UPLC-QQQ-MS/MS在中藥分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展*

徐東升，何云嬌，鐘靈佼

1 安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 安徽合肥 230031 2 安徽省潁上縣中醫(yī)院 安徽阜陽(yáng) 236000

中藥種類(lèi)繁多、成分復(fù)雜，且微量、痕量成分占比較多，其化學(xué)成分的定性、定量檢測(cè)成為中藥質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)等研究的瓶頸問(wèn)題之一，隨著液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的不斷更新與發(fā)展，因其具有耗時(shí)短、分離效果好、高靈敏性和高選擇性的優(yōu)點(diǎn)[1]，廣泛應(yīng)用于中藥研究的各個(gè)方面。超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-QQQ-MS/MS）是以UPLC為色譜分離系統(tǒng)，三重四極桿（QQQ）作為分析器串聯(lián)而成的一種液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，可對(duì)中藥活性成分進(jìn)行定性定量分析，由于其集UPLC的高分離能力和QQQ的高靈敏度于一體，適合多組分復(fù)雜體系的分離分析，因此在中藥研究領(lǐng)域的應(yīng)用范圍不斷拓展[2-3]。

在單味中藥中的應(yīng)用

1 中藥飲片中活性成分的檢測(cè)

UPLC-QQQ-MS技術(shù)對(duì)多組分復(fù)雜體系分離效果好，可迅速、準(zhǔn)確地對(duì)中藥復(fù)雜成分進(jìn)行定量分析?；赨PLC-QQQ-MS/MS技術(shù)，研究人員在實(shí)驗(yàn)中建立了選擇性高的分析方法，分別測(cè)定出巴戟天藥材中6種化合物[4]、白茅根中的16種真菌[5]、黃秋葵莢果中5種黃酮類(lèi)化合物[6]、銀杏中11種成分[7]、熟地黃中8個(gè)核苷類(lèi)成分[8]以及對(duì)三葉青中4種成分進(jìn)行了定量檢測(cè)[9]。

此外，該技術(shù)還可以通過(guò)對(duì)中藥飲片成分定量檢測(cè)來(lái)鑒定其品種及產(chǎn)地。李功輝等運(yùn)用該技術(shù)發(fā)現(xiàn)不同種屬的馬兜鈴科植物中馬兜鈴酸I含量差別較大，而馬兜鈴酸I有強(qiáng)腎臟損傷性，提示中藥材標(biāo)準(zhǔn)中盡量避免收錄馬兜鈴酸I含量高，而選用功效類(lèi)似而又不含馬兜鈴酸I的種屬藥材，且該方法專屬性強(qiáng)，為馬兜鈴科植物的合理使用提供了科學(xué)檢測(cè)方法和參考依據(jù)[10]。張瑜等建立UPLC-QQQ-MS法測(cè)定湖南等4個(gè)不同產(chǎn)地13個(gè)吊石苣苔中4個(gè)苯乙醇苷類(lèi)成分的方法，能準(zhǔn)確分析并比較4個(gè)成分含量差異，結(jié)果表明，四川漢原地區(qū)吊石苣苔中苯乙醇苷含量最高，且各地區(qū)含量差異較大，為探尋高質(zhì)量藥用植物資源提供技術(shù)支持[11]。

2 分析炮制對(duì)中藥中活性成分影響

不同炮制工藝可改變中藥材化學(xué)成分，從而影響藥效或毒性，應(yīng)用該技術(shù)能準(zhǔn)確分析炮制方法對(duì)中藥飲片中活性成分的影響，常應(yīng)用于炮制工藝及中藥飲片質(zhì)量控制研究。任曉航[12]等采用UPLC-QQQ-MS/MS定量分析巴戟天生品與炮制品中10種主要成分含量差別，結(jié)果顯示，炮制品中環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分含量明顯低于生品，而5-羥甲基糠醛含量增高明顯，同時(shí)，該方法為巴戟天生品及其炮制品的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供可靠技術(shù)支持。張?jiān)婗┑萚13]利用UPLC-QQQ-MS技術(shù)分析在人參炮制中蒸制時(shí)長(zhǎng)及壓力對(duì)人參中皂苷成分含量的影響，通過(guò)設(shè)定R值對(duì)其進(jìn)行考察，從而得出紅參片最佳炮制方法為先切片后蒸制3h。

