滋陰方治療排卵障礙性不孕癥的機制及價值：基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法

羅倩倩，談 勇，胡榮魁，夏 云，夏桂成

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京210029

女性無避孕性生活至少12月而未孕，稱為不孕癥，在我國發(fā)病率達7%～10%，其中排卵障礙占25%～35%［1］。臨床上常通過促排卵方法促進卵泡成熟，常用藥物有枸櫞酸克羅米芬（CC）、來曲唑（LE）、促性腺激素（Gn）等，然而運用不當(dāng)可能會引起卵巢過度刺激綜合征（OHSS），多胎妊娠等。另外，即使運用促排卵藥物，但仍有卵泡發(fā)育遲緩，或卵泡不發(fā)育等情況發(fā)生。對高齡女性促排卵藥物的過度使用，可能增加乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的潛在風(fēng)險［2］。因此尋求有效、安全的促排卵方案顯得尤為重要。滋陰方是導(dǎo)師談勇教授經(jīng)驗方（專利號：ZL200410041406.0），是基于國醫(yī)大師夏桂成教授“調(diào)周”理論而擬方，具體用藥：當(dāng)歸、白芍、干地黃、山茱萸、菟絲子，經(jīng)過多年臨床實踐，療效確切。長期的臨床觀察證實其促進卵泡發(fā)育療效較好［3-4］。相關(guān)實驗研究滋陰方含藥血清可明顯增加顆粒細胞E2的分泌量,降低P的分泌量，認為滋陰方可通過調(diào)節(jié)顆粒細胞的分泌功能進而改善類PCOS的卵巢功能［5］。然其治療機制尚未完全闡明，仍有待繼續(xù)明確。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法在中藥復(fù)方研究領(lǐng)域中的應(yīng)用較多,為其現(xiàn)代化研究提供了新的思路與方法［6］。本研究擬通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析，探討其組方治療該病可能機制，以期為后續(xù)動物實驗提供方向，為臨床提供理論依據(jù)。于此同時，設(shè)計臨床對照試驗，通過觀察滋陰方對卵泡發(fā)育和周期結(jié)局的影響，進一步驗證其臨床有效性。

1 資料和方法

1.1 滋陰方活性成分的收集及篩選

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫（http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）收集滋陰方（當(dāng)歸、白芍、干地黃、山茱萸、菟絲子）的主要活性成分。篩選條件為：藥物相似性（DL）＞0.18，口服生物利用度（OB）≥30%作為篩選閾值。

利用PubChem（https://pubchem.nehi.nlm.nih.gov）對其分子結(jié)構(gòu)進行確證，獲得其Canonical SMILES字符串（SMILES）。

1.2 滋陰方作用靶點的收集

我們利用化學(xué)相似性，通過Swiss Target Prediction（http://www.swisstargetprediction.ch/），將查詢到的Canonical SMILES 字符串輸入進行靶點對接，獲得上述中藥的潛在靶點基因，即為活性成分作用靶點。用Excel整理藥物活性成分-作用靶點。

1.3 疾病靶點預(yù)測

我們運用GeneCards 數(shù)據(jù)庫（http://www.genecards.org/），以“ovulation failure infertility”為關(guān)鍵詞進行搜索，收集與排卵障礙性不孕癥相關(guān)的基因靶點信息，并導(dǎo)入UniProt數(shù)據(jù)庫（https://www.uniprot.or-g/），經(jīng)名稱-ID配對獲得這些基因靶點的相應(yīng)UniProt ID。將主要活性成分靶點和疾病靶點取交集，獲得滋陰方治療排卵障礙性不孕癥的靶點。用excel整理藥物活性成分-疾病靶點，導(dǎo)入Cytoscape3.6.0軟件，進行網(wǎng)絡(luò)風(fēng)格化顯示。

1.4 構(gòu)建靶基因PPI網(wǎng)絡(luò)

我們使用STRING 數(shù)據(jù)庫（http://www.string-db.org/）進行蛋白-蛋白相互作用（PPI）分析，導(dǎo)入篩選出共同靶點，將蛋白種類設(shè)置為“homo sapiens”，最低相互作用閾值設(shè)為“highest confidence”（0.9），構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)圖。導(dǎo)入Cytoscape軟件，進行NetworkAnalyzer分析，然后根據(jù)Degree值篩選關(guān)鍵靶點。

