不同桉樹精油添加水平對籠養(yǎng)白羽肉雞生長性能、免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能的影響

秦國棟 譚子超 周 東 孫 強 李金寶 王述柏*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，青島266000；2.山東民和牧業(yè)股份有限公司，蓬萊265600；3.青島市即墨區(qū)畜牧發(fā)展服務(wù)中心，青島266000；4.山東龍昌動物保健品有限公司，德州253000)

近年來，有關(guān)植物精油在動物生產(chǎn)中的研究和應(yīng)用報道日漸增多。植物精油是一類來源于植物的花、葉、莖、根或果實的次生代謝產(chǎn)物，分子量較小，在動物體內(nèi)吸收代謝快、無毒無殘留，具有促進(jìn)動物生長、消炎殺菌及抗氧化等功效[1-4]，有望成為促生長類抗生素替代品，是近年來國內(nèi)外的研究熱點。植物精油因其來源不同且成分復(fù)雜，所以功能各異，已知的植物精油有3 000多種，主要成分包括萜烯類、芳香族、脂肪族和含氮含硫類等化合物[4]。桉樹精油由桉樹枝葉通過蒸餾法萃取而得，桉樹精油的大量生產(chǎn)始于20世紀(jì)60年代，用途廣泛[5]。桉樹精油主要成分為1,8-桉樹腦、蘆丁等黃酮類物質(zhì)，臨床證明其具有抗菌消炎的功效[6]，有報道桉樹精油可以通過消除羥基自由基從而改善炎癥癥狀[7]。有關(guān)桉樹精油在我國畜禽養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用研究起步較晚，目前報道多見于抑菌、殺蟲作用方面[5,8-9]，其他方面的研究鮮見報道。因此，本試驗旨在研究富含1,8-桉樹腦成分的桉樹精油對籠養(yǎng)白羽肉雞生長性能、免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能的影響，以期獲得其對肉雞的作用效果及適宜添加水平，為其推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

桉樹精油產(chǎn)品由山東某公司提供，以澳大利亞濰州天然野生桉樹葉為原料提取，桉樹精油含量≥5%，其主要活性成分為1,8-桉樹腦，含量≥85%。

1.2 試驗設(shè)計

試驗選用300只1日齡愛拔益加(AA)商品白羽肉雞公雛，隨機(jī)分為6組，每組設(shè)5個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞。Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ～Ⅵ組為試驗組，分別在基礎(chǔ)飼糧中添加50、75、100、125和150 mg/kg的桉樹精油。試驗期42 d。

1.3 試驗飼糧和飼養(yǎng)管理

肉雞采用3層籠養(yǎng)，飼養(yǎng)期間自由采食和飲水，按照白羽肉雞常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行管理。按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫：7日齡采用滴鼻點眼方式進(jìn)行雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗(La Sota株+QXL87株)免疫，14日齡采用飲水免疫方式進(jìn)行雞傳染性法氏囊病活疫苗(B87株)免疫，21日齡采用滴鼻點眼方式進(jìn)行雞新城疫活疫苗(La Sota株)免疫(疫苗均購于易邦生物工程有限公司)?；A(chǔ)飼糧參考NY/T 33—2004《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 指標(biāo)檢測與方法

1.4.1 生長性能

分別于出殼當(dāng)天、試驗第21天和第42天，以重復(fù)為單位對試驗雞進(jìn)行空腹稱重，準(zhǔn)確記錄各階段采食量。計算1～21日齡、22～42日齡及1～42日齡的平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.4.2 免疫機(jī)能

1.4.2.1 血清新城疫抗體效價

于試驗第42天，從每組每重復(fù)中隨機(jī)取1只雞，翅靜脈采血，4 000 r/min離心分離血清，-20 ℃冷凍待測。采用血凝-血凝抑制(HA-HI)試驗檢測血清新城疫抗體效價[10]。

1.4.2.2 免疫器官指數(shù)

于試驗第42天，從每組每重復(fù)中選擇體重接近其所在重復(fù)平均體重的肉雞1只，頸部放血宰殺，解剖取法氏囊和脾臟，準(zhǔn)確稱重，計算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(g/kg)=器官重(g)/活體重(kg)。

