羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染及診斷方法研究現(xiàn)狀

薄震宇，劉欣超，周金星，靳二輝，李文超，胡忠澤，顧有方*

(1. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)調(diào)控與健康安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 鳳陽(yáng) 233100；2. 安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽(yáng) 233100)

目前，羊在養(yǎng)殖業(yè)中占較大的比重，其飼養(yǎng)模式已從傳統(tǒng)的農(nóng)戶(hù)散養(yǎng)發(fā)展到大規(guī)模集約化飼養(yǎng)，這有利于統(tǒng)一管理，改善養(yǎng)殖場(chǎng)周?chē)纳鷳B(tài)環(huán)境，能有效提高生態(tài)資源的利用率[1-2]。羊胃腸道線(xiàn)蟲(chóng)病是危害羊健康的主要?jiǎng)游锛纳x(chóng)病，是不斷影響?zhàn)B羊業(yè)持續(xù)下降之一，大量感染導(dǎo)致羔羊死亡，對(duì)全球養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生巨大威脅[3-5]。

養(yǎng)殖戶(hù)大量使用驅(qū)蟲(chóng)藥以減少羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染。然而，捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)對(duì)常用的驅(qū)蟲(chóng)藥具有耐藥性。所以，研發(fā)出預(yù)防捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染藥物迫在眉睫[6]。此外，肉、奶和其他產(chǎn)品中的驅(qū)蟲(chóng)藥殘留影響人體健康，并引起公眾極大關(guān)注[7]。本文對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染情況及診斷方法作一簡(jiǎn)要綜述。

1 羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染現(xiàn)狀

1.1 總體感染

Raza等[8]和 Singh等[9]分別報(bào)道巴基斯坦旁遮普南部和印度馬圖拉地區(qū)山羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染率為 31.10%和 53.34%。黃占欣等[10]研究中發(fā)現(xiàn)羊胃腸道中存在大量的蠕蟲(chóng)，其中捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染率達(dá)到了36.4%，并確定了捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)為邯鄲地區(qū)羊胃腸道蠕蟲(chóng)中的優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種，與許開(kāi)云等[11]報(bào)道的結(jié)果相一致。陳亮等[12]使用飽和鹽水漂浮法對(duì)蘭州地區(qū)進(jìn)行羊寄生蟲(chóng)感染研究調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染為50%。林琳等[13]對(duì)山羊采取完全剖檢法進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染率為65.61%，福建省各地均有發(fā)生。萬(wàn)繼成[14]對(duì)新蔡縣的初步研究中共調(diào)查了360份糞便樣品，其中感染捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)共有302份，感染率為83.89%，高于魏彩艷等[15]對(duì)榆林市的調(diào)查結(jié)果?？赡芤?yàn)橛芰质性?003年的時(shí)候就已經(jīng)開(kāi)始禁止對(duì)羊進(jìn)行放牧散養(yǎng)，而且也在養(yǎng)殖規(guī)模中設(shè)置了不少的限制。

1.2 不同地區(qū)羊的感染

在我國(guó)，捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)廣泛分布，不同省份之間的感染率各不相同[16]。張玉仙等[17]對(duì)北京地區(qū)(平谷、房山、通州、順義、大興)5個(gè)不同區(qū)縣的不同規(guī)模的羊養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該蟲(chóng)的感染具有顯著的地區(qū)差異性，其中通州的感染率竟然高達(dá)100%，且與通州養(yǎng)殖戶(hù)的放牧?xí)r間以及放牧的形式有關(guān)。通州主要是早晚放牧，而且是散養(yǎng)，而平谷、房山和順義羊場(chǎng)集約化程度高，防治措施相對(duì)完善。