1.5 GO、KEGG分析

我們通過DAVID（https://david.ncifcrf.gov/）網(wǎng)站，借助“Functional Annotation Tool”對共同靶基因進行GO富集分析，以P＜0.05和FDR＜0.05 為標(biāo)準(zhǔn)篩選。并對潛在靶點進行KEGG 分析，同樣以P＜0.05和FDR＜0.05 為篩選標(biāo)準(zhǔn)，通過R軟件繪制氣泡圖展示結(jié)果。

1.6 構(gòu)建中藥-有效成分-靶點-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)

我們利用cytoscape3.6.0軟件分別構(gòu)建中藥-有效成分、有效成分-靶點、靶點-信號通路網(wǎng)絡(luò)，利用“Merge”功能進行合并，構(gòu)建中藥-有效成分-靶點-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)。

1.7 臨床驗證

1.7.1 臨床資料 選取2019年1～12月于江蘇省中醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科門診就診的排卵障礙性不孕癥患者，共60例。排卵障礙性不孕癥診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）無避孕性生活至少12個月而未孕，其中從未妊娠者稱為原發(fā)性不孕；曾有過妊娠而后未避孕連續(xù)1年不孕者稱為繼發(fā)性不孕；（2）基礎(chǔ)體溫測定：單相或不典型雙相型，溫差小于0.3 ℃，緩慢上升持續(xù)時間小于10 d；（3）卵泡監(jiān)測：周期第10天開始，B超連續(xù)監(jiān)測卵泡，晚期或尿促黃體生成素（LH）峰值日優(yōu)勢卵泡平均直徑＜18 mm，或有成熟卵泡而無排卵征象；（4）血清孕酮低于黃體期水平。其中（1）必備，（2）～（4）項中符合其中2項者即可診斷。（參考第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》《不孕不育專家推薦診療方案》、《人類輔助生殖技術(shù)規(guī)范》2003版）。

1.7.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 年齡：21～35歲；符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)；至少3個自然周期B超監(jiān)測無優(yōu)勢卵泡發(fā)育，即無排卵征象；基礎(chǔ)促卵泡生成素（FSH）：5～10 mU/mL；1年內(nèi)子宮輸卵管造影示至少有一側(cè)輸卵管通暢；受試者同意并簽署知情同意書。

1.7.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 先天性生理缺陷或畸形、染色體異常、生殖器官器質(zhì)性病變（子宮肌瘤、子宮腺肌癥、卵巢囊腫、生殖器腫瘤及癌前病變等）；高泌乳素血癥、甲功異常；合并心血管、肝、腎、造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)疾病、精神病者；已知對所有藥物過敏者；正在使用口服避孕藥、糖皮質(zhì)激素等激素藥物者；正在參加其他藥物臨床試驗者；配偶少弱畸精癥者。

1.7.4 剔除和脫落病例標(biāo)準(zhǔn) 患者未按規(guī)定用藥，無法判定療效或資料不全等影響療效者；治療過程中發(fā)生嚴重不良反應(yīng)者。

1.7.5 治療方法

1.7.5.1 分組方法 將60例病人按隨機數(shù)字表法分為2組：試驗組和對照組各30人。兩組均采用西藥促排治療，試驗組在此基礎(chǔ)上于經(jīng)后期加用中藥滋陰方。本試驗通過南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審批（批件號：2018NL-120-03）。

