2019年河南省禽流感專項監(jiān)測評估

楊海波，劉 敏，靳 東，方先珍， 閆若潛

(河南省動物疫病預防控制中心，河南 鄭州 450000)

禽流感(Avian influenza，AI)是由正黏病毒科A型流感病毒屬禽流感病毒(AIV)引起的家禽、野鳥和部分哺乳動物發(fā)病的一種傳染病[1]。禽流感病毒分為高致病性禽流感病毒(HPAIV)、低致病性禽流感病毒(LPAIV)和無致病性禽流感病毒(NPAIV)[2,3]。H5和H7亞型為高致病性禽流感，不僅對養(yǎng)禽業(yè)危害嚴重，還能感染人，被OIE列為A類動物疫病，我國將其列為一類動物疫病[4]。2004年以來幾乎席卷全球并致數(shù)百人死亡的H5N1亞型禽流感的暴發(fā)，引起了我國政府和相關(guān)行政主管部門的高度重視，通過疫苗免疫和綜合監(jiān)管，有效控制了H5N1亞型高致病性禽流感的流行蔓延[5]。H7N9亞型禽流感從對雞無致病性逐漸變?yōu)楦咧虏⌒?，但是?jīng)過疫苗免疫后已得到控制[6]。H9N2亞型低致病性禽流感是我國家禽中存在最廣泛、傳播效力最高、傳播速度最快的禽流感。絕大多數(shù) H7N9 亞型禽流感病毒的內(nèi)部基因來自H9N2 亞型病毒，H9亞型禽流感病毒還可與其他病原體協(xié)同致病[7]。為加強高致病性禽流感的防控工作, 河南省動物疫病預防控制中心制定了《2019年河南省高致病性禽流感等動物疫病專項監(jiān)測方案》，并組織實施。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2019年3-5月,從河南省18個省轄市共采集5993份樣品，其中病原學樣品3532份，來自于114個場點(雞場97個、鴨場9個、鵝場5個、野鳥棲息地3個)，血清學樣品2461份，來自于82個場點(雞場71個、鴨場7個、鵝場4個)。采樣按照估計流行率方法，預設(shè) 90%的個體流行率、95%的置信水平和 10%的可接受誤差。每個省轄市隨機抽6個場點，采樣場點包括種禽場、商品禽場、水禽場、活禽交易市場、屠宰場，水網(wǎng)密集區(qū)選擇1個野鳥棲息地，每個目標群體隨機抽取30份樣品。

1.2 主要儀器與試劑

7500熒光定量PCR儀(ABI公司)；NP968全自動核酸提取儀(西安天隆科技有限公司)。

核酸提取試劑盒(批號E0119040111)，蘇州天隆生物科技有限公司生產(chǎn)；禽流感病毒實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒(批號20180620)、禽流感病毒H5/H7/H9亞型三重熒光RT-PCR 檢測試劑盒(批號20190221)、禽流感病毒H7N9實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒(批號20190221)均由哈爾濱國生生物科技有限公司生產(chǎn)；禽流感抗原H5亞型(Re-11株，批號20190416；Re-12株，批號20190415)、H7N9亞型(Re-2株，批號20190415)流感抗原均由哈爾濱維科生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測方法

參照國家標準 《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)[8]，采用血凝抑制試驗 (HI)檢測血清樣品。依據(jù)《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》 (GB/T1943.1-2001)、《動物流感檢測 H7N9亞型流感病毒雙重熒光 RT-PCR檢測方法》(GB/T35806-2018)檢測病毒核酸，檢測出的陽性樣品再用禽流感病毒H5/H7/H9型熒光RT-PCR方法檢測分型。

1.4 樣品的實驗室檢測

對采集的血清樣品，用HI檢測禽流感和H7N9免疫抗體。HI抗體效價≥24，判定為個體合格；存欄禽群抗體合格率≥70%，判定為群體合格。采集的咽肛拭子樣品的核酸提取按照試劑盒操作說明進行，取200 μL待檢樣品，加入到含胰酶的核酸提取板中，用磁珠法提取RNA，然后用熒光RT-PCR檢測試劑盒對核酸進行病原學檢測。

1.5 數(shù)據(jù)分析

將血清學和病原學檢測結(jié)果使用Excel 2010軟件進行數(shù)據(jù)錄入、整理及表格繪制，分別從空間分布、群間分布方面進行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 總體檢測情況

如表1所示，血清學共檢測82個養(yǎng)殖場的2461份血清樣品，其中75個場群禽流感H5亞型和H7N9亞型均合格，平均場群合格率均為91.5%。禽流感H5亞型檢測血清樣品2461份，檢出合格樣品2169份，禽流感H5亞型真實抗體合格率為92.7%(95%CI:91.7%～93.7%)。禽流感H7N9亞型檢測血清樣品2461份，檢出合格樣品2177份，H7N9亞型真實抗體合格率為93.0%(95%CI: 92.0%～94.0%)。上述結(jié)果說明我省高致病性禽流感H5亞型和H7N9亞型免疫效果較好。114個場點3532份病原學樣品未檢出高致病性禽流感病毒H5亞型和H7N9亞型，14個場點檢測出了90份禽流感H9亞型陽性，群體檢出率為12%，個體陽性率為2.55%。

