19%氯蟲(chóng)苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑高效液相色譜分析

李廣澤，王 芳，戴蘭芳，李歐燕*，段麗芳

(1.深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司，廣東 深圳 518102；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

1 前言

三氟苯嘧啶(Triflumezopyrim)是由美國(guó)杜邦公司開(kāi)發(fā)的一種新型介離子類殺蟲(chóng)劑，作用于煙堿型乙酰膽堿受體正構(gòu)結(jié)合位點(diǎn)，抑制乙酰膽堿受體。與現(xiàn)有藥劑不存在交互抗性，安全性好、選擇性強(qiáng)，對(duì)稻飛虱特效且持效期長(zhǎng)，是吡蚜酮之后防治稻飛虱的最佳藥劑品種。

氯蟲(chóng)苯甲酰胺(Chlorantraniliprole) 也是由美國(guó)杜邦公司開(kāi)發(fā)的一種魚(yú)尼丁受體抑制劑類殺蟲(chóng)劑，通過(guò)選擇性激活害蟲(chóng)肌肉中的魚(yú)尼丁受體，過(guò)度釋放細(xì)胞內(nèi)鈣離子，導(dǎo)致害蟲(chóng)癱瘓死亡，對(duì)稻縱卷葉螟與二化螟等鱗翅目害蟲(chóng)效果好，安全性好、用藥量低，是當(dāng)前最優(yōu)秀的水稻鱗翅目害蟲(chóng)防治藥劑，對(duì)飛虱也具有一定活性。

19%氯蟲(chóng)苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑作為氯蟲(chóng)苯甲酰胺和三氟苯嘧啶的混配制劑，兼防水稻上飛虱與鱗翅目害蟲(chóng)兩大類害蟲(chóng)，具有降低用工成本、方便省事等優(yōu)點(diǎn)，符合國(guó)家環(huán)保減量要求，是一種廣譜高效綠色殺蟲(chóng)劑。

目前，氯蟲(chóng)苯甲酰胺分析測(cè)試的相關(guān)研究比較明確[1-3]，10%三氟苯嘧啶懸浮劑[4]和20%三氟苯嘧啶水分散粒劑的高效液相色譜分析方法也有報(bào)道[5]，但關(guān)于氯蟲(chóng)苯甲酰胺和三氟苯嘧啶混配制劑的分析方法尚未公開(kāi)報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜，使用ODS-BP反相柱和可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺和三氟苯嘧啶同時(shí)進(jìn)行分析和定量，該方法簡(jiǎn)便快速，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均達(dá)到定量分析的要求，適用于產(chǎn)品的質(zhì)量分析。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 甲醇:色譜純；磷酸:分析純；水:超純水(電阻率18.2MΩ·cm)；氯蟲(chóng)苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品:已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%；三氟苯嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品:已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.8%；19%氯蟲(chóng)苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑。

2.2 儀器 高效液相色譜儀:戴安U3000 具有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；變色龍色譜工作站；色譜柱:200mm×4.6mm(id) 不銹鋼柱，內(nèi)裝SinoChrom ODS-BP、5μm填充物；微量進(jìn)樣器:100μL；過(guò)濾器：濾膜孔徑0.22μm。

2.3 高效液相色譜操作條件 流動(dòng)相:Ψ(甲醇：0.05%磷酸水)=65+35(V/V)；流速:1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；進(jìn)樣體積：5μL；保留時(shí)間:三氟苯嘧啶約5.0min，氯蟲(chóng)苯甲酰胺約8.0min。

典型的氯蟲(chóng)苯甲酰胺、三氟苯嘧啶標(biāo)樣液相色譜圖和19%氯蟲(chóng)苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣液相色譜圖(圖1、圖2)。

圖1 氯蟲(chóng)苯甲酰胺和三氟苯嘧啶混合標(biāo)樣的高效液相色譜圖圖2 19%氯蟲(chóng)苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣的高效液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的制備 分別稱取0.05g(精確至0.000 2g)三氟苯嘧啶標(biāo)樣和氯蟲(chóng)苯甲酰胺標(biāo)樣各于同一50mL容量瓶中，加入30mL甲醇超聲溶解，冷至室溫后用甲醇定容至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5mL于25mL容量瓶中，甲醇定容，過(guò)濾備用。