3 中藥飲片中農(nóng)藥殘留及非法添加成分的檢測(cè)

3.1 中藥飲片中農(nóng)藥殘留水平的檢測(cè) 中藥中殘留的聯(lián)苯肼酯類(lèi)化合物會(huì)不同程度影響中藥藥效及用藥安全性，監(jiān)管部門(mén)對(duì)農(nóng)藥在中藥材中殘留量制定了明確的限量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制中藥材質(zhì)量，因UPLC-QQQMS/MS技術(shù)具有高靈敏性和專屬性，可準(zhǔn)確分析中藥中農(nóng)藥殘留水平，為安全合理應(yīng)用中藥及中藥材安全性評(píng)價(jià)提供科學(xué)指導(dǎo)。張?jiān)碌萚14]基于該技術(shù)對(duì)木瓜中聯(lián)苯肼酯及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性定量分析，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)含量比較，結(jié)果滿足農(nóng)藥殘留的檢測(cè)要求，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法科學(xué)合理。

3.2 中藥飲片中非法添加成分的檢測(cè) 人工染色行為嚴(yán)重影響中藥飲片的質(zhì)量和患者使用的安全性，劉瀟瀟等運(yùn)用該技術(shù)成功建立了菟絲子中非法添加物檸檬黃色素的快速檢測(cè)方法，為有關(guān)企業(yè)及食品監(jiān)督管理部門(mén)控制菟絲子質(zhì)量提供技術(shù)支持[15]。

在中藥復(fù)方及其制劑中的應(yīng)用

1 中藥復(fù)方及其制劑中活性成分的檢測(cè)

中藥復(fù)方是指由兩味或兩味以上藥味組成，有相對(duì)規(guī)定性的加工方法和使用方法，針對(duì)相對(duì)確定的病證而設(shè)的方劑，按照其組方經(jīng)過(guò)一系列工藝而制備的劑型稱之為中藥制劑。UPLC-QQQ-MS/MS技術(shù)具有精密度高、檢測(cè)速度快，操作方便等特點(diǎn)，能夠快速準(zhǔn)確地分析中藥復(fù)方或中成藥復(fù)雜的化學(xué)組成，進(jìn)行定性定量的有效測(cè)定，為臨床用藥提供可靠的質(zhì)量保障[16]。

江斯煒等采用此方法同時(shí)測(cè)定香檳方中4種生物堿含量，結(jié)果顯示，相較于檳榔單煎液，復(fù)方混煎對(duì)促進(jìn)胃腸動(dòng)力主要活性成分生物堿類(lèi)的溶出產(chǎn)生較大影響，且該方法精密度高、選擇性好，可用于香檳方及其相關(guān)制劑的質(zhì)量控制和工藝評(píng)價(jià)[17-18]。Gang Yin等[19]首次采用UPLC-QQQ-MS/MS技術(shù)迅速測(cè)定黃芪-莪術(shù)草藥對(duì)中的17個(gè)化合物，成功應(yīng)用于黃芪-莪術(shù)藥對(duì)及其單味藥材中主要生物活性成分的對(duì)比分析，證明該技術(shù)是對(duì)黃芪-莪術(shù)中藥復(fù)方整體質(zhì)量控制可行的方法。

