一測多評結合指紋圖譜的肝復樂膠囊質量控制研究

曾楊麗，徐菲，蔡思，張夢通，潘宇，李娟，肖利輝，李順祥

中藥研究與開發(fā)

一測多評結合指紋圖譜的肝復樂膠囊質量控制研究

曾楊麗1，徐菲1，蔡思1，張夢通1，潘宇1，李娟1，肖利輝2，李順祥1

1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南省中藥活性物質篩選工程技術研究中心，湖南 長沙 410208； 2.康普藥業(yè)股份有限公司，湖南 長沙 410008

建立一測多評（QAMS）法同時測定肝復樂膠囊中白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷、蘆薈大黃素7種藥效特征成分含量的方法。采用YMC-Pack ODS-A色譜柱，以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相，分段轉換波長為285 nm（0～30 min、35～50 min）、260 nm（30～35 min、50～80 min），柱溫25 ℃，流速0.8 mL/min，建立肝復樂膠囊HPLC指紋圖譜，并以橙皮苷為內(nèi)標，建立白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷、蘆薈大黃素的相對校正因子，計算7種成分的含量，并與外標法測定結果進行比較，以驗證QAMS方法的準確性、重復性及可行性。10批指紋圖譜共確定29個共有峰，指認白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷、蘆薈大黃素7種主要特征成分。10批樣品圖譜的相似度均大于0.95，峰形、分離度均較為良好，精密度及重復性RSD均小于1.5%，在24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定，測定成分線性關系良好，線性范圍適當。QAMS法計算值與外標法實測值差異無統(tǒng)計學意義。本研究建立的QAMS方法可作為簡便快捷的質量評價模式用于肝復樂膠囊中7種成分的質量控制。

肝復樂膠囊；質量控制；一測多評；指紋圖譜

肝復樂膠囊為中藥三類新藥，2004年被列入《國家基本醫(yī)療保險藥品目錄》抗腫瘤藥。其處方為全國名老中醫(yī)潘敏求教授結合多年臨床經(jīng)驗，在經(jīng)典名方四君子湯、茵陳蒿湯、龍膽瀉肝湯、四逆散基礎上加減而成，由半枝蓮、白術、黃芪、陳皮、大黃等21味藥組成，用于肝瘀脾虛為主證的原發(fā)性肝癌，癥見上腹腫塊、脅肋疼痛、神疲乏力、食少納呆、脘腹脹滿、心煩易怒、口苦咽干等，療效肯定[1-2]。潘教授將該處方藥物按功效分為健脾理氣組（黨參、麩炒白術、黃芪、茯苓、薏苡仁、制香附、陳皮、柴胡、沉香、川木通）、化瘀軟堅組（醋鱉甲、土鱉蟲、桃仁、蘇木、牡蠣、郁金、大黃）、清熱解毒組（重樓、敗醬草、茵陳、半枝蓮）[3]。目前肝復樂膠囊執(zhí)行國家食品藥品監(jiān)督管理局標準（YBZ12132006），僅對橙皮苷進行定量，無法全面控制該制劑的內(nèi)在質量[4]。因此，從多種藥效特征成分同時監(jiān)控角度出發(fā)，建立該復方指紋圖譜及主要特征成分的定量檢測方法尤為重要[5-6]。本研究同時測定肝復樂膠囊中7種主要藥效成分——健脾理氣組的白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、橙皮苷和蕓香柚皮苷，化瘀軟堅組的蘆薈大黃素，清熱解毒組的野黃芩苷、黃芩苷含量，并建立10批肝復樂膠囊HPLC指紋圖譜及7種成分的一測多評含量測定方法，以全面控制肝復樂膠囊質量。

1 儀器與試藥

1260型高效液相色譜儀（DAD檢測器），安捷倫科技（中國）有限公司；MS205DU電子分析天平，梅特勒-托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司；KQ-500E數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；YMC- Pack ODS-A反相色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），北京譜飛科技有限公司；離子色譜用SPE-C18型前處理柱，天津希波氏科技有限公司；12位SPE色譜萃取儀，上海那艾精密儀器有限公司。