2.4.2 試樣溶液的制備 稱取0.10g(精確至0.000 2g)試樣于50mL容量瓶中，加入30mL甲醇超聲溶解，冷至室溫后用甲醇定容至刻度，搖勻，過(guò)濾備用。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰針三氟苯嘧啶和氯蟲(chóng)苯甲酰胺標(biāo)樣溶液的峰面積相對(duì)變化<1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中三氟苯嘧啶和氯蟲(chóng)苯甲酰胺的峰面積，分別進(jìn)行平均。三氟苯嘧啶和氯蟲(chóng)苯甲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

A1-兩針標(biāo)樣溶液中三氟苯嘧啶或氯蟲(chóng)苯甲酰胺峰面積的平均值；

A2-兩針試樣溶液中三氟苯嘧啶或氯蟲(chóng)苯甲酰胺峰面積的平均值；

m1-三氟苯嘧啶或氯蟲(chóng)苯甲酰胺標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2-試樣的質(zhì)量，g；

P-標(biāo)樣中三氟苯嘧啶或氯蟲(chóng)苯甲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

5-標(biāo)樣溶液的稀釋倍數(shù)。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 氯蟲(chóng)苯甲酰胺和三氟苯嘧啶的紫外波長(zhǎng)掃描圖(圖3、圖4)。從圖中可以看出氯蟲(chóng)苯甲酰胺的最大吸收波長(zhǎng)為200nm，三氟苯嘧啶的最大吸收波長(zhǎng)在205nm附近，次吸收波長(zhǎng)在233nm附近，考慮到200nm附近溶劑吸收可能會(huì)對(duì)分析造成影響，因此將檢測(cè)波長(zhǎng)定位230nm。

圖3 氯蟲(chóng)苯甲酰胺紫外光譜圖

圖4 三氟苯嘧啶紫外光譜圖

選用SinoChrom ODS-BP 200mm×4.6mm(id)反相柱作為分析色譜柱。分別使用甲醇(乙腈)+水、甲醇(乙腈)+磷酸水作為流動(dòng)相對(duì)試樣進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用甲醇(乙腈)+磷酸水作為流動(dòng)相比甲醇(乙腈)+水作為流動(dòng)相時(shí)被試物的峰型對(duì)稱性要好，而用0.05%磷酸水和0.1%磷酸水對(duì)分析檢測(cè)區(qū)別不大，從經(jīng)濟(jì)以及對(duì)色譜柱的保護(hù)角度選擇甲醇+0.05%磷酸水作為流動(dòng)相。通過(guò)系列比例試驗(yàn)，最終確定流動(dòng)相為Ψ(甲醇：0.05%磷酸水)=65+35，流速1.0mL/min。該條件下，有效成分可以得到很好的分離，基線平穩(wěn)，峰型對(duì)稱，分析時(shí)間適當(dāng)。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 分別稱取氯蟲(chóng)苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.052 0g、三氟苯嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品0.051 5g于同一50mL容量瓶中，甲醇超聲溶解定容作為母液。分別移取5mL母液至10、25、50、100mL容量瓶中，甲醇溶解定容。將5個(gè)容量瓶中的混合標(biāo)樣溶液在上述色譜操作條件下進(jìn)樣5μL進(jìn)行分析，分別以三氟苯嘧啶、氯蟲(chóng)苯甲酰胺質(zhì)量濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)峰面積(mAU)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到三氟苯嘧啶線性方程為y=354.141 7x+1.174 0，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9，氯蟲(chóng)苯甲酰胺線性方程為y=207.168 4x+0.645 2，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9。

3.3 分析方法的精密度試驗(yàn) 在相同的色譜條件下，從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析并求平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果表明:三氟苯嘧啶的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.065 3、變異系數(shù)為0.76%；氯蟲(chóng)苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.070 7，變異系數(shù)為0.63%(表1)。

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取適量已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的19%氯蟲(chóng)苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣5份于5個(gè)50mL容量瓶中，分別加入3.2中混合標(biāo)準(zhǔn)溶液母液各5mL，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，結(jié)果表明：氯蟲(chóng)苯甲酰胺的平均回收率為98.8%，三氟苯嘧啶的平均回收率為98.4%(表2)。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

本試驗(yàn)建立一種簡(jiǎn)單快捷的分析方法對(duì)19%氯蟲(chóng)苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，線性關(guān)系良好，并且操作簡(jiǎn)便、快速，是產(chǎn)品質(zhì)量控制較理想的分析方法。