1.4.3 抗氧化功能指標(biāo)

于試驗第21天，從每組每重復(fù)中隨機(jī)取1只雞心臟采血；于試驗第42天，從每組每重復(fù)中隨機(jī)取1只雞翅靜脈采血，血清采集方法同1.4.2.1。采用TECAN SPARK酶標(biāo)儀及試劑盒測定血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

對試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2016軟件進(jìn)行初步處理，采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Duncan氏法進(jìn)行組間多重比較和差異顯著性分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。采用Excel 2016軟件進(jìn)行桉樹精油添加水平與效應(yīng)之間的二次回歸分析，計算最佳值。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響

不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響見表2，由表可知，1～21日齡，Ⅱ～Ⅴ組肉雞21日齡時平均體重顯著或極顯著高于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅳ組肉雞平均日增重最高，Ⅱ～Ⅵ組肉雞平均日增重之間無顯著差異(P>0.05)，Ⅱ～Ⅵ組分別較Ⅰ組提高了14.10%(P<0.05)、19.00%(P<0.01)、19.60%(P<0.01)、14.17%(P<0.05)和10.79%(P>0.05)；各組肉雞平均日采食量無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ～Ⅵ組料重比顯著或極顯著低于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅳ組料重比最低，Ⅲ組次之，Ⅲ組、Ⅳ組極顯著低于Ⅵ組(P<0.01)。22～42日齡，Ⅳ組肉雞42日齡時平均體重顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，各組間肉雞平均日增重、平均日采食量和料重比無顯著差異(P>0.05)。1～42日齡，Ⅱ～Ⅵ組肉雞平均日增重均不同程度高于Ⅰ組，其中Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅱ～Ⅵ組料重比均低于Ⅰ組，其中Ⅳ組顯著低于Ⅰ組(P<0.05)；各組間平均日采食量無顯著差異(P>0.05)。

隨著桉樹精油添加水平的升高，1～21日齡和1～42日齡肉雞平均日增重呈現(xiàn)先上升后下降趨勢，料重比則呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，劑量效應(yīng)明顯。桉樹精油添加水平與生長性能指標(biāo)的二次回歸分析結(jié)果(表3)表明，飼糧中桉樹精油的添加水平分別為95.25和105.83 mg/kg時，1～21日齡和1～42日齡肉雞可獲得最高平均日增重，分別為38.00和53.87 g/d；飼糧中桉樹精油的添加水平分別為105.00和115.00 mg/kg時，1～21日齡和1～42日齡肉雞可獲得最低料重比，分別為1.24和1.55。

2.2 不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機(jī)能的影響

不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機(jī)能的影響見表4，由表可知，Ⅱ～Ⅵ組肉雞血清新城疫抗體效價、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均略高于Ⅰ組，但各組間差異不顯著(P>0.05)。

2.3 不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機(jī)能的影響

不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機(jī)能的影響見表5，由表可知，21和42日齡時，肉雞血清T-SOD活性隨桉樹精油添加水平升高均呈升高趨勢。21日齡時，Ⅴ組肉雞血清T-SOD活性顯著或極顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅵ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；42日齡時，Ⅴ組肉雞血清T-SOD活性最高，顯著或極顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅳ組和Ⅵ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。21和42日齡時，Ⅱ～Ⅵ組肉雞血清GSH-Px活性均不同程度高于Ⅰ組，21日齡時，Ⅱ～Ⅵ組顯著或極顯著高于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)；42日齡時，Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。21和42日齡時，Ⅱ～Ⅵ組肉雞血清MDA含量均不同程度低于Ⅰ組，21日齡時，Ⅳ～Ⅵ組極顯著低于Ⅰ組(P<0.01)，Ⅴ組最低，與Ⅱ組差異極顯著(P<0.01)，與Ⅲ組、Ⅳ組和Ⅵ組差異顯著(P<0.05)；42日齡時，Ⅳ組和Ⅴ組顯著或極顯著低于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅲ組和Ⅵ組顯著或極顯著低于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)。

