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    紅茶菌發(fā)酵山藥枸杞果醋的工藝研究

    2021-04-15 10:20:58張文莉姚穩(wěn)巫永華秦杰苗敬芝
    中國(guó)調(diào)味品 2021年4期
    關(guān)鍵詞:紅茶菌果醋糖度

    張文莉,姚穩(wěn),巫永華,秦杰,苗敬芝*

    (1.徐州工程學(xué)院 食品(生物)工程學(xué)院,江蘇 徐州 221018;2.徐州工程學(xué)院江蘇省食品資源開發(fā)與質(zhì)量安全重點(diǎn)建設(shè)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 徐州 221018)

    紅茶菌,俗稱“海寶”、“胃寶”,是一種起源于中國(guó)東北的傳統(tǒng)民間發(fā)酵型飲料。它是由醋酸菌、酵母菌和乳酸菌以茶糖水為原料混合發(fā)酵而成[1]。其母液中含有多種發(fā)酵微生物及其代謝產(chǎn)物,如茶多酚、茶黃素、多糖、氨基酸、D-葡萄糖二酸-1,4-內(nèi)酯、維生素等,具有促進(jìn)新陳代謝、保肝護(hù)肝、增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗氧化等功效[2-3]。近年來,研究者以紅茶菌為對(duì)象研究開發(fā)了一系列產(chǎn)品并對(duì)其進(jìn)行活性成分分析。文獻(xiàn)[4]以紅茶菌發(fā)酵液為基質(zhì),添加其他3種水果原汁一起發(fā)酵,得到水果紅茶菌飲料并分析其生物活性和抗氧化性。徐清萍等[5]以谷物為原料,用紅茶菌發(fā)酵制醋,并測(cè)定其理化指標(biāo)。孫永康等[6]用紅茶菌和釀酒酵母發(fā)酵茶糖水,制備新型發(fā)酵型茶酒。

    山藥,薯蕷科薯蕷屬,纏繞草質(zhì)藤本植物。《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載,山藥味甘、性平,入脾、胃、腎經(jīng),具有健脾補(bǔ)肺、補(bǔ)腎益精等功效。研究表明,山藥中含有多糖、蛋白質(zhì)、皂苷等成分,具有抗氧化、降血糖、降血脂和提高免疫力的作用[7-8]。枸杞,茄科枸杞屬植物。枸杞中含有多種化學(xué)成分,如多糖、類胡蘿卜素、生物堿和黃酮類等。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)枸杞具有清肝明目、抗氧化、抗炎、抗腫瘤等功效[9]。

    果醋是以一種或多種水果、果渣為原料,經(jīng)現(xiàn)代生物技術(shù)釀造而成的飲料,其中含有多種有機(jī)酸,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富,具有維持人體酸堿平衡,促進(jìn)血液循環(huán),抗菌消炎等功效[10]。本試驗(yàn)以山藥和枸杞為原料,用紅茶菌混合發(fā)酵制備復(fù)合型果醋,既延長(zhǎng)了原料在室溫下的保存時(shí)間,又改善了原料的感官特性,同時(shí)增加了其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能。此外,采用Box-Benhnken響應(yīng)面法對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化,這也為山藥枸杞復(fù)合型果醋的工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    紅茶菌混合菌種:安徽九州神龍生物科技有限公司;山藥、枸杞、紅茶、白糖:均購(gòu)于大潤(rùn)發(fā)超市。

    α-淀粉酶(≥4000 U)、糖化酶(≥100000 U):均購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司;酚酞、乙醇、氫氧化鈉等:均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    YXQ-50A型立式壓力蒸汽滅菌鍋、LH-CNT65數(shù)顯糖度計(jì)、PHSJ-4A型pH計(jì)、L550 型離心機(jī)、DHP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱、HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋、JP728型榨汁機(jī)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 紅茶菌液的制備

    稱取5.0 g紅茶加入500 mL沸水中,于85~90 ℃保持10 min,過濾得紅茶汁,然后加入白砂糖100 g,混勻得茶糖水,冷卻至室溫。向茶糖水中加入40%的紅茶菌母液,存放于滅菌的玻璃容器中,用雙層紗布封口,然后放置在30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置發(fā)酵7 d,待液面產(chǎn)生薄膜即可得到紅茶菌菌液[11]。

    1.3.2 工藝流程

    1.3.3 操作要點(diǎn)