1.3 不同飼養(yǎng)模式羊的感染

黃占欣等[10]研究發(fā)現(xiàn)集約化飼養(yǎng)的羊群(11.7%)遠(yuǎn)遠(yuǎn)比放牧散養(yǎng)的羊群(90.5%)蠕蟲(chóng)的感染率低。其中放牧散養(yǎng)中羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染率為66.1%，而集約化飼養(yǎng)的羊群胃腸道捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染率只有5%。關(guān)于集約化和放牧之間的差異極顯著，與王永利[18]在北京地區(qū)進(jìn)行的相關(guān)的調(diào)查研究的結(jié)果是一致的。說(shuō)明集約化飼養(yǎng)更有利于羊群的身體健康，降低捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染，提高機(jī)體的生產(chǎn)性能。萬(wàn)繼成[14]在調(diào)查河南新蔡縣山羊寄生蟲(chóng)感染情況發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)為優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種，克井鎮(zhèn)、大浴鎮(zhèn)、坡頭鎮(zhèn)和王屋鎮(zhèn)的4個(gè)不同地區(qū)的4個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)分的感染率分別為71.11%、91.11%、73.33%和62.22%，而4個(gè)放牧散養(yǎng)戶(hù)的感染率分別為82.22%、97.78%、93.33%和100%，新蔡縣地區(qū)放牧散養(yǎng)戶(hù)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的平均感染率(93.33%)明顯高于規(guī)?；B(yǎng)殖戶(hù)(74.44%)，其中王屋鎮(zhèn)的散養(yǎng)戶(hù)感染率竟然達(dá)到了100%。

1.4 不同品種羊的感染

研究表明，一些綿羊品種對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)具有天然抵抗力[19]。由于感染引起免疫應(yīng)答的相對(duì)能力不同，不同品種之間的捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)易感性差異更大，阿薩姆邦山羊的最低感染率可能是由于土著動(dòng)物有更強(qiáng)的抗病能力[20]。González等[21]比較了加納利群島上2個(gè)綿羊品種對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的易感性，綿羊試驗(yàn)感染了20 000個(gè)幼蟲(chóng)，感染后第7天和28天剖檢動(dòng)物，對(duì)未成熟的蠕蟲(chóng)計(jì)數(shù)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)綿羊品種之間的差異。但是，與綿羊品種相比，絨毛綿羊的平均糞便卵數(shù)比其他品種綿羊的低，子宮內(nèi)卵數(shù)和雌蟲(chóng)發(fā)育不良的數(shù)量也較低。表明絨毛綿羊品種對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染有更強(qiáng)的抵抗力，而且這種抵抗力可能在成蟲(chóng)水平上起作用。魏彩艷等[15]對(duì)榆林市榆陽(yáng)區(qū)4個(gè)不同羊品種進(jìn)行了寄生蠕蟲(chóng)的初步調(diào)查，結(jié)果表明不同羊品種的捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染率和感染強(qiáng)度各不相同，其中陜北絨山羊的感染率為57.5%，小尾寒羊感染率為37.5%；當(dāng)?shù)厣窖蚝屯练N綿羊感染率分別為37.5%和27.5%。土種山羊和綿羊?qū)υ撓x(chóng)的感染率普遍低于其他地區(qū)引進(jìn)來(lái)的山羊和綿羊，可能是因?yàn)楫?dāng)?shù)匮驅(qū)Ρ就恋哪磙D(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染具有一定適應(yīng)性，習(xí)慣了本地的飼養(yǎng)模式與環(huán)境，而引進(jìn)來(lái)的羊?qū)Ρ镜厮敛环?，?dǎo)致身體機(jī)能下降，抗病能力降低，感染捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的程度較高。