表2 不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響

表3 桉樹精油添加水平與生長性能指標(biāo)的二次回歸分析結(jié)果

表4 不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機(jī)能的影響

隨著桉樹精油添加水平的升高，21和42日齡肉雞血清GSH-Px和T-SOD活性均呈現(xiàn)逐漸上升然后下降趨勢，血清MDA含量則呈現(xiàn)逐漸下降然后上升趨勢。桉樹精油添加水平與抗氧化機(jī)能指標(biāo)的二次回歸分析結(jié)果(表6)表明，飼糧中桉樹精油的添加水平分別為151.13、205.60和188.00 mg/kg時，21日齡肉雞可獲得最高血清GSH-Px和T-SOD活性以及最低血清MDA含量；飼糧中桉樹精油的添加水平分別為93.38、139.12和158.57 mg/kg時，42日齡肉雞可獲得最高血清GSH-Px和T-SOD活性以及最低血清MDA含量。

表5 不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機(jī)能的影響

3 討 論

3.1 不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響

據(jù)報道，天然1,8-桉樹腦存在于200余種天然植物揮發(fā)油中，是迷迭香精油、百里香精油以及桉樹精油的主要組成部分[11-13]。劉大林等[14]研究表明，飼糧添加迷迭香精油對京海黃雞生長性能無顯著影響；Mueller等[15]研究表明，飼糧添加0.15 g/kg的百里香和迷迭香精油，有提高羅斯308肉雞體增重和飼料轉(zhuǎn)化率的趨勢；朱曉磊等[16]研究表明，在飼糧中添加百里香精油可顯著提高22～42日齡麻花雞平均日增重，降低料重比；Mathlouthi等[17]研究表明，基礎(chǔ)飼糧中添加100 mg/kg迷迭香精油(含49.99%的1,8-桉樹腦)、50 mg/kg迷迭香和50 mg/kg牛至精油混合物、1 000 mg/kg的市售精油混合物(主要成分為肉桂醛和1,8-桉樹腦)，肉雞體增重和飼料轉(zhuǎn)化率均顯著高于無添加的對照組，作用效果等同于抗生素對照組(添加阿維霉素促生長劑)，因此認(rèn)為上述精油均可以替代生長促進(jìn)劑類抗生素；Nameghi等[18]也報道，飲用水中添加150 mg/L混合物精油(由百里香精油、薄荷油和桉樹精油組成)可顯著提高羅斯308肉雞的體增重和飼料轉(zhuǎn)化率；Al-Fataftah等[19]報道，與對照組相比，在AA肉雞飲用水中添加100 mg/L的桉樹提取物能夠顯著提高體增重，降低料重比；Barbour等[20]研究表明，在飲用水中添加主要成分為1,8-桉葉醇和α-蒎烯的桉樹和薄荷油的商品混合物顯著提高了肉雞的生長性能；Mashayekhi等[21]研究表明，飼糧添加0.5%的桉葉粉顯著提高了羅斯308肉雞26～42日齡和1～42日齡的體增重，降低了料重比。本試驗結(jié)果表明，飼糧添加50～125 mg/kg的桉樹精油可顯著提高1～21日齡肉雞的平均日增重，顯著降低料重比；飼糧添加100 mg/kg桉樹精油可顯著提高1～42日齡肉雞平均日增重，顯著降低料重比。本試驗所用桉樹精油的主要成分為1,8-桉樹腦，其可能是改善肉雞生長性能的主要活性物質(zhì)，其促生長作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