肝復樂膠囊（規(guī)格0.5 g/粒），批號分別為20171114（S1）、20180301（S2）、20171003（S3）、20180505（S4）、20180302（S5）、20171206（S6）、20180219（S7）、20171205（S8）、20181113（S9）、20180806（S10），康普藥業(yè)股份有限公司。對照品白術內(nèi)酯Ⅰ（批號CHB170224，含量98%）、黃芩苷（批號CHB170720，含量98%）、蕓香柚皮苷（批號CHB170227，含量98%）、橙皮苷（批號CHB180416，含量98%）、蘆薈大黃素（批號12054023，含量98%），成都克洛瑪生物科技有限公司；對照品野黃芩苷（批號110842-201709，含量91.7%）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷（批號111920-2016，含量97.6%），中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為超純水，甲酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用YMC-Pack ODS-A色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～5 min，90%B；5～45 min，90%～75%B；45～65 min，75%～60%B；65～75 min，60%～20%B；75～80 min，20%B），流速0.8 mL/min，檢測波長285 nm（0～30 min、35～50 min）、260 nm（30～35 min、50～80 min），柱溫25 ℃，進樣量10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 混合對照品溶液

分別取各對照品適量，精密稱定，加50%甲醇，制成濃度分別為白術內(nèi)酯Ⅰ 60 μg/mL、毛蕊異黃酮葡萄糖苷20.4 μg/mL、野黃芩苷108 μg/mL、蕓香柚皮苷800 μg/mL、橙皮苷400 μg/mL、黃芩苷110 μg/mL、蘆薈大黃素20 μg/mL的混合對照品溶液，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 供試品溶液

取樣品粉末1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密量取50%甲醇溶液25mL，稱定質量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）提取1 h，冷卻至室溫，50%甲醇補足減失的質量[7-8]，搖勻，15 000 r/min離心10 min，精密量取上清液1.0 mL，用超純水稀釋至5 mL，過SPE-C18型前處理柱固相萃取柱（使用前分別用甲醇、超純水活化處理），依次用10%甲醇5 mL和甲醇5 mL洗脫，收集甲醇洗脫液，60 ℃水浴蒸干后，用50%甲醇溶解并定容至1.0 mL，以0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3 指紋圖譜建立

2.3.1 精密度試驗

取同一批肝復樂膠囊供試品溶液（批號20180505），按“2.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，以橙皮苷峰為參照峰，計算各共有峰相對保留時間RSD均小于1.2%，相對峰面積RSD均小于2.0%，表明儀器精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗

取同一批肝復樂膠囊供試品溶液（批號20180505），按“2.1”項下色譜條件，于0、2、4、8、16、24 h分別進樣1次，記錄色譜圖，以橙皮苷峰為參照峰，計算各共有峰相對保留時間RSD均小于0.6%，相對峰面積RSD均小于2.1%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.3 重復性試驗

取同一批肝復樂膠囊供試品溶液（批號20180505），按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，以橙皮苷峰為參照峰，計算各共有峰相對保留時間RSD均小于0.55%，相對峰面積RSD均小于1.5%，表明方法重復性良好。

2.3.4 指紋圖譜相似度評價

取10批樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。將10批樣品圖譜導入國家藥典委員會《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012版），采用中位數(shù)生成對照圖譜，設置時間窗寬度為0.20 min，進行多點校正Mark峰及全譜匹配[8]，生成共有峰。結果10批樣品指紋圖譜共確認29個共有峰，10批指紋圖譜的相似度分別為0.952、0.979、0.965、0.966、1.000、0.965、0.979、0.952、0.970、0.951，均大于0.95。見圖1。

