黔產(chǎn)迎春花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

姜 蓮 程 韜 王影超 舒 柯

貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽(yáng) 550004

迎春花，又稱金腰帶、黃素馨，為木犀科植物迎春花JasminumnudiflorumLindl.的干燥葉和花。春、夏、秋三季均可采摘，晾干或曬干。藥用價(jià)值在我國(guó)歷史悠久，主要功效為解毒消腫、清熱利尿、止血止痛，用于發(fā)熱頭痛、小便熱痛、跌撲損傷、外傷出血、口瘡、癰癤腫痛、下肢潰瘍[1]。產(chǎn)于貴州思南、貴陽(yáng)、安順等地。我國(guó)山西、陜西、甘肅、山東、河南、江蘇、四川、云南也有分布[2]。王佩珩等[3-4]對(duì)迎春花的化合物進(jìn)行分析，得到裂環(huán)烯醚萜類化合物、黃酮類化合物、迎春花黃色素、多糖類化合物、揮發(fā)油類和脂肪酸類等。為提高迎春花的質(zhì)量控制水平，本實(shí)驗(yàn)建立顯微鑒別、薄層鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物及總黃酮的含量測(cè)定，為迎春花的研究及質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 奧林巴斯BX51型顯微鏡(OLYMPUS)，雙光束紫外可見分光光度計(jì)TU-1901(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，電子調(diào)溫電熱套98-I-C(天津泰斯特儀器有限公司)，四用式暗箱紫外分析儀ZF-8(驥輝分析儀器(上海)有限公司)。

1.2 材料 3批迎春花藥材均自貴州，分別產(chǎn)至貴州安順(批號(hào)：180801)、貴州貴陽(yáng)(批號(hào)：180802)、貴州貴陽(yáng)(批號(hào)：180803)，樣品及對(duì)照藥材經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所標(biāo)本館熊慧林老師檢定，均為迎春花，并存于貴州省食品藥品檢驗(yàn)所；蘆丁(110752-201514)來源于中國(guó)食品藥品檢定研究院；硅膠G薄層板：青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G薄層板(批號(hào)：20170408)及自制硅膠G薄層板；試劑：稀甘油、水合氯醛試液、三氯甲烷、甲醇、硫酸、乙醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別 取本品內(nèi)容物置顯微鏡下觀察：本品粉末淡棕色。葉表皮細(xì)胞含砂晶，有氣孔；木纖維常見，直徑5～30 μm，花粉粒圓形、類圓形、橢圓形，直徑20～45 μm，外壁薄，壁上偶見壁溝，花粉粒表面具網(wǎng)格狀紋理。

2.2 薄層鑒別 取本品粉末2 g，加70%乙醇30 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取迎春花對(duì)照藥材2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(75∶35∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖2所示。

2.3 檢查

2.3.1 水分 按《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0832第二法，測(cè)定并計(jì)算3批迎春花的水分含量(%)，平行操作2次，取平均值作為結(jié)果，結(jié)果：3批迎春花的水分為12.1%～13.5%。樣品測(cè)定結(jié)果為見表1。

2.3.2 總灰分 按《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2302總灰分測(cè)定法，測(cè)定并計(jì)算3批迎春花的總灰分含量(%)，平行操作2次，取平均值作為結(jié)果，結(jié)果：3批迎春花的總灰分為5.0%～5.8%。樣品測(cè)定結(jié)果為見表1。

2.3.3 酸不溶性灰分 按《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2302總灰分測(cè)定法，測(cè)定并計(jì)算3批迎春花的酸不溶性灰分含量(%)，平行操作2次，取平均值作為結(jié)果，結(jié)果：3批迎春花的酸不溶性灰分為0.7%～1.2%。樣品測(cè)定結(jié)果為見表1。

表1 水分、總灰分、酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果

2.4 浸出物 按《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2201浸出物測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，分別用乙醇、50%乙醇、水作為溶劑，熱浸法和冷浸法分別測(cè)定浸出物，平行操作兩次，取平均值作為結(jié)果。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，選擇浸出物含量最高的方法作為浸出物方法，故浸出物測(cè)定法為以稀乙醇為溶劑的冷浸法，其測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 浸出物測(cè)定結(jié)果 (%)

2.5 總黃酮的含量測(cè)定[5]

2.5.1 供試品溶液的制備 取迎春花粗粉約1.2 g，精密稱定，精密加入50 mL 70%乙醇，置具塞錐形瓶中，密塞，稱定重量，加熱回流40 min，放冷，再次稱定重量，用70%乙醇不租減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 取蘆丁對(duì)照品20 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加70%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL含蘆丁0.2 mg)。

2.5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min。加氫氧化鈉試液10 mL，再加水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在500 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖3所示)，得回歸方程：Y=0.0133X-0.0047(r=0.9999)，在7.909～47.454 μg蘆丁與吸光度之間線性關(guān)系良好。

2.5.4 測(cè)定法 精密量取供試品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加70%乙醇至6 mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加亞硝酸鈉溶液1 mL”起，依法測(cè)定吸光度，同時(shí)取供試品溶液1 mL，除不加氫氧化鈉試液外，其余同上操作，作為空白，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含蘆丁的重量(mg)，計(jì)算，即得。

2.5.5 精密度、穩(wěn)定性與重復(fù)性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液在500 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，RSD=0.2%，表明精密度良好。取供試品溶液，按“2.5.4”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定120 min，計(jì)算得含量的RSD=0.2%，表明穩(wěn)定性良好。取同一批迎春花藥材共6份，每份1.2 g，精密稱定，按“2.5.1”項(xiàng)方法制備供試品并測(cè)定含量，計(jì)算得平均含量為2.50%，RSD=0.1%，表明重復(fù)性良好。見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)

2.5.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱取已知含量迎春花粉末0.6 g，平行操作6份，分別精密加入含蘆丁對(duì)照品(0.2967 mg/mL)50 mL，按“2.5.1”項(xiàng)制備供試品溶液，并按“2.5.4”方法測(cè)定吸收光，計(jì)算回收率。結(jié)果回收率為101.5%，RSD=0.3%,表明方法的準(zhǔn)確度良好。見表4。

表4 回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù) (n=6)

2.5.7 樣品測(cè)定 取3批迎春花樣品，按“2.5.1”“2.5.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定吸光度，測(cè)定總黃酮的含量，結(jié)果見表5。

3 結(jié)果與討論

迎春花為貴州習(xí)用藥材，其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制項(xiàng)目較少，文獻(xiàn)關(guān)于迎春花質(zhì)量研究也較少，本研究從定性、定量對(duì)迎春花藥材進(jìn)行研究，定性研究中顯微特征明顯,薄層色譜分離效果較好，重現(xiàn)性佳, 水分、灰分、浸出物測(cè)定方法可行。

迎春花的花、葉中含有較為豐富的黃酮類，已有研究證實(shí)迎春花提取液具有很好的抗心律失常、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、耐缺氧等作用，故含量以總黃酮為指標(biāo)，分別考察了不同的提取方式(超聲、回流)，不同的提取溶劑(乙醇、70%乙醇、稀乙醇、25%乙醇)，不同的提取時(shí)間(回流30 min、40 min、50 min)，結(jié)果文中方法提取完全，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，方法可行。

隨著中藥現(xiàn)代化和國(guó)際化，民族藥資源的開發(fā)利用、保護(hù)極其重要，應(yīng)更好地保證該品種的合理開發(fā)利用，藥材安全有效，質(zhì)量可控穩(wěn)定。本研究可為迎春花的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。