電針足三里對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠內(nèi)臟敏感性及腹瀉情況的影響

陳苑平 陳 柯 許金森 鄭淑霞*

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350108；2.福建省中醫(yī)藥科學(xué)院，福建 福州 350003

腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome，IBS)是常見(jiàn)的消化系疾病，表現(xiàn)為腹痛或腹部不適，且伴隨排便情況改變的功能性腸病，多為慢性、間歇性發(fā)作。IBS的發(fā)病率逐年增高，在IBS的亞型中又以腹瀉型(IBS-D)最為常見(jiàn)，約占IBS發(fā)病率的3/4，因IBS-D容易反復(fù)發(fā)作，給患者生活及心理造成一定的影響[1]。研究認(rèn)為，IBS的發(fā)病機(jī)制與胃腸道動(dòng)力異常以及內(nèi)臟高敏感性存在聯(lián)系[2]。研究調(diào)查表明，目前西藥對(duì)該疾病的治療存在一定的局限性，而針灸對(duì)該病的治療則有一定的優(yōu)勢(shì)[3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)電針大鼠足三里，觀察電針足三里對(duì)IBS-D模型大鼠的內(nèi)臟敏感性以及大鼠腹瀉情況的影響，初步探討電針足三里對(duì)于IBS-D的療效及其效應(yīng)機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康的雄性SD大鼠30只，體重(200～230)g，動(dòng)物許可證號(hào): SCXK(滬)2018-0006(上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)，實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)性飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥科學(xué)院動(dòng)物房(普通級(jí))7 d，控制室內(nèi)溫度為 23～26 ℃，相對(duì)濕度為50%～70%。在本次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》等相關(guān)文件標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼養(yǎng)與處置。

1.2 試劑 番瀉葉生藥(亳州市華鑫中藥飲片科技有限公司)，液體石蠟(運(yùn)加牌，黑龍江省運(yùn)加醫(yī)療科技有限公司)，0.9%氯化鈉注射液(江西科倫藥業(yè)有限公司)，8FR導(dǎo)尿管(事達(dá)牌，湛江市事達(dá)實(shí)業(yè)有限公司)，2 mL注射器(康友牌，江蘇康友醫(yī)用器械有限公司)。

1.3 儀器 電子秤(福建福日電子股份有限公司)，R407小動(dòng)物呼吸麻醉系統(tǒng)(瑞沃德生命科技有限公司)，異氟烷(瑞沃德生命科技有限公司)，200 mm×80 mm×80 mm自制亞克力盒，自制大鼠固定器，SDZ-Ⅱ型電針儀(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)，0.25 mm×13 mm無(wú)菌針灸針(蘇州東邦醫(yī)療器械有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與造模 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前先將30只大鼠隨機(jī)分成空白組、模型組及電針組，空白組大鼠正常喂養(yǎng)，余下兩組則需進(jìn)行2w的IBS-D造模處理。參照Williams等[4]的方法進(jìn)行改進(jìn)，采用慢性束縛應(yīng)激聯(lián)合番瀉葉灌胃的方法建立IBS-D大鼠模型，并參照趙妍等[5]的方法制備0.3 g/mL的番瀉葉煎劑。造模的具體操作：造模時(shí)先給予番瀉葉煎劑(0.3 g/mL)，并按照10 mL/kg的給藥劑量灌胃。灌服番瀉葉煎劑后，將大鼠裝進(jìn)自制的固定器中，限制其無(wú)法進(jìn)行自如活動(dòng)，持續(xù)時(shí)長(zhǎng)為1 h，每日1次，持續(xù)2周。

2.2 干預(yù)方法 電針組在造模成功后對(duì)大鼠的足三里穴進(jìn)行電針干預(yù)，參照實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)制定的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》，選取大鼠的足三里穴，其位置在大鼠的膝關(guān)節(jié)后外側(cè)。操作時(shí)先觸及大鼠的腓骨小頭，再往下約5 mm即為該穴，再選用規(guī)格為0.25 mm×13 mm的毫針直刺，深度約為5 mm，并接上電針儀。具體方法：首先將大鼠固定在自制固定器內(nèi)，使其不亂跑亂動(dòng)，定穴后直刺，進(jìn)針后不做手法刺激，連接SDZ-II電針儀進(jìn)行干預(yù)，選用波形為疏密波，頻率調(diào)至2 Hz，強(qiáng)度約為1～2 mA，以大鼠下肢出現(xiàn)輕微抖動(dòng)且不嘶叫為度，留針20 min，每日1次，持續(xù)7 d。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 一般情況 觀察大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、毛發(fā)光澤度以及體重增長(zhǎng)等情況。

