eIF4E與HER-2在乳腺癌中的相關(guān)性研究 ①①

劉英霞，陳明銓，張梅燕，鐘 鳴，趙文麗

(惠州市第一人民醫(yī)院病理科，廣東 惠州 516000)

乳腺癌在臨床上并不少見，男、女均可發(fā)病，但以女性患者居多，占到了總數(shù)的99%以上[1]。eIF4E為真核細(xì)胞翻譯起始因子，是真核細(xì)胞翻譯起始和調(diào)控的核心成分，在蛋白質(zhì)翻譯過程中發(fā)揮重要作用[2]。HER-2為人類表皮生長因子受體家族成員，與配體相互作用，通過細(xì)胞信號通路調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、生存、分化和增殖[3]。本實驗擬通過RT-PCR、熒光原位雜交及免疫組化等技術(shù)，結(jié)合患者治療、后期生存等情況運用統(tǒng)計學(xué)方法從DNA、蛋白到臨床來全面分析HER-2與eIF4E之間可能存在的聯(lián)系，為完善乳腺癌的個體生物治療提供較為初步的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院乳腺良性增生及乳腺癌患者標(biāo)本各50例進(jìn)行研究，分為良性組和惡性組。良性組：年齡32～58歲，平均(43.12±3.62)歲；已婚43例，未婚7例。惡性組：年齡35～60歲，平均(44.20±3.78)歲；腫瘤直徑1.5～4.0cm，平均(2.67±0.45)cm；已婚45例，未婚5例；組織學(xué)分級：1級12例，2級30例，3級8例；病理分型：浸潤性導(dǎo)管癌41例，其它9例。全部乳腺癌患者，均行乳腺癌改良根治術(shù)，術(shù)后經(jīng)病理科證實為乳腺癌。

1.2 檢測方法

對收集的標(biāo)本經(jīng)固定、脫水、石蠟包埋等技術(shù)制成蠟塊；切片、烘烤及染色處理制成相應(yīng)的HE玻片以供后期免疫組化及熒光原位雜交所需玻片。

1.2.1 RT-PCR檢測eIF4E表達(dá)

收集轉(zhuǎn)染48h的細(xì)胞，Trizol式劑提取細(xì)胞總RNA，根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書的方法反轉(zhuǎn)錄成eDNA。以eDN^為模板，引物5’-ACG GAA TCT AAT CAG GT-3’(上游)，5’-TTC CCA CAT AGC CTC AAT A-3’(下游)，用以檢測elF4E基因表達(dá)，擴增產(chǎn)物長度246bp。eIF-4E陽性染色均主要在細(xì)胞胞質(zhì)，高倍鏡選取5個高倍視野，以胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)明顯棕褐色顆粒或黃色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，隨機選擇5個高倍鏡視野，計數(shù)500個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞百分率，染色強度打分標(biāo)準(zhǔn):0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。

1.2.2 免疫組化技術(shù)檢測HER-2表達(dá)

所用抗體為兔抗人c-erb B-2單克隆抗體，稀釋為1：500，購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。兔抗人ALDH1多克隆抗體，稀釋為1：500。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件，選用多組有序變量的秩和檢驗和χ2檢驗，Pearson相關(guān)性分析方法進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組eIF4E與HER-2表達(dá)的比較

惡性組患者eIF4E表達(dá)陽性率、強陽性率和HER-2表達(dá)陽性率、強陽性率均明顯高于良性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，兩組弱陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組eIF4E與HER-2表達(dá)的比較[n=50,n(%)]

