤，有部分研究學(xué)者認(rèn)為[4]，和程序性死亡受體1-（PD-1）、T 細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（TIM-3）的高表達(dá)有一定關(guān)系。 鑒于此， 該研究將該院2018 年1 月—2019 年3 月收治的39 例乳腺癌患者的腫瘤組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，旨在分析PD-1、TIM-3 的表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。 現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用回顧性分析方法收集該院收治的39 例乳腺癌患者的腫瘤組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本分別作為腫瘤組和癌旁組。 年齡28～67 歲，平均（48.57±6.24）歲；病程3 個(gè)月～6 年，平均（3.16±2.08）年。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)： ①臨床經(jīng)影像學(xué)和病理結(jié)果確診為乳腺癌；②≥18 歲成人患者；③患者或其家屬同意翻閱其病例報(bào)告。 排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心、肝、腎等重要器官功能性病變；②合并免疫缺陷等疾??；③合并全身感染等疾病；④伴有其他惡性腫瘤患者；⑤精神障礙或有家族精神遺傳史者。

1.3 方法

①將所有收集的癌旁組織和腫瘤組織的標(biāo)本剪碎經(jīng)胰蛋白酶和膠原酶消化后， 行非連續(xù)密度離心法將其T 淋巴細(xì)胞提取出， 后放入1 mL 的Trizol 中混合均勻，后放置于-80℃下保存。 ②mRNA 表達(dá)量：于混合液中，提取出總RNA 和總蛋白，并使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)出RNA 質(zhì)量。 蛋白表達(dá)量：行Western blotting 檢測(cè)方法檢測(cè)PD-1、 TIM-3 的蛋白表達(dá)量。

1.4 觀察指標(biāo)

比較腫瘤細(xì)胞和癌旁組織細(xì)胞中PD-1、 TIM-3 的mRNA 和蛋白的表達(dá)量； 分析乳腺癌患者的T 淋巴細(xì)胞中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)量和臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系； 采用雙變量Pearson 分析乳腺癌患者的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)量之間相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 癌旁組織和腫瘤組織中PD-1、 TIM-3 的mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量

腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)量和蛋白表達(dá)量均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 癌旁組和腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)量和蛋白表達(dá)量對(duì)比（）

表1 癌旁組和腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)量和蛋白表達(dá)量對(duì)比（）

組別mRNA 表達(dá)量PD-1 TIM-3蛋白表達(dá)量（ng/mL）PD-1 TIM-3癌旁組(n=39)腫瘤組(n=39)t 值P 值1.36±0.34 3.24±0.41 22.042＜0.001 0.10±0.06 0.79±0.21 19.730＜0.001 1.68±0.34 3.14±0.38 17.881＜0.001 0.26±0.05 0.95±0.34 12.539＜0.001

2.2 腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系

腫瘤大小≥2 的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)水平高于腫瘤大?。?，T4 級(jí)的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達(dá)水平＞T3 級(jí)＞T2 級(jí)＞T1 級(jí)， 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的PD-1、TIM-3 的mRNA 表達(dá)水平高于陰性， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 腫瘤組中PD-1、TIM-3 的mRNA 表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系

表2 腫瘤組中PD-1、TIM-3 的mRNA 表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系

病理參數(shù)PD-1 TIM-3腫瘤大小（cm）＜2（n=26）≥2（n=13）t 值P 值腫瘤分級(jí)T1 級(jí)（n=12）T2 級(jí)（n=13）T3 級(jí)（n=8）T4 級(jí)（n=6）F 值P 值淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性（n=21）陽性（n=18）t 值P 值2.67±0.34 3.69±0.61 6.735＜0.001 3.07±0.62 3.89±0.74 3.650 0.001 2.69±0.31 3.24±0.53 3.34±0.67 3.87±0.74 6.776 0.001 3.01±0.52 3.17±0.56 3.74±0.66 4.18±0.94 5.820 0.002 2.58±0.67 3.68±0.92 4.260＜0.001 3.25±0.54 4.07±0.81 3.771 0.001

2.3 乳腺癌患者T 淋巴細(xì)胞PD-1 和TIM-3 的mRNA 表達(dá)量之間的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，乳腺癌患者T 淋巴細(xì)胞中PD-1和TIM-3 的mRNA 表達(dá)量呈正相關(guān)（r=0.819，P＜0.001）。