表1 血清學和病原學監(jiān)測情況統(tǒng)計表

2.2 不同地區(qū)的檢測情況

不同地區(qū)的檢測結(jié)果見表2。不同地區(qū)禽流感病毒H5亞型的抗體合格率以豫南地區(qū)最高(94.8%)，豫北地區(qū)最低(77.5%)(P<0.05)；H7N9病毒的抗體合格率以豫南最高(99.1%)，豫西地區(qū)最低(79.9%)(P<0.05)。高致病性禽流感病毒H5亞型和H7N9亞型在全省5個區(qū)域均未檢出，低致病性禽流感病毒H9亞型共檢測出90份陽性，檢出率最高的是豫中地區(qū)，其次是豫南地區(qū)、豫北地區(qū)和豫東地區(qū)，豫西地區(qū)未檢測出陽性。

表2 不同區(qū)域的血清學和病原學檢測結(jié)果

2.3 不同類型場點的檢測情況

不同類型場點的免疫抗體合格率存在差異(表3)。禽流感病毒H5亞型的抗體合格率以商品場最高(93.4%)，屠宰場最低(41.8%)(P<0.05)；H7N9亞型病毒的抗體合格率以商品場最高(96.8%)，屠宰場最低(42.1%)(P<0.05)。病原學檢測結(jié)果顯示，屠宰場樣品禽流感病毒H9亞型的檢出率最高，陽性率為9.4%(31/330)；其次是農(nóng)貿(mào)市場，陽性率為9.3%(48/517)；商品場樣品的檢出率為0.47%(11/2324)；種禽場樣品未檢出陽性。

表3 不同類型場點的血清學和病原學檢測結(jié)果

2.4 不同家禽的檢測情況

共檢測2461份血清樣品，其中雞血清2131份、鴨血清210份、鵝血清120份。雞的抗體合格率最高，H5亞型和H7N9抗體合格率分別為88.1%和88.4%；鴨次之，H5亞型和H7N9抗體合格率分別為74.0%和90.0%；鵝的抗體合格率較低，H5亞型和H7N9抗體合格率分別為49.1%和45.0%。本次病原學監(jiān)測，只有雞樣品檢測出禽流感H9亞型核酸陽性，鴨、鵝、野禽樣品中均未檢測出禽流感H5亞型、H7N9亞型和H9亞型核酸陽性。

3 討論

全省高致病性禽流感H5亞型、H7N9亞型整體抗體合格率在國家標準之上，但是屠宰場樣品抗體合格率較低，存在一定的風險，經(jīng)回訪調(diào)查，部分場的雞免疫次數(shù)少，造成雞體內(nèi)抗體含量較低，不能對自身提供免疫保護。個別種禽場抗體合格率低是因為只免疫1次疫苗。鴨場、鵝場的抗體合格率普遍低于雞場，經(jīng)回訪調(diào)查，發(fā)現(xiàn)存在免疫程序執(zhí)行不到位和漏免的問題。禽流感病毒是分節(jié)段的負鏈單股RNA病毒，禽流感病毒流行情況和遺傳演化較為復雜,在復制過程中容易發(fā)生基因突變，存在廣泛的基因重排現(xiàn)象[9]，增大了該病的防治難度。建議廣大養(yǎng)殖戶繼續(xù)加強免疫，并做好抗體檢測，及時調(diào)整免疫方案。

高致病性禽流感H5亞型、H7N9病毒未檢測出核酸陽性，低致病性禽流感H9亞型的核酸陽性檢出率相對較高，說明我省的高致病性禽流感病毒的免疫工作做得比較好，但是低致病性禽流感存在不免疫和免疫次數(shù)較少的現(xiàn)象。雖然低致病性禽流感H9亞型引發(fā)禽的死亡率低于高致病性禽流感，但是造成的經(jīng)濟損失不亞于高致病性禽流感，有些低致病禽流感病毒甚至可以突破宿主屏障感染人并致死，具有重大的公共衛(wèi)生學意義。因此，在做好高致病性禽流感免疫工作的同時，要加強對低致病性禽流感的免疫，控制其蔓延和流行。

4 結(jié)論

河南省禽流感病毒抗體總體合格率大于85%，取得較好的防控效果。病原學結(jié)果顯示我省有H9亞型禽流感發(fā)生流行的風險，我省仍需要加強禽流感病毒的免疫工作，做好定期監(jiān)測和流行病學調(diào)查。