占方玲等運(yùn)用UPLC-QQQ-MS/MS技術(shù)建立阿歸養(yǎng)血糖漿中阿膠及摻雜的牛皮源成分專屬鑒別方法，對(duì)26個(gè)市售阿歸養(yǎng)血糖漿進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明合格樣品數(shù)僅為12個(gè)，為阿歸養(yǎng)血糖漿質(zhì)量控制提供了高效、快速的檢測(cè)方法[20]。陳鴻玉等[21]利用此方法建立了復(fù)方阿膠補(bǔ)血顆粒中的阿膠特征分子離子峰的檢出方法，結(jié)果顯示該方法可準(zhǔn)確地鑒定主成分阿膠與其他假劣阿膠的區(qū)別，有效控制阿膠摻假的違法行為，更快更好地配合市場(chǎng)監(jiān)管部門(mén)的監(jiān)督執(zhí)法。

此外，有學(xué)者采用此方法對(duì)熱毒寧注射液中6種活性成分[22]、片仔癀中13中成分[16]、婦科止帶膠囊中的阿膠、龜甲膠[23]以及麝香通心滴丸中的13種成分[24]進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均具有良好重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，可為中藥復(fù)方及其制劑的質(zhì)量控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供參考。

2 中藥制劑的非法添加成分的檢測(cè)

中藥制劑中非法添加諸如降壓、降糖、鎮(zhèn)靜等化學(xué)藥物，嚴(yán)重影響中藥制劑的安全性和患者的用藥安全。UPLC-QQQ-MS/MS可準(zhǔn)確、快速檢測(cè)此類(lèi)非法添加化學(xué)藥物。錢(qián)葉飛等[25]對(duì)中成藥及保健品中非法添加降糖、降脂化學(xué)成分進(jìn)行了梳理，共確定了14種成分作為檢測(cè)目標(biāo)，建立其檢測(cè)方法，為中成藥及保健品的監(jiān)管提供了技術(shù)支持。

在中藥藥代動(dòng)力學(xué)中的應(yīng)用

中藥藥代動(dòng)力學(xué)是研究中藥在體內(nèi)變化規(guī)律的科學(xué)，包括吸收、分布、代謝和排泄。中藥多以口服或者注射的方式進(jìn)入人體內(nèi)，通過(guò)吸收進(jìn)入血液循環(huán)分布到各個(gè)臟器器官或特定組織，隨后經(jīng)過(guò)代謝器官代謝失活或激活，最后通過(guò)排泄器官排出體外。研究中藥藥代動(dòng)力學(xué)對(duì)闡明中藥防治疾病規(guī)律，指導(dǎo)臨床科學(xué)合理用藥非常重要，而應(yīng)用UPLC-QQQ-MS/MS技術(shù)對(duì)中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究大有裨益。

1 分析中藥的成分吸收

UPLC-QQQ-MS/MS聯(lián)用技術(shù)具有高靈敏度、強(qiáng)專屬性和高準(zhǔn)確度，可用于精確分析藥物吸收入血后的濃度水平。莊言雙等采用此技術(shù)準(zhǔn)確分析炮制后蒼耳子中的綠原酸、4-咖啡酰奎寧酸等4種有效成分在大鼠血漿中的吸收情況，炮制后蒼耳子降毒機(jī)制可能與增加綠原酸、1，5-鄰雙酚基奎酸這兩種主要活性物質(zhì)的作用時(shí)間，同時(shí)保持4-雙酚基奎酸和芹菜素這兩種物質(zhì)的吸收有關(guān)，為后期實(shí)驗(yàn)提供可靠的研究基礎(chǔ)[26]。

顧欣如等采用此技術(shù)測(cè)定黃連解毒湯給藥后大鼠體內(nèi)生物堿類(lèi)、及黃酮類(lèi)成分的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，檢測(cè)炎癥因子水平，探討黃連解毒湯的抗炎作用機(jī)制，結(jié)果表明，環(huán)烯醚萜類(lèi)體內(nèi)吸收快，生物利用度高，小檗堿在血漿中含量低，單次給藥與多次給藥差異較大，黃酮類(lèi)成分在體內(nèi)吸收存在雙峰現(xiàn)象[27]。

