萊菔硫烷對鼻咽癌細胞中Klf4表達及侵襲遷移能力的影響

伍金鳳

摘要：目的：分析萊菔硫烷對鼻咽癌細胞中Klf4表達及侵襲遷移能力的影響。方法：將鼻咽癌細胞株HONE1分成A、B兩組，A組正常培養(yǎng)，B組予以梯度濃度的萊菔硫烷處理，運用CCK8試驗檢測細胞存活率;取50%半數(shù)抑制濃度萊菔硫烷處理的鼻咽癌細胞株HONE1，運用免疫熒光技術檢測Klf4，運用劃痕試驗與Transwell試驗觀察細胞侵襲遷移能力。結(jié)果：1～20μmol/L濃度萊菔硫烷處理下的細胞存活率出現(xiàn)逐漸下降的趨勢，且均低于0μmol/L濃度萊菔硫烷處理下的細胞存活率，P<0.05。B組細胞質(zhì)中Klf4a的熒光強度較A組明顯增強。B組的侵襲細胞數(shù)較A組明顯減少，細胞遷移速率較A組明顯降低。結(jié)論：萊菔硫烷可引起鼻咽癌細胞質(zhì)中Klf4的聚集，且能降低其侵襲遷移能力。

關鍵詞：萊菔硫烷;鼻咽癌;Klf4;侵襲遷移能力

【中圖分類號】R246.5 【文獻標識碼】A 【文章編號】1673-9026（2021）03-078-02

鼻咽癌是我國廣東、廣西及湖南的一種高發(fā)惡性腫瘤，患病率位居耳鼻咽喉惡性腫瘤首位[1]。臨床實踐表明，鼻咽癌具有較高的侵襲性與轉(zhuǎn)移性，應及早診治，以控制病情發(fā)展，改善預后[2]。萊菔硫烷是一種從西藍花中提取的植物化學物，有抑制腫瘤細胞繁殖、加速死亡、保護細胞正常功能的作用。本文就萊菔硫烷對鼻咽癌細胞中Klf4表達及侵襲遷移能力的影響展開分析，旨在明確萊菔硫烷的抗癌作用以及KIf4在鼻咽癌發(fā)生與發(fā)展中的作用機制，匯報如下：

1 資料和方法

1.1 一般資料

鼻咽癌細胞株HONE1源于本院腫瘤研究所標本庫，經(jīng)復蘇、傳代培養(yǎng)而成。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑

萊菔硫烷源于陜西斯諾特生物技術有限公司，Klf4抗體源于美國Cell signaling公司，CCK8試劑盒源于上海晶抗生物公司，抗兔二抗（北京中杉金橋生物技術有限公司）;RMPI-1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶（CORNING公司），SDS-PAGE電泳儀。

1.2.2 細胞處理方法

A組正常培養(yǎng)，B組予以梯度濃度（0、1、5、10、15、20μmol/L）的萊菔硫烷處理。

1.2.3 CCK8試驗檢測方法

制備細胞懸液，計數(shù)后接種于96孔板，每孔100μL，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h，加入梯度濃度萊菔硫烷處理3d，重復操作3次。加入10μL的CCK8，培養(yǎng)4h，測定490nm吸光度值，參比波長650nm。檢測細胞存活率，計算公式為（加藥組吸光度值-對照組吸光度值）×100%。

1.2.4 劃痕試驗及Transwell試驗方法

取50%半數(shù)抑制濃度萊菔硫烷處理的鼻咽癌細胞株HONE1進行試驗。將1×105個細胞接種于12孔板中，過夜，鐵壁，劃痕，換培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h，顯微鏡下觀察細胞的侵襲遷移能力，以細胞的遷移速率與侵襲細胞數(shù)進行評估。

1.2.5 免疫熒光技術檢測方法

取50%半數(shù)抑制濃度萊菔硫烷處理的鼻咽癌細胞株HONE1進行Klf4檢測。細胞消化離心處理，重懸，于6孔細胞培養(yǎng)板中行細胞爬片，完全貼壁后取出培養(yǎng)板，磷酸緩沖鹽溶液沖洗，多聚甲醛室溫下固定20min，體積分數(shù)0.2% Triton X-100破膜，血清封閉0.5h，一抗4℃濕盒內(nèi)過夜，二抗孵育2h，以4'，6-二脒基-2-苯基吲哚染核，甘油封片，正置共聚焦熒光顯微鏡下觀察。

1.3 觀察指標

（1）對比不同濃度萊菔硫烷處理下的細胞存活率;（2）對比A、B組細胞質(zhì)中Klf4的檢測結(jié)果。（3）對比A、B組的細胞侵襲遷移能力。

1.4 數(shù)據(jù)處理

運用SPSS22.0軟件，計數(shù)資料以%表示，行x2檢驗，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度萊菔硫烷處理下的細胞存活率對比

1～20μmol/L濃度萊菔硫烷處理下的細胞存活率出現(xiàn)逐漸下降的趨勢，且均低于0μmol/L濃度萊菔硫烷處理下的細胞存活率，P<0.05，見表1。

2.2 A、B組細胞質(zhì)中Klf4的檢測結(jié)果對比

B組細胞質(zhì)中Klf4的熒光強度較A組明顯增強，見圖1。

2.3 A、B組的細胞侵襲遷移能力對比

B組的侵襲細胞數(shù)較A組明顯減少，細胞遷移速率較A組明顯降低，見圖2、3。

3 討論

Klf4是一種鋅指轉(zhuǎn)錄因子，在各種不同腫瘤研究中報道其具有腫瘤抑制功能[3]。細胞質(zhì)中Klf4的低水平表達是鼻咽癌患者一個潛在的不利預后因素。萊菔硫烷在腫瘤作用已得到諸多研究報道的證實，口服可提高解毒酶活性，預防癌癥進展。當前認為，萊菔硫烷是靶向腫瘤肝細胞的植物提取物，但其作用機制尚不明確，有待進一步探討。

本研究結(jié)果顯示，萊菔硫烷處理下的鼻咽癌細胞存活率明顯降低，細胞質(zhì)中Klf4的熒光強度明顯增強，侵襲細胞數(shù)明顯減少，細胞遷移速率明顯降低，提示萊菔硫烷可提高鼻咽癌細胞質(zhì)中Klf4的表達水平，并降低細胞侵襲遷移能力。

綜上所述，萊菔硫烷可引起鼻咽癌細胞質(zhì)中Klf4的聚集，且能降低其侵襲遷移能力。

參考文獻：

[1]李志偉，繆琴，王為.滋養(yǎng)層細胞表面抗原2和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1在鼻咽癌中的表達及與其臨床病理特征的相關性分析[J].解放軍醫(yī)藥雜志，2020，32（05）：48-51.

[2]王志強，賀璇，李思維，等.Yes相關蛋白、哺乳動物不育系20樣激酶1、細胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表達及臨床意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2019，29（9）：39-43.

[3]李錫清，趙尊蘭，劉冬玲，等.萊菔硫烷對鼻咽癌細胞中Klf4表達及侵襲遷移能力的影響[J].中華實用診斷與治療雜志，2017，31（8）：739-743.

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