1.7.5.2 服藥方法（1）試驗組促排卵方法：于經(jīng)周第3～5天口服CC 1～2片/d，連服5 d，于經(jīng)周第8天開始B超下監(jiān)測卵泡，并根據(jù)卵泡生長情況，酌情添加促性腺激素（HMG）（樂寶得，規(guī)格75 U/支）。當(dāng)優(yōu)勢卵泡直徑≥18 mm 時，肌注絨毛膜促性腺激素（HCG）5000～10 000 U，囑患者24 h后同房，48 h后B超下確定卵泡是否排出，若卵泡排出后則開始口服地屈孕酮健黃體治療，地屈孕酮服用方法為2次/d，2片/次，連服14 d。2周后測血清β-HCG，若β-HCG 結(jié)果陽性提示妊娠，保胎治療。若β-HCG陰性，則停服地屈孕酮，繼續(xù)下1周期治療。滋陰方服用方法：于月經(jīng)干凈后即服用經(jīng)后滋陰方，當(dāng)卵泡平均直徑≥18 mm（肌注HCG日）時停用中藥；（2）對照組：不服用中藥，余治療同試驗組。兩組均以3月經(jīng)周期為觀察期限，若妊娠，則終止試驗。

1.7.6 觀察指標(biāo) HMG用量、卵泡發(fā)育天數(shù)、扳機日單個優(yōu)勢卵泡E2水平、周期排卵率、未破裂卵泡黃素化綜合征（LUFS）發(fā)生率、周期妊娠率。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS23.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料用t檢驗，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計數(shù)資料用卡方檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 滋陰方活性成分

通過TCMSP 數(shù)據(jù)庫，結(jié)合“DL＞0.18”與“OB＞30%”篩選出滋陰方中可被口服吸收的48個活性成分，去除重復(fù)后得到40個活性成分。通過PubChem查找40 個成分的SMILES 字符串，得到有SMILES 字符串的活性成分24個（表1）。

2.2 滋陰方活性成分靶點預(yù)測結(jié)果

借助Swiss Target Prediction 網(wǎng)站，得到每個成分對應(yīng)的基因靶點，導(dǎo)出數(shù)據(jù)，共1152個成分靶點，去重后剩余354個靶點。需要指出的是MOL000492沒有預(yù)測到相關(guān)靶點，而MOL005486預(yù)測所得的靶點Probability均為0，故將二者予以剔除，剩余22個活性成分及354個靶點。

2.3 排卵障礙性不孕癥靶點預(yù)測結(jié)果

通過GeneCards數(shù)據(jù)庫檢索排卵障礙性不孕癥，共得到789個與排卵障礙性不孕癥相關(guān)的基因，作為疾病候選靶點基因。并提取各基因和排卵障礙性不孕癥的相關(guān)度，將基因名導(dǎo)入UniProt數(shù)據(jù)庫，經(jīng)名稱-ID配對后獲得Uniprot ID 791個。將主要活性成分靶點和疾病靶點取交集，獲得滋陰方治療排卵障礙性不孕癥的靶點96個（表2）。應(yīng)用R軟件繪制疾病靶點與藥物成分靶點韋恩圖（圖1）。

2.4 有效成分-疾病靶點網(wǎng)絡(luò)

用Excel表格整理“成分-靶點”對，導(dǎo)入Cytoscape 3.6.0 軟件，進行網(wǎng)絡(luò)風(fēng)格化顯示（圖2）。該網(wǎng)絡(luò)共有節(jié)點118個，邊405條，其中22個節(jié)點代表滋陰方活性成分，96個節(jié)點代表滋陰方治療排卵障礙性不孕癥的靶點。

2.5 構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)

我們將篩選出的96個共同靶點導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫進行分析，將蛋白種類設(shè)置為“homo sapiens”，最低相互作用閾值設(shè)為“highest confidence”（0.9），獲得PPI網(wǎng)絡(luò)圖（圖3A）。并導(dǎo)入Cytoscape軟件，進行Network-Analyzer分析，然后根據(jù)Degree值篩選關(guān)鍵靶點，其中度 值≥9 的 蛋 白 有10 個，分 別 為SRC、MAPK1、HSP90AA1、MAPK3、PTPN11、ESR1、AKT1、EGFR、NR3C1、KNG1（圖3B）。