2 分析中藥組織分布

該聯(lián)用技術(shù)具有多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，檢測(cè)速度快，峰型好、選擇性高，可滿足科研人員深入探究中藥在機(jī)體內(nèi)分布情況的要求。雷學(xué)飛等采用此技術(shù)測(cè)定并比較黃柏皮粗品和炮制品水提物口服后生物堿和三萜的組織分布，結(jié)果表明，粗品和炮制品中的小檗堿、黃柏堿、厚樸堿等在各組織中均有分布，尤其是小腸和胃，進(jìn)而闡明黃柏皮用鹽水、米酒加工炮制機(jī)制[28]。盧發(fā)煥等通過(guò)建立滇烏堿中毒大鼠模型，再采用UPLC-QQQ-MS/MS考察滇烏堿在大鼠體內(nèi)組織的分布情況，結(jié)果滇烏堿在體內(nèi)分布廣泛，以胃、小腸及肝臟中含量較多[29]。

3 分析中藥代謝及排泄

運(yùn)用UPLC-QQQ-MS/MS研究單味中藥及復(fù)方在體內(nèi)代謝、排泄的變化規(guī)律及時(shí)效關(guān)系是藥代動(dòng)力學(xué)的重要研究?jī)?nèi)容，胡欣彤等通過(guò)對(duì)SD大鼠ig牡丹皮提取物，采用UPLC-QQQ-MS/MS技術(shù)檢測(cè)丹皮酚4種代謝產(chǎn)物的濃度以及其在大鼠血漿、膽汁、尿液、糞便中的濃度，結(jié)果表明，丹皮酚在SD大鼠體內(nèi)吸收后進(jìn)行了快速代謝，其羥基化、去甲基化、葡萄糖醛酸化的代謝產(chǎn)物也均在給藥后1 h 內(nèi)先后達(dá)峰濃度，丹皮酚可能是由于在SD大鼠胃腸壁、肝臟內(nèi)發(fā)生首過(guò)效應(yīng)而被廣泛代謝。在膽汁、尿液及糞便樣品中，未檢測(cè)到丹皮酚，說(shuō)明在ig給藥24h后膽汁、尿液途徑排泄基本完全[30]。Yunwen Xue等用UPLC-QQQ-MS/MS[31]技術(shù)分析了柴胡皂苷的大鼠的血漿和糞便，研究結(jié)果表明，在8種代謝途徑中，體外和體內(nèi)的單羥基化和羧化均是主要的代謝途徑，這為進(jìn)一步研究柴胡皂苷在人體內(nèi)代謝過(guò)程提供了技術(shù)參考。

總結(jié)與展望

在應(yīng)用UPLC-QQQ-MS/MS技術(shù)進(jìn)行中藥化學(xué)成分分析實(shí)驗(yàn)中，若待測(cè)成分處于微量水平時(shí)，會(huì)因儀器靈敏度不同出現(xiàn)不同程度的實(shí)驗(yàn)誤差，為避免出現(xiàn)這種現(xiàn)象，應(yīng)設(shè)定一定濃度的參比，便于儀器準(zhǔn)確檢出待測(cè)成分[32]。

UPLC-QQQ-MS/MS技術(shù)的出現(xiàn)改變了HPLC分析消耗時(shí)間較長(zhǎng)、消耗材料的缺點(diǎn)，該技術(shù)具有前處理簡(jiǎn)單、成本低、分析快速、選擇性高、定性定量檢測(cè)準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，完全滿足中藥復(fù)雜成分分析要求，該方法準(zhǔn)確可靠，解決了長(zhǎng)期以來(lái)中藥材只能憑借傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別真?zhèn)?，卻無(wú)法進(jìn)行優(yōu)劣判斷的難題，該技術(shù)為中藥及其制劑質(zhì)量控制及中藥的活性成分的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究提供了很好的科研工具，值得推廣。