2.3.2 腹瀉情況 在大鼠造模前后以及干預(yù)后，對(duì)所有大鼠進(jìn)行腹瀉指數(shù)的測(cè)算。腹瀉指數(shù)測(cè)定時(shí)在鼠籠內(nèi)墊上濾紙，定時(shí)觀察大鼠排便情況，如有稀便污跡沾染濾紙則需更換濾紙，并及時(shí)記錄濾紙的污跡面積。持續(xù)觀察5 h后，統(tǒng)計(jì)大鼠排稀便的數(shù)量及腹瀉情況，再根據(jù)公式計(jì)算每只大鼠的腹瀉指數(shù)。

公式[6]：腹瀉指數(shù)=稀便率(每只大鼠的稀便數(shù)/總便數(shù))×稀便級(jí)(每只大鼠的稀便級(jí)數(shù)總和/稀便數(shù))。

稀便級(jí)數(shù)分級(jí)[7]：以稀便污染濾紙形成污跡面積的大小定級(jí), 分為4級(jí)：1級(jí)為污染直徑<1 cm，2級(jí)污染直徑1.0～1.9 cm，3級(jí)污染直徑2～3 cm，4級(jí)污染直徑>3 cm。測(cè)量操作：先統(tǒng)計(jì)每個(gè)大鼠排便的總數(shù)，再統(tǒng)計(jì)大鼠排稀便的總數(shù)，并逐一測(cè)定每堆稀便的級(jí)數(shù)，然后參照公式算出腹瀉率、稀便級(jí)以及腹瀉指數(shù)。測(cè)量污染直徑時(shí)，如果糞便形狀大致為圓形，則可以直接量直徑；若糞便形狀為橢圓形或較不規(guī)則時(shí)，則測(cè)量其最長(zhǎng)距離和近似圓的直徑，并將二者相加除以2。

2.3.3 內(nèi)臟敏感性評(píng)價(jià) 在造模前、造模后及干預(yù)后，先將大鼠禁食12 h，將所有大鼠逐個(gè)放入小動(dòng)物呼吸麻醉誘導(dǎo)盒內(nèi)，使其吸入異氟烷麻醉。待其麻醉后將帶有球囊的8FR導(dǎo)尿管插入大鼠肛門(mén)內(nèi)，導(dǎo)尿管插入深度為4.5 cm，隨后用膠帶將其纏在大鼠尾巴上固定。將大鼠放入規(guī)格為200 mm×80 mm×80 mm的透明固定盒中，并將含有溫生理鹽水的2 mL注射器接入導(dǎo)尿管尾部，待大鼠完全清醒后盡快檢測(cè)大鼠的內(nèi)臟敏感性。測(cè)量結(jié)直腸擴(kuò)張(CRD)時(shí)，緩慢向球囊內(nèi)注溫生理鹽水，使球囊內(nèi)的壓力逐漸增高，記錄大鼠出現(xiàn)腹壁收縮反應(yīng)及腹部、臀部抬高并抬離地面時(shí)的容量閾值，需重復(fù)3次該操作，并取平均值。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠一般情況比較 空白組在全程實(shí)驗(yàn)中大鼠精神良好、活動(dòng)自如、毛色潤(rùn)澤，大便正常未見(jiàn)有腹瀉的情況。模型組及電針組的大鼠在進(jìn)行造模后逐漸出現(xiàn)精神狀態(tài)差、活動(dòng)減少、蜷縮、易激惹、毛發(fā)干枯無(wú)澤、肛周有稀便污跡附著。電針組在電針干預(yù)后精神狀態(tài)、活動(dòng)情況以及毛色得到一定程度的好轉(zhuǎn)。如圖1所示，在造模期結(jié)束后，與空白組相比較，模型組及電針組體重增長(zhǎng)幅度較小，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。干預(yù)期結(jié)束后，電針組大鼠體重增長(zhǎng)情況得到一定改善，且與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3.2 內(nèi)臟敏感性評(píng)價(jià) 大鼠CRD容量閾值比較，如圖2所示，模型組大鼠的腹部收縮、腹部抬起及臀部抬起的容量閾值，與空白組相比均顯著降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。電針組大鼠的腹部收縮、腹部抬起及臀部抬起的容量閾值與模型組相比，在電針干預(yù)后得到了提高(P<0.05)。

3.3 腹瀉情況 空白組在實(shí)驗(yàn)期間未出現(xiàn)腹瀉情況，則只對(duì)模型組及電針組大鼠的腹瀉指數(shù)進(jìn)行比較。如圖3所示，模型組及電針組在造模后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)均出現(xiàn)了腹瀉(P>0.05)，但是在干預(yù)之后電針組大鼠的腹瀉情況得到了好轉(zhuǎn)，且與模型組對(duì)比具有差異(P<0.01)。