2.6 GO分析

將96個共同靶基因?qū)隓AVID網(wǎng)站，獲得72條GO Term，其中關(guān)于生物學(xué)過程48條，細胞組成9條，分子功能15條。我們主要分析關(guān)鍵靶點生物學(xué)過程，發(fā)現(xiàn)主要集中在類固醇激素介導(dǎo)的信號通路、RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄起始、ERK1和ERK2級聯(lián)陽性調(diào)節(jié)、氧化還原過程、蛋白磷酸化的正調(diào)控、凋亡過程負調(diào)控、MAP激酶活性的正向調(diào)節(jié)、細胞內(nèi)受體信號通路、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶信號通路、類固醇代謝過程、對雌激素反應(yīng)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、炎性反應(yīng)負調(diào)控、對缺氧的反應(yīng)、正向調(diào)控凋亡過程、正向調(diào)控細胞生長、糖皮質(zhì)激素生物合成的過程、雄激素生物合成的過程、類固醇生物合成的過程等方面（表3）。

2.7 KEGG通路富集

將96個共同靶基因?qū)隓AVID網(wǎng)站進行KEGG通路富集分析，以P＜0.05，F(xiàn)DR＜0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn)，共得到富集通路11條（圖4、表4），包括癌癥通路、癌癥中的蛋白聚糖、PI3K-Akt信號通路、Rap1信號通路、HIF-1信號通路、雌激素信號通路、卵巢類固醇生成、前列腺癌、膀胱癌、類固醇激素生物合成、神經(jīng)膠質(zhì)瘤。

2.8 中藥-有效成分-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)及臨床觀察統(tǒng)計

為了闡明滋陰方作用于排卵障礙性不孕癥的潛在機制，我們構(gòu)建了由滋陰方中藥-有效成分-靶點-KEGG 通路組成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)（圖5）。該網(wǎng)絡(luò)顯示了多個通路中的相互作用，在該網(wǎng)絡(luò)中，有134 個節(jié)點（5個中藥節(jié)點、22個有效成分節(jié)點、96個排卵障礙相關(guān)靶點節(jié)點和11條富集通路節(jié)點）和574條邊。圖4和表4 顯示了這11 條信號通路的詳細信息。通過該網(wǎng)絡(luò)分析，表明了滋陰方中的5 種中藥協(xié)同作用，通過不同的信號通路途徑治療排卵障礙性不孕癥，60例患者均完成臨床觀察，但在治療過程中有2位對照組患者強烈要求服用中藥，故最終試驗組32人，對照組28人。其中試驗組周期數(shù)84個，對照組72個。試驗組HMG 用量少于對照組（P＜0.05），卵泡發(fā)育天數(shù)短于對照組（P＜0.05），班級日單個優(yōu)勢卵泡E2 水平高于對照組（P＜0.05），排卵率高于對照組（P＜0.05），妊娠率高于對照組（P＜0.05），而LUFS率未見明顯差異（P＞0.05）。臨床觀察統(tǒng)計結(jié)果見表5。

3 討論

西醫(yī)治療主要運用各種促排藥物進行促排，中藥在該病的治療中亦發(fā)揮著重要的作用［7］。《素問·陰陽應(yīng)象大論》“陰陽者，天地之道也”。國醫(yī)大師夏桂成教授立足于中醫(yī)“天人相應(yīng)”的觀點，重視陰陽消長轉(zhuǎn)化在女性生殖節(jié)律的核心作用環(huán)節(jié)，經(jīng)行過后即進入經(jīng)后期，以陰長為前提，通過陰藥的運用滋陰養(yǎng)血，奠定卵泡發(fā)育的基礎(chǔ)［8］。導(dǎo)師經(jīng)驗方滋陰方組成主要為陰藥，當(dāng)歸、白芍、干地黃為四物湯主藥，重在補血養(yǎng)陰，山茱萸入肝腎經(jīng)，重在補肝腎之陰，菟絲子為陽中之陰藥，在于陽中補陰，正如張景岳“善補陰者,必于陽中求陰,則陰得陽升而泉源不竭”，共奏助養(yǎng)卵泡之效，以助妊娠。本方旨在養(yǎng)陰，重在補養(yǎng)動態(tài)之陰，若不加以助陽，純以滋陰，則不易達到陰長趨向中高水平的要求，致后期卵泡發(fā)育停滯及經(jīng)間期重陰轉(zhuǎn)陽不利，致排卵障礙的發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，滋陰方活性成分22個，具體如文中表1。經(jīng)查閱文獻，發(fā)現(xiàn)Stigmasterol、beta-sitosterol與17β-雌二醇的結(jié)構(gòu)有很高的相似性，因此可作為雌激素激動劑［9］。通過微量滴定板將beta-sitosterol生物轉(zhuǎn)化為雄烯二酮（一種關(guān)鍵的藥物類固醇中間體）［10］。kaempferol、quercetin、isorhamnetin都屬于生物類黃酮，可抑制KGN細胞中雌激素的生物合成［11］。實驗證明kaempferol可以通過PI3K/AKT通路促進原始卵泡活化和細胞增殖，降低體外培養(yǎng)的羊腔前卵泡的DNA碎片［12］。研究分析顯示quercetin對豬和牛培養(yǎng)的顆粒細胞的影響，結(jié)果表明quercetin對可能具有物種特異性的基本卵巢細胞功能（增殖，凋亡和激素釋放）具有直接作用［13］。有研究旨在測試膳食quercetin對熱應(yīng)激雌性兔卵泡數(shù)量，凋亡，體外成熟率和卵母細胞質(zhì)量的調(diào)節(jié)作用［14］。結(jié)果表明quercetin可改善卵泡發(fā)育，減少顆粒細胞凋亡，并維持卵母細胞能力。而對于有效成分CRL則是卵巢性激素合成的重要底物，對卵泡發(fā)育有重要影響［1］。