2.3.5 部分共有峰指認及相對峰面積計算

通過與混合對照品色譜圖進行歸屬比對，指認指紋圖譜中7個化合物，白術內(nèi)酯Ⅰ（10號峰）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷（11號峰）、野黃芩苷（12號峰）、蕓香柚皮苷（14號峰）、橙皮苷（16號峰）、黃芩苷（19號峰）、蘆薈大黃素（26號峰）平均保留時間分別為（31.27±0.02）min、（33.19±0.03）min、（37.25±0.04）min、（40.31±0.01）min、（44.08±0.03）min、（51.64±0.04）min、（73.25±0.01）min。其中橙皮苷峰位居中，分離度良好，峰面積較大，因此選為參照峰，計算各共有峰相對峰面積，結果見表1。

注：A.供試品疊加圖；B.對照圖譜；C.混合對照品；10.白術內(nèi)酯Ⅰ；11.毛蕊異黃酮葡萄糖苷；12.野黃芩苷；14.蕓香柚皮苷；16.橙皮苷；19.黃芩苷；26.蘆薈大黃素

表1 10批肝復樂膠囊樣品指紋圖譜共有峰相對峰面積

峰號S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10 10.1470.1900.1550.1830.2450.1550.1900.1470.2020.030 20.0380.0340.0320.0730.0750.0320.0340.0380.0690.038 30.0170.0150.0170.0160.0180.0170.0150.0170.0160.011 40.0700.0820.0780.2740.1020.0780.0820.0700.2760.015 50.1610.1690.1760.1970.1500.1760.1690.1610.1990.085 60.0380.0330.0520.0390.0190.0520.0330.0380.0380.037 70.0240.0190.0220.0180.0220.0220.0190.0240.0170.020 80.0160.0370.0280.0520.0220.0280.0370.0160.0510.024 90.0190.0190.0160.0180.0220.0160.0190.0190.0170.017 100.0490.0510.0700.0820.0370.0700.0510.0490.0860.029 110.0170.0170.0160.0140.0180.0160.0170.0170.0090.017 120.2140.2090.1370.2100.2110.1370.2090.2140.2120.155 130.0380.0430.0450.0740.0340.0450.0430.0380.0740.033 140.1870.3320.2510.4220.2540.2510.3320.1870.4250.182 150.0300.0200.0310.0460.0120.0310.0200.0300.0540.023 161.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.000 170.0250.0350.0250.0420.0300.0250.0350.0250.0390.033 180.0220.0170.0190.0170.0210.0190.0170.0220.0190.022 190.0570.0610.0550.0590.0760.0550.0610.0570.0600.057 200.0340.0470.0230.0350.0480.0230.0470.0340.0320.045 210.0130.0150.0120.0220.0130.0120.0150.0130.0170.013 220.0190.0130.0210.0240.0110.0210.0130.0190.0180.024 230.0220.0260.0350.0210.0310.0350.0260.0220.0220.031 240.0110.0250.0160.0320.0180.0160.0250.0110.0320.013 250.0410.0480.0370.0360.0440.0370.0480.0410.0390.042 260.0450.0350.0260.0320.0390.0260.0350.0450.0320.040 270.1660.0750.1410.0370.1140.1410.0750.1660.0370.167 280.0280.0170.0290.0170.0190.0290.0170.0280.0170.028 290.0130.0270.0200.0320.0140.0200.0270.0130.0340.011

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察

精密移取“2.2.1”項下混合對照品溶液0.50、1.25、2.50、5.00、7.50、10.00 mL，分別用50%甲醇定容至10 mL，制備6份不同濃度的混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，依次進樣，記錄色譜圖峰面積。以相應成分的峰面積為縱坐標，對照品濃度（μg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線，得到白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷和蘆薈大黃素7種成分的回歸方程及線性范圍，結果見表2。