4 分析與討論

中醫(yī)角度來(lái)看，可根據(jù)IBS-D的主要臨床表現(xiàn)，將其劃入“泄瀉”“腹痛”范疇，其病位在腸，與脾胃密切相關(guān)。目前，IBS的發(fā)病機(jī)制尚未有定論，但是隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，近年來(lái)IBS發(fā)病機(jī)制被研究者們不斷深入挖掘?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為IBS的發(fā)病機(jī)制可能主要與機(jī)體的內(nèi)臟高敏感性、腸動(dòng)力異常等聯(lián)系密切[8]。Bouin等[9]研究發(fā)現(xiàn)，患有IBS的人群的腸道疼痛閾值普遍低于正常人群，此后內(nèi)臟高敏感性逐漸成為研究IBS的發(fā)病機(jī)制的一個(gè)新的切入點(diǎn)。降低內(nèi)臟高敏感性，可以改善IBS患者的癥狀。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電針足三里穴能夠改善IBS-D大鼠的易激惹、倦怠、體重增長(zhǎng)緩慢的情況，并且有效緩解IBS-D大鼠的腹瀉情況。目前，CRD閾值是評(píng)價(jià)IBS-D大鼠模型內(nèi)臟敏感性的方法之一，即通過(guò)對(duì)大鼠結(jié)腸刺激所產(chǎn)生的反應(yīng)。與空白組相比，模型組大鼠的CRD閾值偏低，說(shuō)明模型組存在內(nèi)臟高敏感，電針組在干預(yù)之后，其內(nèi)臟敏感程度也得到了一定的改善。

針灸是治療IBS的常用補(bǔ)充療法和替代療法之一，針灸的干預(yù)方式對(duì)機(jī)體的調(diào)節(jié)具有整體性，并且對(duì)IBS的改善機(jī)制可能涉及道多環(huán)節(jié)、多層次。研究[10-11]表明，采用包括電針、艾灸等在內(nèi)的針灸方式治療IBS-D，均可改善內(nèi)臟高敏感性、胃腸道炎癥，并且能調(diào)節(jié)胃腸蠕動(dòng)。此外，有研究[12]發(fā)現(xiàn)，電針治療IBS-D的療效甚至略優(yōu)于藥物，且電針副作用少，所以在臨床上越來(lái)越受到患者們的認(rèn)可。

《四總穴歌》有云：“肚腹三里留”，足三里是臨床針灸治療胃腸疾病的常用穴，其具有和胃健脾、補(bǔ)中益氣、通調(diào)腑氣等功能。《針灸大成》也提到：“泄瀉肚腹諸般疾，三里、內(nèi)庭功無(wú)比”。《靈樞·五亂》言：“氣在于腸胃者，取之足太陰、陽(yáng)明；不下者，取之三里”，說(shuō)明該穴不僅可以固護(hù)后天正氣以調(diào)胃腸，又能調(diào)暢氣機(jī)以和肝脾[13]。

梳理總結(jié)近10年針灸臨床治療IBS-D選穴規(guī)律，通過(guò)計(jì)算、歸納出腧穴、歸經(jīng)及選穴部位的頻次，發(fā)現(xiàn)在IBS-D的針灸治療中足三里穴出現(xiàn)的頻次居于前列[14]。臨床經(jīng)驗(yàn)證明，在足三里穴位上施以針刺或艾灸等干預(yù)，可以改善IBS-D患者的腹痛、腹瀉等不適癥狀，足三里治療IBS-D的療效確切，且未見(jiàn)有不良反應(yīng)[15-16]。雖然足三里在治療IBS-D的臨床療效得到了認(rèn)可，但是其起效的作用機(jī)制卻未有確切闡述。有研究[17]認(rèn)為，在足三里穴在上施以電針可以調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達(dá)、降低結(jié)腸黏膜組織中的炎性因子含量，從而減輕IBS-D大鼠的腸道炎性損傷，達(dá)到治療疾病的作用；還有的研究[13]發(fā)現(xiàn)，電針足三里可以下調(diào)與胃腸動(dòng)力相關(guān)的結(jié)腸波形蛋白的表達(dá)，從而糾正IBS-D大鼠的胃腸功能。

綜上所述，電針足三里穴能夠改善IBS-D大鼠的易激惹、倦怠、體重增長(zhǎng)緩慢的情況，改善大鼠的腹瀉情況，降低內(nèi)臟高敏感性。電針足三里治療IBS-D的療效確切，但是其可能存在的作用機(jī)制仍然需要本課題組進(jìn)一步去探索。