表2 共同靶點基因列表Tab.2 Common target genes list

圖1 維恩圖Fig.1 Venn diagram.

圖2 有效成分-疾病靶點網(wǎng)絡(luò)Fig.2 Network of active ingredient-disease target.

上述有效成分對應(yīng)354個作用靶點，其中與排卵障礙性不孕癥相關(guān)的共同靶點96 個，其中包括SRC、MAPK1、HSP90AA1、MAPK3、PTPN11、ESR1、AKT1、EGFR、NR3C1、KNG1，為關(guān)鍵靶標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)SRC蛋白分布在原始卵泡的卵質(zhì)膜和顆粒細胞膜中，并且表達水平隨原始卵泡的生長而增加，通過PI3K-PKC-ERK1/2途徑在調(diào)節(jié)原始卵泡的活化和生長［15］。另有研究結(jié)果表明MAPK3/1蛋白在某些原始卵泡和所有生長的卵泡中表達［16］。用MAPK3/1信號抑制劑培養(yǎng)3 d可顯著減少活化卵泡的數(shù)量，并伴有明顯減少的顆粒細胞增殖和卵母細胞凋亡的增加。研究發(fā)現(xiàn)［17］，母體持續(xù)暴露于環(huán)境化合物污染對胎兒卵巢發(fā)育有影響，導(dǎo)致原始卵泡儲備減少，同時觀察到卵巢蛋白的改變主要在胎兒卵巢蛋白和熱休克家族的幾個成員（HSPA4L，HSP90AA1和HSF1）。Idrees 等［18］提及PTPN11在牛卵母細胞的成熟和胚胎發(fā)育中起著重要作用。雌激素是調(diào)節(jié)生育能力的必需激素。細胞對雌激素的反應(yīng)是由雌激素受體α（ESR1）和雌激素受體β（ESR2）介導(dǎo)的。在小鼠和大鼠模型中，ESR1的破壞會導(dǎo)致雄性和雌性不育［19］。AKT1在卵巢支持細胞譜系中的分子作用仍然知之甚少。有學(xué)者為了深入了解其在此類細胞中的功能，通過耗盡了AKT1在鼠原代顆粒細胞中的表達，證實了AKT1參與這種卵巢細胞類型的代謝，細胞凋亡，細胞周期或細胞骨架動力學(xué)的調(diào)節(jié)［20］。有研究綜述了EGF網(wǎng)絡(luò)在卵母細胞發(fā)育和排卵級聯(lián)調(diào)節(jié)中的作用，尤其著重于EGF網(wǎng)絡(luò)對卵母細胞發(fā)育能力的影響，總結(jié)了EGF網(wǎng)絡(luò)的急性上調(diào)是排卵級聯(lián)反應(yīng)的重要組成部分，因為它會將LH信號從卵泡周圍傳遞到卵母細胞復(fù)合體［21］。EGF信號下調(diào)，抑制卵母細胞減數(shù)分裂成熟并同時提供減數(shù)分裂誘導(dǎo)信號。EGF網(wǎng)絡(luò)還控制靜止卵母細胞的轉(zhuǎn)錄翻譯，這是卵母細胞能力不可或缺的過程。有研究觀察到顆粒細胞中的NR3C1免疫染色從原始卵泡到竇卵泡逐漸增加，所有卵泡類別的卵母細胞和顆粒細胞中都存在NR3C1，除了在原始卵泡的顆粒細胞中。PCOS以女性不育和代謝異常為特征，是最常見的內(nèi)分泌疾病之一［22］。有研究對PCOS患者中蛋白質(zhì)變化的進行分析，共納入43例PCOS患者和30例健康女性，證實了5種顯著降低的蛋白質(zhì)，其中包括KNG1［23］。