表2 7種成分線性關系考察結果

成分回歸方程r2線性范圍/μg 白術內(nèi)酯ⅠY＝7.202 4X＋0.318 41.000 075～1500 毛蕊異黃酮葡萄糖苷Y＝18.154X＋0.971 11.000 025.5～510 野黃芩苷Y＝9.463 2X－0.269 31.000 0135～2700 蕓香柚皮苷Y＝4.073 9X＋2.588 21.000 01000～2000 橙皮苷Y＝11.49X＋35.4930.999 0500～10 000 黃芩苷Y＝6.546 5X－0.900 10.999 9137.5～2750 蘆薈大黃素Y＝14.657X＋0.226 80.999 325～500

2.4.2 精密度試驗

取“2.2.1”項下混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，結果白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷和蘆薈大黃素的峰面積RSD分別為1.63%、0.07%、2.64%、0.37%、0.44%、1.41%、0.38%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗

取肝復樂膠囊供試品溶液（批號20180505），按“2.1”項下色譜條件，于0、2、4、8、16、24 h分別進樣1次，計算峰面積，結果白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷和蘆薈大黃素的峰面積RSD分別為2.04%、0.25%、2.09%、0.46%、0.60%、1.76%、1.57%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復性試驗

取肝復樂膠囊樣品（批號20180505），按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，計算峰面積，結果白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷和蘆薈大黃素的峰面積RSD分別為0.68%、0.31%、0.13%、0.31%、0.04%、1.49%、0.41%，表明本方法重復性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗

精密稱取6份肝復樂膠囊樣品（批號20180505），每份1.0 g，分別置于具塞錐形瓶中，分別精密加入0.254 mg/mL白術內(nèi)酯Ⅰ對照品溶液1 mL、0.042 mg/mL毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液1 mL、0.578 mg/mL野黃芩苷對照品溶液1 mL、2.066 mg/mL蕓香柚皮苷對照品溶液1 mL、1.615 mg/mL橙皮苷對照品溶液1 mL、0.158 mg/mL黃芩苷對照品溶液1 mL和0.042 mg/mL蘆薈大黃素對照品溶液1 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，分別計算7種成分的平均回收率及RSD，結果表明本方法加樣回收率良好，見表3。

表3 肝復樂膠囊中7種成分加樣回收率試驗

成分取樣量 /g樣品中 含量/mg加入 量/mg測得 量/mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 白術內(nèi)酯Ⅰ1.0010.2540.2540.49896.296.70.7 1.0450.2650.2540.51498.0 1.0250.2600.2540.50596.5 0.9980.2530.2540.49796.2 1.0250.2600.2540.50697.0 1.0060.2550.2540.50096.5 毛蕊異黃酮葡萄糖苷1.0390.0430.0420.08190.390.01.3 1.0870.0450.0420.08390.5 1.0140.0420.0420.07988.8 1.0390.0430.0420.08088.5 1.1110.0460.0420.08491.2 1.1350.0470.0420.08591.0 野黃芩苷1.1310.6110.5781.17697.898.90.8 1.1350.6130.5781.18599.0 1.1380.6150.5781.210100.3 1.1290.6100.5781.18399.1 1.1290.6100.5781.17798.1 1.1330.6120.5781.21398.9 蕓香柚皮苷0.9992.0652.0664.11099.098.90.9 0.9992.0652.0664.10098.5 1.0002.0672.0664.09698.2 1.0032.0732.0664.193100.0 1.0022.0702.0664.13499.9 1.0012.0682.0664.09197.9 橙皮苷1.0301.6631.6153.26299.0100.52.4 1.0321.6651.6153.282100.1 1.0291.6601.6153.330103.1 1.0301.6631.6153.332103.4 1.0331.6671.6153.291100.6 1.0341.6691.6153.23797.1 黃芩苷1.0130.1590.1580.45193.193.60.8 1.0010.1570.1580.44992.7 1.0030.1580.1580.45994.0 1.0010.1570.1580.45193.5 0.9940.1560.1580.45593.5 1.0030.1580.1580.46294.8 蘆薈大黃素1.0020.0470.0420.08691.292.10.8 1.0430.0490.0420.08892.4 1.0020.0470.0420.08793.0 1.0210.0480.0420.08792.1 1.0020.0470.0420.08791.3 1.0430.0490.0420.08992.8