1.5 不同季節(jié)羊的感染

岳建偉等[22]研究發(fā)現(xiàn)臨河地區(qū)舍飼羔羊消化道線(xiàn)蟲(chóng)排卵的季節(jié)動(dòng)態(tài)，捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)全年呈現(xiàn)1個(gè)高峰期，為9月份、 6月份出生的夏羔，在9月齡前并沒(méi)有觀(guān)察到捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染，而3月份生的春羔在翌年的9月份首次檢出捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)，由此推斷，捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的感染時(shí)間為6到10月份，夏季感染較為嚴(yán)重。Durani 等[23]也報(bào)道了7到8月份捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的最高感染率，水分的存在有利于幼蟲(chóng)的發(fā)育，這與早期觀(guān)察到感染情況相似。秦建華等[24]報(bào)告河北省壩上高原地區(qū)綿羊主要胃腸道線(xiàn)蟲(chóng)的季節(jié)性發(fā)病情況。結(jié)果表明，年內(nèi)有2個(gè)高峰期(3至6月份；9至次年1月份)感染，并且捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)有明顯的春季上升現(xiàn)象。宋銘忻等[25]報(bào)道中國(guó)黑龍江省松花江地區(qū)綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)成蟲(chóng)的卵產(chǎn)量和蠕蟲(chóng)感染的季節(jié)性發(fā)生率，發(fā)現(xiàn)年內(nèi)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)成蟲(chóng)的卵產(chǎn)量和蠕蟲(chóng)感染達(dá)到2個(gè)高峰，從 4 月下旬到 5 月下旬，卵的產(chǎn)量和蠕蟲(chóng)感染增加，并在 5 月下旬達(dá)到峰值，然后立即下降，直到 7 月下旬，在8 月初達(dá)到第2個(gè)高峰再次下降，然后一直保持較低水平，直到明年4月份。7月份最熱，松花江地區(qū)冬季寒冷多雨，夏季炎熱多雨，平均氣溫在 20～25 ℃，而1月最冷，平均溫度低于-20 ℃，且年降水量約500 mm。顯然，夏季的溫暖天氣將促進(jìn)這兩個(gè)地區(qū)的捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的發(fā)展，而冬季的寒冷天氣會(huì)抑制其發(fā)展，從而導(dǎo)致季節(jié)動(dòng)態(tài)。

羅拉體等[26]對(duì)涼山州高寒山區(qū)和二半山區(qū)進(jìn)行調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)是羊的優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種，危害最大，感染率分別為24%和45%。而且在高寒山區(qū)和二半山區(qū)的羊感染最高峰都是在當(dāng)?shù)貧鉁乇容^高的5月份和9月份，二半山區(qū)的氣溫普遍高于高寒山區(qū)，致使前者的感染率也高于后者。周才瑛等[27]對(duì)瀏陽(yáng)黑山羊進(jìn)行捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染調(diào)查，發(fā)現(xiàn)不同季度的感染情況不同，春、夏、秋、冬四季分別感染39.1%、46.7%、81.3%、53.3%。感染呈上升趨勢(shì)。說(shuō)明氣溫是影響寄生蟲(chóng)感染的主要因素。

2 診斷方法

到目前為止，捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染的臨床診斷取決于臨床體征和體外培養(yǎng)幼蟲(chóng)的鑒定。死后診斷是調(diào)查過(guò)程中最常用的方法。此外，近年來(lái)也采用了基于蟲(chóng)體核酸的分子診斷方法。

2.1 形態(tài)學(xué)鑒定

根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定血矛線(xiàn)蟲(chóng)卵。對(duì)比進(jìn)行幼蟲(chóng)體外培養(yǎng)和L3幼蟲(chóng)的鑒定是一種較好的方法[28]。體外培養(yǎng)是通過(guò)收集的新鮮糞便中加入適量的鋸末或蛭石進(jìn)行直接培養(yǎng)，然后利用貝爾曼氏收集并鑒定。該方法存在檢測(cè)靈敏度較低的缺點(diǎn)，尤其是在樣本中蟲(chóng)體數(shù)量較少時(shí)，檢測(cè)效果更差。

2.2 血清學(xué)檢測(cè)