圖3 PPI網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 PPI network diagram.A:STRING;B:Cytoscape.

表3 共同靶基因GO富集分析Tab.3 GO enrichment analysis of common target genes

圖4 KEGG富集通路分析Fig.4 KEGG enrichment pathway analysis.

表4 共同靶點KEGG通路分析Tab.4 KEGG pathway analysis of common targets

圖5 中藥-有效成分-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)圖Fig.5 Network diagram of Chinese medicine-active ingredient-target-pathway.

表5 兩組促排卵情況及周期結(jié)局比較Tab.5 Comparation of ovulation induction and cycle outcome between experimental group and control group

經(jīng)過GO分析，發(fā)現(xiàn)其生物學(xué)過程主要集中在類固醇激素介導(dǎo)的信號通路、氧化、還原、凋亡等過程。根據(jù)KEGG分析的結(jié)果，與排卵障礙相關(guān)的通路包括PI3KAkt信號通路、Rap1信號通路、HIF-1信號通路、雌激素信號通路、卵巢類固醇生成、類固醇激素生物合成。缺氧誘導(dǎo)因子是細胞生長的主要調(diào)節(jié)因子。研究發(fā)現(xiàn)HIF是參與FSH對大鼠支持細胞增殖的調(diào)節(jié)［24］。研究證明HIF-1α在哺乳動物卵巢的卵泡生長發(fā)育過程中以細胞和階段特異性方式表達［25］。通過免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)印跡分析、顆粒細胞培養(yǎng)等實驗證明HIF-1α介導(dǎo)的信號通路可能是體內(nèi)調(diào)節(jié)哺乳動物卵巢卵泡生長和發(fā)育的重要機制。一篇綜述中提到從原始卵泡停滯到激活生長到卵母細胞成熟，哺乳動物雌性種系中基因組完整性的保留對于確保生殖成功至關(guān)重要［26］。由于卵母細胞是在出生前形成的，并且可能保持多年休眠狀態(tài)，因此必須對防御機制進行監(jiān)測并保持良好狀態(tài)，PTEN/PI3K/Akt是控制原始卵泡募集和生長的主要信號途徑，該途徑還有助于細胞生長，存活和代謝，并有助于維持基因組完整性。雌激素信號通路對正常卵泡發(fā)育至關(guān)重要，研究表明在體外成熟培養(yǎng)基中添加E2后，可以看到卵丘擴展和隨后卵母細胞發(fā)育的增加［27］。

我們通過臨床試驗發(fā)現(xiàn)，試驗組的HMG用量少，卵泡發(fā)育天數(shù)短，扳機日單個優(yōu)勢卵泡E2水平高，周期排卵率及妊娠率亦高，較對照組均有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。因此對于排卵障礙性不孕癥的患者，我們可以在西藥促排治療的同時加用中藥滋陰方，幫助孕卵生長，提高妊娠率。

綜上，滋陰方中多種有效活性可以通過不同的途徑發(fā)揮其促進卵泡發(fā)育的作用。中醫(yī)藥治療排卵障礙性不孕癥有獨特優(yōu)勢，多種中藥配伍使用，協(xié)同增效，相對于西藥促排卵其副作用明顯減少，同時排卵率及妊娠率明顯優(yōu)于單純西藥，具有良好的臨床應(yīng)用前景。