2.2 eIF4E與HER-2表達(dá)相關(guān)性分析

eIF4E陰性時，HER-2表達(dá)陽性率為60.60%(20/33)；eIF4E陽性時，HER-2表達(dá)陽性率為88.23%(15/17)。在乳腺癌干細(xì)胞中，eIF4E與HER-2的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 eIF4E與HER-2表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞異常增殖、凋亡密切相關(guān)，其治療手段也多種多樣。在乳腺癌的預(yù)后與治療方面，目前已建立了如雌、孕激素受體等的生物標(biāo)志物來作為預(yù)后因素與乳腺癌患者內(nèi)分泌治療反應(yīng)的預(yù)測[4]。最近表皮生長因子受體2(HER-2)成為新成員，用來作為預(yù)后因素和某些化療方案的預(yù)測?，F(xiàn)階段，在浸潤性癌患者中，評估這些生物標(biāo)志物被認(rèn)為是標(biāo)準(zhǔn)治療方式。在過去的十多年間，生物標(biāo)志物改變了乳腺癌的早期診斷，新進(jìn)的成像方法和篩選方案，則更加強調(diào)需要生物標(biāo)志物檢測患者有無殘余病變，來明確新的治療策略的潛在價值。隨著高通量技術(shù)的引入，許多基因的特征已被確定，有可能超越傳統(tǒng)的標(biāo)志物。

eIF4E通過選擇性地與mRNA5′帽子結(jié)構(gòu)(m7GpppN)結(jié)合，在蛋白質(zhì)翻譯過程中發(fā)揮重要作用[5]。當(dāng)其表達(dá)過度時，“弱” mRNA基因產(chǎn)物上調(diào)，這些產(chǎn)物包括原癌基因及一些重要的細(xì)胞細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白ODC、CDK4和cyclinD1；轉(zhuǎn)錄因子c-myc和Fos；促進(jìn)細(xì)胞生長和血管生成的蛋白FGF-2和VEGF；以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤和存活的蛋白MMp9和Bcl-2等[6]。從而促進(jìn)細(xì)胞存活、抗凋亡、惡性轉(zhuǎn)化、侵襲轉(zhuǎn)移和血管形成等。HER-2作為人表皮生長因子受體，對乳腺癌預(yù)后的指導(dǎo)意義僅次于淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況[7]。它由位于17號染色體q21區(qū)帶上的基因編碼，具有酪氨酸激酶活性，是表皮生長因子受體家族的成員之一，有研究等通過實驗發(fā)現(xiàn)HER-2高表達(dá)的乳腺癌組織中mTOR蛋白水平及基因水平表達(dá)均增高，由此推測HER-2高表達(dá)可能進(jìn)一步激活mTOR(雷帕霉素靶蛋白)信號通路，組成信號級聯(lián)，活化mTOR等下游信號[8]。此通路促進(jìn)物質(zhì)代謝、參與細(xì)胞凋亡、自噬，在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演不可忽視的作用。目前許多研究表明mTOR通路的激活可能與乳腺癌能分泌治療耐藥相關(guān)，阻斷此通路有助于消除耐藥，維持藥物的敏感性。mTOR通路含有兩種復(fù)合物，分別為mTORC1和mTORC2，mTORC1發(fā)揮著更為重要作用，其上游的激活通路之一Ins/IGF(胰島素信號通路)通過細(xì)胞膜上的受體介導(dǎo)激活Ras(GTP酶)、Raf，磷酸化激活MEK(絲裂原活化蛋白激酶1)、MAPK1/2(絲裂原活化蛋白激酶1/2)，經(jīng)過抑制mTORC1的抑制物而間接激活mTORC1；mTORC1激活后通過磷酸化激活4E-BP1，而4E-BP1是eIF4E的結(jié)合蛋白，mTOR通路可以通過此達(dá)到抑制翻譯起始的作用。本研究結(jié)果顯示，在乳腺癌患者中，eIF4E與HER-2均有較高的陽性表達(dá)率，說明呈現(xiàn)出高表達(dá)的現(xiàn)象，而這與上述有關(guān)報道或研究相一致。進(jìn)一步對乳腺癌患者中eIF4E與HER-2表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，二者呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)(P<0.05)。但由于乳腺癌樣本較少，兩者關(guān)系并不能確定，需要進(jìn)行更多大樣本的研究。

綜上所述，eIF4E與HER-2在乳腺癌中陽性表達(dá)率均比較高，二者呈正相關(guān)，加強對其檢測，可為乳腺癌的防治提供科學(xué)參考。