2.5 一測多評法建立

2.5.1 相對校正因子計算

精密吸取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定6次，記錄峰面積。以橙皮苷為內(nèi)標物，分別計算白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、黃芩苷、蘆薈大黃素的相對校正因子，fk/s＝fk/fs＝（WkAs）/（WsAk），式中Wk為內(nèi)標物濃度，Ak為內(nèi)標物峰面積，Ws為待測組分濃度，As為待測組分峰面積，結果見表4。

表4 以橙皮苷為內(nèi)標的相對校正因子

序號f1f2f3f4f5f6 11.542 60.605 81.223 72.756 71.765 10.803 4 21.586 80.628 91.208 82.807 61.742 70.780 0 31.576 60.631 41.214 32.753 71.734 50.808 8 41.551 30.623 41.231 12.764 51.767 40.786 7 51.573 40.615 61.244 12.818 81.721 20.813 1 61.566 40.630 41.223 12.754 31.752 40.776 8 平均值1.566 20.622 61.224 22.775 91.747 20.794 8 RSD/%1.051.621.021.061.031.96

注：f1～f6依次為白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、黃芩苷、蘆薈大黃素的相對校正因子

2.5.2 待測成分色譜峰定位

采用相對保留時間即各待測成分與橙皮苷保留時間的比值，對色譜峰進行定位，結果白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、黃芩苷、蘆薈大黃素的相對保留時間分別為0.70、0.75、0.84、0.91、1.17、1.63，RSD分別為2.8%、2.5%、3.8%、3.5%、2.7%、2.0%。

2.5.3 相對校正因子重復性考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液分別進樣測定，考察安捷倫1260型高效液相色譜儀、Waters ACQUITY Arc型高效液相色譜儀及YMC-Pack ODS-A C18色譜柱、Supersil ODS2 C18色譜柱、SinoChrom ODS-BP C18色譜柱對相對校正因子的影響，結果見表5。不同儀器及不同色譜柱對白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、黃芩苷和蘆薈大黃素的相對校正因子無顯著影響。

2.6 一測多評法與標準曲線法結果對比

取10批樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，采用外標法進行含量測定，再用一測多評法進行計算，結果見表6。2種方法測得的各成分含量無明顯差異，表明建立的一測多評方法準確性較好。

表5 不同儀器和色譜柱對相對校正因子的影響

儀器色譜柱f1f2f3f4f5f6 安捷倫1260型YMC-Pack ODS-A C181.566 20.622 61.224 22.775 91.747 20.794 8 Supersil ODS2 C181.554 50.632 31.218 92.763 31.756 70.801 1 SinoChrom ODS-BP C181.575 70.621 91.247 82.805 71.788 80.785 5 Waters ACQUITY Arc型YMC-Pack ODS-A C181.563 70.632 41.234 52.732 31.785 40.802 3 Supersil ODS2 C181.567 80.621 61.226 72.746 81.744 30.793 4 SinoChrom ODS-BP C181.578 80.646 81.253 42.781 21.772 10.776 1 平均值 1.567 80.629 61.234 32.767 51.765 70.792 2 RSD/% 0.561.561.110.941.091.25

注：f1～f6依次為白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、野黃芩苷、蕓香柚皮苷、黃芩苷、蘆薈大黃素的相對校正因子