表6 桉樹精油添加水平與抗氧化機(jī)能指標(biāo)的二次回歸分析結(jié)果

3.2 不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機(jī)能的影響

免疫器官指數(shù)是衡量肉仔雞免疫功能的指標(biāo)之一[22]。朱曉磊等[23]研究表明，百里香精油提高了麻花雞的胸腺指數(shù)，但脾臟指數(shù)降低；Nameghi等[18]也報道，隨著飲水中百里香、薄荷和桉樹精油添加水平提高，羅斯308肉雞血清中新城疫抗體效價呈線性增長，并且當(dāng)飲水中添加150 mg/L百里香、薄荷和桉樹精油的混合精油時顯著提高了羅斯308肉雞胸腺和法氏囊指數(shù)；Mashayekhi等[21]研究表明，飼糧添加0.5 %的桉葉粉顯著提高了羅斯308肉雞的法氏囊指數(shù)；但熊娟等[24]研究表明，植物精油(肉桂醛、香芹酚、百里香酚、丁香酚、薄荷和桉葉油)與酸化劑(主要由檸檬酸、乳酸、磷酸及富馬酸等組成)組合對肉仔雞胸腺指數(shù)以及脾臟指數(shù)均無顯著影響。本試驗結(jié)果表明，飼糧添加50～150 mg/kg桉樹精油可使肉雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和血清新城疫抗體效價略高于對照組，但無統(tǒng)計意義上的差異顯著性，這可能是本試驗所用的添加水平未達(dá)到顯著提高上述免疫指標(biāo)所需劑量，有關(guān)桉樹精油對其他免疫指標(biāo)的影響及其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3.3 不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機(jī)能的影響

研究表明，植物精油具有較強的抗氧化作用，可以減少因氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡和損傷[22]。王蘭等[25]研究表明，使用200 mg/kg百里香酚、丁香酚和肉桂醛組成的復(fù)合精油可以顯著提高肉雞血清T-SOD活性；劉大林等[14]研究表明，150 mg/kg的迷迭香精油顯著提高了京海黃雞血清GSH-Px和T-SOD活性，顯著降低了血清MDA含量；Mueller等[15]研究表明，飼糧添加0.15 g/kg的姜油、牛至油、百里香和迷迭香精油可提高羅斯308肉雞空腸和肝臟的Trolox當(dāng)量抗氧化能力，并減少二價鐵離子(Fe2+)誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)過氧化作用；Ahlem等[26]研究表明，在小鼠飲水中添加桉葉提取物，能夠提高肝臟和腎臟中過氧化氫酶、T-SOD和GSH-Px的活性，降低脂質(zhì)過氧化水平。El-Ghorab等[27]研究表明，采用水蒸氣蒸餾法從赤桉葉中提取的精油抗氧化效果顯著，可作為天然抗氧化劑。此外，據(jù)報道，1,8-桉樹腦、樟腦和β-蒎烯等成分相互協(xié)同作用，能更好地發(fā)揮抗氧化活性[28]；五葉子精油中含有少量1,8-桉樹腦成分[29]；而五味子精油能夠上調(diào)成肌細(xì)胞核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)的蛋白表達(dá)，從而提高抗氧化酶活性，降低動物機(jī)體氧化損傷[30]。有關(guān)桉樹精油對肉雞抗氧化機(jī)能的影響研究報道較少。本試驗結(jié)果表明，飼糧添加一定量的桉樹精油顯著降低了肉雞血清MDA含量，顯著提高肉雞血清GSH-Px和T-SOD活性，這說明桉樹精油能夠提高肉雞抗氧化能力，其提高抗氧化酶活性的分子作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

① 在飼糧中添加適宜水平的桉樹精油可顯著提高籠養(yǎng)白羽肉雞生長性能和抗氧化機(jī)能。

② 飼糧添加50～125 mg/kg桉樹精油可顯著提高1～21日齡肉雞生長性能，飼糧添加100 mg/kg桉樹精油可使1～42日齡肉雞獲得最佳的生長性能；飼糧添加50～150 mg/kg桉樹精油可顯著提高21日齡肉雞抗氧化機(jī)能，飼糧添加75～150 mg/kg桉樹精油可顯著提高22～42日齡肉雞抗氧化機(jī)能；飼糧添加50～150 mg/kg桉樹精油有提高肉雞免疫器官指數(shù)和血清新城疫抗體效價的趨勢。

③ 結(jié)合回歸結(jié)果綜合分析，籠養(yǎng)白羽肉雞飼糧中桉樹精油適宜添加水平為105.00 mg/kg。