替代診斷包括ELISA在內(nèi)的血清學(xué)技術(shù)，在短時(shí)間內(nèi)更具準(zhǔn)確性和更有診斷能力[29]。主要是基于不同抗原(如體細(xì)胞和排泄分泌(ES)抗原)的免疫分析，已經(jīng)被應(yīng)用來(lái)檢測(cè)特定抗體，主要缺點(diǎn)是共享抗原組成而產(chǎn)生交叉反應(yīng)[30-31]。ESPs由于具有良好的敏感性和特異性而被廣泛用作抗原診斷，發(fā)揮重要的免疫作用。肌球蛋白(TpMy)也可檢測(cè)山羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)早期(感染后14 d)感染；潛在的早期免疫診斷抗原，以肌球蛋白為基礎(chǔ)的間接ELISA對(duì)山羊感染捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)的診斷具有較高的敏感性和特異性，這也是一種血清學(xué)診斷方法，比常規(guī)顯微鏡檢查更靈敏可靠[32]。免疫印跡在靶蛋白的選擇中也起著初步的作用，免疫印跡法和優(yōu)化酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)山羊早期感染過(guò)程中的捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)[33]。一些發(fā)現(xiàn)證明，與常規(guī)顯微鏡檢查相比，基于rHc-TpMy的血清診斷是更準(zhǔn)確的檢測(cè)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染的工具。據(jù)報(bào)道，ELISA和免疫印跡分析是檢測(cè)山羊感染捻轉(zhuǎn)血毛線(xiàn)蟲(chóng)的潛在診斷工具[34]，Naqvi等[35]以重組肝細(xì)胞癌相關(guān)抗原59為基礎(chǔ)，聯(lián)合間接ELISA和免疫印跡建立了診斷羊捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)感染方法。

2.3 PCR檢測(cè)

PCR具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、適用于低感染率動(dòng)物的檢測(cè)等突出優(yōu)點(diǎn)，比顯微鏡和血清學(xué)更快速和準(zhǔn)確。Elmahalawy等[36]開(kāi)發(fā)了用于檢測(cè)反芻動(dòng)物中的毛圓線(xiàn)蟲(chóng)感染的PCR方法。該檢測(cè)由4個(gè)基因特異性的引物/探針組成，能夠在多重感染的情況下對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行敏感和特異的擴(kuò)增。在過(guò)去的10年里，已開(kāi)發(fā)出多種基于PCR(基于hmcp 3和 hmcp 6半胱氨酸蛋白酶基因、ITS1序列、Hcher-1基因等)的檢測(cè)方法作為輔助診斷。

3 展望

捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)病傳播危害極大，要對(duì)其危害有充分的認(rèn)識(shí)。目前，各地羊胃腸道線(xiàn)蟲(chóng)感染依然嚴(yán)重，無(wú)論是急性還是慢性，都對(duì)飼養(yǎng)戶(hù)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，為了減少養(yǎng)殖戶(hù)的損失，需要加強(qiáng)捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)病的宣傳和學(xué)習(xí)，讓養(yǎng)殖者具備基礎(chǔ)診斷和治療能力。除此尚需開(kāi)展更多相關(guān)研究工作，以實(shí)施更具成本效益的控制策略。諸如為了盡早發(fā)現(xiàn)耐藥性的緊急情況并監(jiān)測(cè)其發(fā)展以減少耐藥性的不利影響，應(yīng)評(píng)估更高效、更準(zhǔn)確的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)耐藥性方法的效果，在全國(guó)范圍內(nèi)調(diào)查耐藥性的嚴(yán)重程度；開(kāi)發(fā)出更靈敏、更具體的方法，以便在現(xiàn)場(chǎng)使用和檢測(cè)混合感染。進(jìn)一步開(kāi)展與該寄生蟲(chóng)的生物學(xué)及其與宿主相互作用有關(guān)的基礎(chǔ)研究，以建立更有用的診斷方法，開(kāi)發(fā)有效的藥物和治療方法。

捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)病防控單靠藥物治療是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，為了加快我國(guó)羊養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，必須加大捻轉(zhuǎn)血矛線(xiàn)蟲(chóng)病的防控力度，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，通過(guò)補(bǔ)充蛋白質(zhì)、微量元素、維生素等方法提高羊的免疫力。