表6 7種成分含量外標法和一測多評法測定10批肝復樂膠囊樣品結果比較（mg/g，n＝3）

成分測定法S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10 橙皮苷外標法2.360 72.086 51.556 41.614 63.260 43.309 01.557 32.090 12.361 62.289 7 白術內(nèi)酯Ⅰ外標法0.145 40.137 90.153 50.253 60.514 80.535 40.156 90.147 90.152 20.280 4 一測多評法0.139 40.131 70.144 70.238 90.495 20.515 20.147 90.141 20.145 90.267 6 RSD/%2.973.244.154.222.732.724.153.272.993.30 毛蕊異黃酮 葡萄糖苷外標法0.029 60.027 80.036 20.041 40.080 60.081 60.035 30.026 10.030 80.056 1 一測多評法0.029 80.028 00.035 50.040 60.079 60.080 60.034 70.026 30.031 00.055 3 RSD/%0.480.381.231.430.860.851.160.600.361.05 野黃芩苷外標法0.651 70.544 50.295 70.539 80.839 20.831 70.298 00.545 90.617 90.737 0 一測多評法0.640 80.533 10.285 70.516 80.832 70.825 50.288 00.534 50.607 50.724 1 RSD/%1.191.502.433.080.550.532.431.501.191.25 蕓香柚皮苷外標法1.287 62.022 61.170 92.065 91.931 94.158 41.175 42.044 51.417 71.694 4 一測多評法1.238 51.928 91.109 41.949 51.867 04.002 61.113 71.949 71.362 11.622 4 RSD/%2.753.353.814.102.412.703.813.362.833.07 黃芩苷外標法0.252 80.206 50.129 10.157 50.297 10.291 40.139 30.001 20.256 20.205 5 一測多評法0.243 00.197 00.120 40.147 90.288 60.283 10.130 20.211 40.246 30.196 6 RSD/%2.823.334.914.442.052.054.763.302.813.11 蘆薈大黃素外標法0.287 10.106 10.169 20.047 20.066 30.083 00.169 40.103 50.295 70.049 6 一測多評法0.281 30.103 80.163 30.045 90.065 80.082 30.163 50.101 30.289 80.048 9 RSD/%1.441.572.521.980.500.562.521.561.441.05

3 討論

本研究采用DAD檢測器在200～400 nm范圍內(nèi)進行全波長掃描，顯示260、285 nm波長吸收峰較多，分段切換波長能較全面反映肝復樂膠囊的化學成分，且各色譜峰分離較好，基線平穩(wěn)，因此選擇多波長切換作為采集波長，最大程度實現(xiàn)色譜峰分離、消除干擾、匹配更多共有峰，同時檢測肝復樂膠囊中7種主要特征成分，提高檢測的靈敏度和效率[8-11]。流動相摸索時，比較了甲醇-水溶液、乙腈-水溶液、甲醇-甲酸水溶液和乙腈-甲酸水溶液系統(tǒng)的效果，結果顯示甲醇-水溶液分離度差，乙腈-水溶液、甲醇-甲酸水溶液系統(tǒng)各成分響應較小，基線噪音高，而乙腈-甲酸水溶液作為流動相洗脫效果最佳。選擇樣品提取溶劑時，對比了甲醇、50%甲醇、25%甲醇溶液的提取效果，結果采用50%甲醇提取時，樣品色譜峰的峰形、數(shù)量、峰面積均較好，因此選擇50%甲醇作為提取溶劑。

肝復樂膠囊的質量控制現(xiàn)行標準僅對陳皮中的橙皮苷進行定量分析，無法全面控制該制劑的質量。林新文等[12]對肝復樂膠囊進行指紋圖譜研究，對樣品指紋圖譜中的22個共有峰進行了藥材歸屬，但并未對其處方中代表量效關系的特征成分進行定性和定量分析。為此，本研究根據(jù)肝復樂膠囊組方的健脾理氣、化瘀軟堅和清熱解毒功效解析確定主要特征成分，結合中藥指紋圖譜整體、特征性的優(yōu)勢，檢測10批肝復樂膠囊色譜圖，建立了含有29個共有峰的指紋圖譜，并指認了3個功效組中除橙皮苷外的6個有效成分。本研究建立的肝復樂膠囊指紋圖譜能夠更全面表征處方中的藥效信息，更為全面地控制該藥品的質量，可用于指導工業(yè)生產(chǎn)，從而更好地保證產(chǎn)品質量。