    1.3.3.1 枸杞汁的制備

    挑選肉厚、無(wú)腐爛、無(wú)霉變褐變的寧夏枸杞。用流動(dòng)水多次沖洗枸杞表面的灰塵或污物。清洗后的枸杞在40~50 ℃水中浸泡30 min。浸泡好的枸杞放入榨汁機(jī)中,按照1∶5 (g/mL)的比例加水,進(jìn)行破碎打漿。將枸杞漿料壓榨使渣滓分離得濾液,渣料加2倍水于水浴鍋中浸提2次,濾液同浸提液混合得枸杞汁。

    1.3.3.2 山藥汁的制備

    挑選新鮮無(wú)蟲害、無(wú)霉?fàn)€、無(wú)機(jī)械損傷的淮山藥,用流動(dòng)水沖洗干凈,刮刀去表皮,切成10~15 cm的山藥段,立即放入90~95 ℃的熱水中,熱燙5 min,鈍化酶的活性。山藥段撈出放涼,切成2~3 mm的山藥片。將山藥片按照1∶3 (g/mL)的比例加水,再添加0.05%的異抗壞血酸鈉進(jìn)行護(hù)色處理30 min。護(hù)色后的山藥經(jīng)清水漂洗后,放入榨汁機(jī)中,按照1∶5 (g/mL)的比例加水,制備山藥漿。將山藥漿置于90~95 ℃的水浴鍋中糊化30 min,冷卻至55 ℃時(shí)加入0.05 mg/g的α-淀粉酶進(jìn)行恒溫酶解3 h,然后采用1%的檸檬酸將山藥漿液的pH調(diào)至5.0,加入0.1 mg/g的糖化酶進(jìn)行55 ℃恒溫酶解2 h,最后將山藥漿液加熱至95 ℃保持10 min,進(jìn)行滅酶處理,過濾到山藥汁[12]。

    1.3.3.3 調(diào)配混勻

    將制備好的山藥汁、枸杞汁按照體積比5∶3進(jìn)行混合,用1%的檸檬酸鈉將混合液的pH調(diào)至4.5,并調(diào)節(jié)其至適宜的初始糖度。

    1.3.3.4 高溫滅菌

    調(diào)配混勻后的山藥枸杞混合液在高壓蒸汽滅菌鍋中121 ℃滅菌15 min,冷卻備用。

    1.3.3.5 紅茶菌的接種與發(fā)酵

    將冷卻后的山藥枸杞混合液接入活化后的紅茶菌中,放入恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵5 d,若時(shí)間再延長(zhǎng),會(huì)產(chǎn)生其他代謝產(chǎn)物,使果醋口味發(fā)生不良變化。

    1.3.3.6 澄清

    用1%殼聚糖對(duì)山藥枸杞果醋進(jìn)行澄清。用量為果醋總量0.5%,靜置1.5 h。

    1.3.3.7 殺菌

    將制備好的山藥枸杞果醋放于合適的包裝瓶中,封好后進(jìn)行巴氏殺菌。

    1.3.4 山藥枸杞汁最佳配比的確定

    依次將山藥汁與枸杞汁按照7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7的配比混合均勻,結(jié)合上述工藝流程及操作要點(diǎn),調(diào)整山藥枸杞的初始糖度為18%,紅茶菌接種量為16%,發(fā)酵溫度為30 ℃,在恒溫培養(yǎng)箱中靜置發(fā)酵5 d,制得山藥枸杞復(fù)合果醋,利用感官評(píng)價(jià)指標(biāo)確定山藥枸杞汁的最佳配比。

    1.3.5 果醋發(fā)酵工藝優(yōu)化單因素試驗(yàn)

    取上述處理好的山藥枸杞汁(以其總量計(jì)),在紅茶菌接種量為12%、16%、20%、24%、28%,初始糖度為14%、16%、18%、20%、22%,發(fā)酵溫度為22,26,30,34,38 ℃的條件下發(fā)酵5 d進(jìn)行單因素試驗(yàn),研究這3個(gè)因素對(duì)果醋發(fā)酵產(chǎn)酸量的影響。

    1.3.6 果醋發(fā)酵工藝優(yōu)化響應(yīng)面試驗(yàn)

    在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選取紅茶菌接種量、初始糖度、發(fā)酵溫度為考察因素,總酸含量為響應(yīng)值,運(yùn)用Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)山藥枸杞果醋發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化,各因素水平見表1。

    表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素及水平Table 1 The factors and levels of response surface test

    1.3.7 分析檢測(cè)方法

    1.3.7.1 感官評(píng)價(jià)

    取山藥枸杞果醋2 mL于25 mL具塞比色管中,加水至刻度,振搖,觀察色澤。取山藥枸杞果醋30 mL于50 mL燒杯中觀察狀態(tài)。用玻璃棒攪拌,品嘗滋味,聞其氣味。參照GB/T 18187—2000《釀造食醋》中的感官指標(biāo)要求,從色澤、滋味和氣味、狀態(tài)3個(gè)方面對(duì)果醋進(jìn)行感官評(píng)價(jià)。