3 討論

準(zhǔn)確尋找乳腺癌的預(yù)后標(biāo)志物， 可有效預(yù)防乳腺癌的發(fā)生以及復(fù)發(fā)， 對(duì)改善乳腺癌患者預(yù)后具有重要作用[5]。 相關(guān)研究表明[6]，免疫抑制性分子可降低機(jī)體對(duì)腫瘤的抵抗作用， 因此提高機(jī)體抗腫瘤的免疫作用需降低機(jī)體中免疫抑制性分子水平， 也可通過檢測(cè)人體中免疫抑制性分子水平初步判定機(jī)體抗腫瘤能力。

該研究結(jié)果顯示， 腫瘤組織中T 淋巴細(xì)胞的PD-1、TIM-3 的mRNA 表達(dá)量[（3.24±0.41）、（0.79±0.21）]以及蛋白表達(dá)量[（3.14±0.38）ng/mL、（0.95±0.34）ng/mL]均高于癌旁組織[mRNA 表達(dá)量（1.36±0.34）、（0.10±0.06）]及蛋白表達(dá)量[（1.68±0.34）ng/mL、（0.26±0.05）ng/mL]，PD-1、TIM-3 的mRNA 表達(dá)量呈正相關(guān) （r=0.819，P＜0.001），和沈輝等[7]研究結(jié)果一致，腫瘤組織淋巴細(xì)胞的PD－1、TIM－3 的mRNA 表 達(dá) 量 [（3.09±0.38）、（3.42±0.31）]和蛋白表達(dá)量[（0.66±0.08）ng/mL、（0.80±0.11）ng/mL]高于癌旁組織表達(dá)量[mRNA 表達(dá)量（1.26±0.23）、（1.57±0.29）及蛋白表達(dá)量（0.10±0.01）ng/mL、（0.26±0.02）ng/mL]， 表明PD-1、TIM-3 在乳腺癌患者中呈高表達(dá)，且直接參與了乳腺癌的發(fā)生以及發(fā)展過程。 且會(huì)隨著腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、腫瘤轉(zhuǎn)移程度加深而升高。 分析其原因在于，人體的免疫機(jī)制工作原理是消耗機(jī)體中T淋巴細(xì)胞的，封閉PD-1 分子，并同時(shí)阻斷PD-1 和配體1 的結(jié)合作用，最終恢復(fù)了T 淋巴細(xì)胞的應(yīng)答，從而提高機(jī)體的抗腫瘤免疫作用[8]，因此該研究中腫瘤組織中PD-1 的mRNA 和蛋白水平均較高。 但也有部分研究學(xué)者認(rèn)為，PD-1 和腫瘤患者預(yù)后有關(guān)的原因在于其表達(dá)抑制，使得其和其配體傳遞信號(hào)過程阻斷，從而腫瘤患者癥狀有改善趨勢(shì)。 還有部分研究學(xué)者認(rèn)為，單獨(dú)PD-1 不能夠有效起到逆轉(zhuǎn)T 淋巴細(xì)胞消耗， 需聯(lián)合T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)物TIM-3 共同作用[9]，而該研究中腫瘤組織TIM-3 的mRNA 和蛋白水平較高，證實(shí)這一點(diǎn)。近年來， 聯(lián)合多種免疫檢查點(diǎn)為人們治療乳腺癌提供了新的思路， 早期研究表明，PD-1、CTLA-4 聯(lián)合作用，可將腫瘤微環(huán)境中T 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生過程阻斷， 降低髓系細(xì)胞和Treg 細(xì)胞的表達(dá)，從而增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答[9-10]，由此可得，阻斷PD-1 和TIM-3 的兩個(gè)檢驗(yàn)點(diǎn)的信號(hào)通路， 也可達(dá)到抑制腫瘤增長(zhǎng)得目的。 PD-1、TIM-3的mRNA 和蛋白水平呈高表達(dá)， 從而降低T 淋巴細(xì)胞的應(yīng)答作用，降低其抗腫瘤作用，增加了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移速率[11-12]， 因此在乳腺癌患者機(jī)體中，PD-1 和TIM-3的mRNA 水平呈正相關(guān)。

綜上所述，PD－1、TIM－3 水平在乳腺癌患者中呈高水平表達(dá)且呈正相關(guān)，腫瘤越大、腫瘤分級(jí)越高以及淋巴結(jié)呈陽性，其水平越高。