一測多評法是采用成藥或藥材中的某一有效成分作為內(nèi)標物，建立內(nèi)標物與其他待測成分間的相對校正因子，并利用其測定其他成分含量的方法[13]。該方法不僅可在缺少對照品的情況下實現(xiàn)定量分析[14]，而且能最大程度降低多指標成分含量測定的檢驗成本。本研究建立了一測多評法對肝復樂膠囊處方健脾理氣組中白術、黃芪、陳皮特征成分白術內(nèi)酯Ⅰ、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、橙皮苷和蕓香柚皮苷，化瘀軟堅組中大黃特征成分蘆薈大黃素，清熱解毒組中半枝蓮特征成分野黃芩苷、黃芩苷同時測定的方法，即以橙皮苷為內(nèi)標物，建立其他6種成分的相對校正因子，計算各成分含量。10批樣品測定結果顯示，一測多評法與外標法無顯著差異，可作為一種簡便快捷的質量評價模式，用于肝復樂膠囊中7種成分的質量控制。

對于中藥復方制劑，僅測定一種或幾種有效成分的含量，通常難以真正反映制劑質量與療效的關系。因此，根據(jù)劉昌孝等[15]提出的“質量標志物”概念，今后可立足于藥效，以藥效與物質基礎的聯(lián)系為出發(fā)點，繼續(xù)深入研究肝復樂膠囊的質量標志物，以期更加有效控制制劑的質量。

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Study on Quality Control ofCapsules by QAMS and Fingerprint

ZENG Yangli1, XU Fei1, CAI Si1, ZHANG Mengtong1, PAN Yu1, LI Juan1, XIAO Lihui2, LI Shunxiang1

To establish a quantitative analysis of multi-components by single-marker (QAMS) method for the simultaneous determination of 7 medicinal properties of atractylenolide Ⅰ, verbascum isoflavone glycoside, wild baicalin, rutin naringin, hesperidin, baicalin, and aloe-emodin.YMC-Pack ODS-A column was used with acetonitrile-0.1% formic acid as mobile phase, and the conversion wavelength was 285 nm (0–30 min, 35–50 min) and 260 nm (30–35 min, 50–80 min), respectively; column temperature was 25 ℃; flow rate was 0.8 mL/min. HPLC fingerprint ofCapsules was established, and hesperidin was set as the internal reference substance to establish the relative correction factors of atractylenolide Ⅰ, verbascum isoflavone glycoside, wild baicalin, rutin naringin, hesperidin, baicalin, and aloe-emodin. The contents of the above seven components were calculated and were compared with the results of the external standard method to verify the accuracy, repeatability and feasibility of the QAMS method.A total of 29 common peaks were identified in 10 batches of fingerprints. 7 main characteristic components of atractylenolide Ⅰ, verbascum isoflavone glycoside, wild baicalin, rutin naringin, hesperidin, baicalin, and aloe-emodin were identified. The similarity of the 10 batch samples was more than 0.95. Under these conditions, the peak shape and resolution of the spectrum were relatively good; precision and repeatability RSD values were less than 1.5%; the sample solution was stable within 24 h; the measured component had a good linear relationship. There was no statistical significance between the calculated value of QAMS method and the measured value of the external standard method.The QAMS method established in this study can be used as a simple and quick quality evaluation model, which can be used for the quality control of seven components inCapsules.

Capsules; quality control; QAMS; fingerprint

R284.1

A

1005-5304(2021)04-0094-07

10.19879/j.cnki.1005-5304.202007127

湖南省科技計劃（2016SK2033）；長沙市科技計劃（kp1907140、kp1801043）；湖南中醫(yī)藥大學中藥學一流學科項目（2018ZYX02）

李順祥，E-mail：lishunxiang@hotmail.com

（收稿日期：2020-07-07）

（修回日期：2020-07-28；編輯：陳靜）