    1.3.7.2 理化指標(biāo)的測(cè)定

    總酸含量測(cè)定:參照GB/T 12456—2008《食品中總酸的測(cè)定》中的酸堿滴定法,以醋酸(g/dL)計(jì)。

    可溶性固形物含量測(cè)定:參照NY/T 2637—2014《水果和蔬菜可溶性固形物含量的測(cè)定 折射儀法》。

    1.3.7.3 微生物指標(biāo)的測(cè)定

    菌落總數(shù)及大腸菌群測(cè)定:參照GB 4789.2—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》。

    1.3.8 數(shù)據(jù)處理

    使用Excel 2010 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并繪制圖表,用Design Expert 11進(jìn)行響應(yīng)面分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 山藥枸杞汁最佳配比

    由不同配料比混勻的山藥枸杞汁在一定的初始糖度和溫度下,由紅茶菌發(fā)酵而成的果醋的感官評(píng)價(jià),見表2。

    表2 山藥-枸杞最佳配比的感官評(píng)價(jià)Table 2 The sensory evaluation of the optimal ratio of Chinese yam to Lycium barbarum

    由表2可知,當(dāng)山藥汁與枸杞汁的配比為4∶6時(shí),色澤、滋味和氣味及狀態(tài)最符合感官要求。因此,選用山藥汁與枸杞汁的配比為4∶6。

    2.2 山藥枸杞果醋發(fā)酵工藝優(yōu)化單因素試驗(yàn)

    2.2.1 紅茶菌接種量對(duì)果醋總酸含量的影響

    在初始糖度18%、發(fā)酵溫度30 ℃的條件下,研究不同紅茶菌接種量對(duì)山藥枸杞果醋發(fā)酵產(chǎn)酸的影響,結(jié)果見圖1。

    圖1 紅茶菌接種量對(duì)果醋總酸含量的影響Fig.1 Effect of Kombucha inoculation amount on the total acid content of fruit vinegar

    由圖1可知,隨著紅茶菌接種量的增大,果醋總酸含量呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后緩慢下降的趨勢(shì)。這是由于隨著接種量不斷增加,菌體會(huì)出現(xiàn)大量增殖,一方面會(huì)生成大量的代謝產(chǎn)物,導(dǎo)致細(xì)胞過早老化、自溶等現(xiàn)象,另一方面,菌體大量繁殖所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量減少,從而導(dǎo)致果醋總酸含量下降[13]。因此,選擇合適的紅茶菌接種量有利于控制菌種密度和總酸含量,最佳接種量為16%。

    2.2.2 初始糖度對(duì)果醋總酸含量的影響

    在紅茶菌接種量16%、發(fā)酵溫度30 ℃的條件下,研究不同初始糖度對(duì)山藥枸杞果醋發(fā)酵產(chǎn)酸的影響,結(jié)果見圖2。

    圖2 初始糖度對(duì)果醋總酸含量的影響Fig.2 Effect of initial sugar content on the total acid content of fruit vinegar

    由圖2可知,隨著初始糖度的增加,果醋總酸含量先增大后減小。這是由于足夠的碳源可以使得菌體生長(zhǎng)代謝產(chǎn)生豐富的有機(jī)酸和其他有益成分,但初始糖度過大,即混合液的滲透壓過大,會(huì)導(dǎo)致菌體細(xì)胞脫水引起質(zhì)壁分離,從而不利于其生長(zhǎng)與發(fā)酵[14-15]。因此,要選擇合適的初始糖度,太高或太低都不利于其發(fā)酵,最佳初始糖度為18%。

    2.2.3 發(fā)酵溫度對(duì)果醋總酸含量的影響

    在紅茶菌接種量16%、初始糖度18%的條件下,研究不同發(fā)酵溫度對(duì)山藥枸杞果醋發(fā)酵產(chǎn)酸的影響,結(jié)果見圖3。

    圖3 發(fā)酵溫度對(duì)果醋總酸含量的影響Fig.3 Effect of fermentation temperature on the total acid content of fruit vinegar

    由圖3可知,隨著溫度的上升,果醋總酸含量先上升后下降。溫度是影響微生物生長(zhǎng)與發(fā)酵的重要因素。當(dāng)溫度升高時(shí),微生物細(xì)胞內(nèi)的酶活性提高,反應(yīng)加快,產(chǎn)酸較高;但溫度過高時(shí),細(xì)胞內(nèi)酶失活,不利于微生物生長(zhǎng),從而產(chǎn)酸較少。因此,紅茶菌發(fā)酵的最佳溫度為30 ℃。

    2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)

    2.3.1 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果及因素交互

    根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果及表1中試驗(yàn)因素水平編碼設(shè)計(jì)進(jìn)行Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì),結(jié)果見表3,回歸模型方差分析見表4。

    表3 Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Box-Benhnken test design and results

    運(yùn)用軟件Design-Expert 11對(duì)表3中試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多元二次回歸擬合,得到總酸含量(Y)與紅茶菌接種量(A)、初始糖度(B)、發(fā)酵溫度(C)的回歸方程:Y=4.62+0.2738A+0.0863B+0.1100C-0.0725AB-0.0600AC+0.1050BC-0.4773A2-0.2523B2-0.7297C2。

    表4 回歸模型方差分析Table 4 Variance analysis for regression model

    由表4可知,該模型影響極顯著(P<0.0001),回歸方程相關(guān)系數(shù)R2=0.9863,決定系數(shù)(調(diào)整相關(guān)系數(shù))RAdj2=0.9688,能在96.88%的變化范圍內(nèi)解釋響應(yīng)值的變化,且失擬項(xiàng)不顯著(P=0.2535>0.05),說明該模型擬合程度好,誤差不大,適用于山藥枸杞果醋發(fā)酵工藝的優(yōu)化。

    此外,在所選取的各因素水平范圍內(nèi),A、A2、B2、C2所對(duì)應(yīng)的P值均小于0.01,說明這幾個(gè)因素對(duì)結(jié)果有極顯著影響;B,C所對(duì)應(yīng)的P值均小于0.05,說明這兩個(gè)因素對(duì)結(jié)果有顯著影響;交互項(xiàng)AB、AC、BC所對(duì)應(yīng)的P值均大于0.05,說明各因素之間有一定的交互作用,但交互不顯著。同時(shí)根據(jù)F值的大小可以得出3個(gè)因素對(duì)結(jié)果影響的主次順序?yàn)锳>C>B,即紅茶菌接種量>發(fā)酵溫度>初始糖度。

    2.3.2 優(yōu)化工藝確定和驗(yàn)證試驗(yàn)

    經(jīng)響應(yīng)面回歸分析得到的最優(yōu)發(fā)酵工藝為紅茶菌接種量17.08%,初始糖度18.29%,發(fā)酵溫度30.30 ℃,在此條件下山藥枸杞果醋總酸含量的理論值達(dá)到4.67 g/dL。根據(jù)實(shí)際的試驗(yàn)條件,將最佳工藝條件調(diào)整為紅茶菌接種量17%,初始糖度18%,發(fā)酵溫度30 ℃。在最佳條件下進(jìn)行了3次驗(yàn)證試驗(yàn),果醋總酸含量的平均值為4.65 g/dL,與理論預(yù)測(cè)值的相對(duì)誤差較小,表明Box-Benhnken設(shè)計(jì)響應(yīng)面法得到的發(fā)酵工藝是可信的。

    2.4 山藥枸杞果醋的質(zhì)量指標(biāo)

    2.4.1 感官指標(biāo)

    色澤:淡紅色;氣味:具有果醋的特殊風(fēng)味,氣味純正;滋味:酸甜適中,濃郁醇香,無(wú)異味;狀態(tài):澄清透亮,穩(wěn)定均勻,無(wú)沉淀,無(wú)雜質(zhì)。該果醋具有山藥和枸杞的果香和醋香,其感官指標(biāo)符合GB/T 18187—2000《釀造食醋》中的要求。

    2.4.2 理化指標(biāo)

    總酸(以醋酸計(jì)):4.65 g/dL;可溶性固形物含量為2.2%,符合GB/T 18187—2000《釀造食醋》中的具體要求。

    2.4.3 微生物指標(biāo)

    菌落總數(shù)≤100 CFU/mL;大腸桿菌及其他致病菌未檢出,該指標(biāo)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

    3 結(jié)論

    以山藥和枸杞為原料,利用紅茶菌中的酵母菌、醋酸菌和乳酸菌等共生物協(xié)同對(duì)山藥枸杞混合汁進(jìn)行發(fā)酵,制備山藥枸杞果醋。山藥汁與枸杞汁的配比為4∶6,控制初始糖度為18%,紅茶菌接種量為17%,于30 ℃條件下發(fā)酵5 d,得到果醋成品,總酸含量為4.65 g/dL。此工藝條件簡(jiǎn)單,易于控制,制得山藥枸杞果醋的感官、理化和微生物指標(biāo)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),且具有良好的風(fēng)味。

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