• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    外泌體蛋白質(zhì)組學分析在腎臟疾病診斷中的研究進展

    2021-04-09 08:34盧俊玲尤燕舞
    右江醫(yī)學 2021年2期

    盧俊玲 尤燕舞

    [專家介紹]尤燕舞,教授,主任醫(yī)師,醫(yī)學博士,博士生導師,學術帶頭人。曾在美國洛杉磯Cedars Sinai醫(yī)學中心擔任博士后研究員。主要從事慢性腎臟疾病的基因、免疫及分子機制的研究。現(xiàn)任中國僑聯(lián)特聘專家、廣西醫(yī)學會腎臟病學分會常務委員、廣西醫(yī)師協(xié)會腎臟內(nèi)科醫(yī)師分會常務委員、廣西中西醫(yī)結合腎臟病學會常務委員、廣西醫(yī)學會百色市腎臟病學分會副主任委員,百色市第四屆政協(xié)委員,2012年入選“廣西高校優(yōu)秀人才計劃”,先后獲得“百色市專業(yè)技術拔尖人才”“中國僑界貢獻獎”“優(yōu)秀教師”“廣西十佳青年醫(yī)師”“十佳醫(yī)德標兵”“教學名師”等榮譽稱號。主持在研國家自然科學基金2項、廣西自然科學基金4項、廣西高校科研重點項目1項,主持完成廣西高等教育教學改革研究課題1項。在國際、國內(nèi)知名期刊公開發(fā)表論著80多篇。榮獲廣西科技進步二等獎、三等獎各1項,廣西醫(yī)藥衛(wèi)生適宜技術推廣三等獎1項,百色市科技創(chuàng)新二等獎1項。

    【摘要】 外泌體是由B細胞、T細胞等細胞釋放并存在不同體液中的外囊泡,其攜帶的蛋白質(zhì)可以在細胞間轉運,參與細胞的通信、物質(zhì)轉運以及生化組成,是目前精準醫(yī)學的研究熱點。外泌體蛋白質(zhì)在多種人類疾病診療中占有重要地位,而腎臟疾病具有發(fā)病機制復雜、診斷難等特點,所以腎臟穿刺仍是診斷腎臟疾病的金標準,但因為屬于侵入性操作故不作為診斷的首選檢查,外泌體蛋白質(zhì)組學分析則能精準地鑒定出多種蛋白質(zhì)生物標志物,并且能較好地運用在腎臟疾病的診療中。該文通過不同方面討論外泌體蛋白組學分析在腎臟疾病研究中的最新進展,有望為腎臟疾病的診療提供新思路。

    【關鍵詞】 外泌體;蛋白質(zhì)組學;腎臟疾病

    中圖分類號:R692? 文獻標志碼:A

    DOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2021.02.001

    【Abstract】 ? Exosomes are vesicles released by B cells, T cells and other cells and exist in different body fluids. Proteins carried by exosomes can be transported between cells, participate in cell communication, material transport and biochemical composition. This has become a research hotspot of precision medicine. Exosomes play an important role in the diagnosis and treatment of various human diseases, while kidney diseases, because of their complicated pathogenesis and difficult diagnosis, renal puncture is still the gold standard for the diagnosis of them. However, because of its invasive operation, it is not the first choice for diagnosis of renal diseases. Exosomes proteomics analysis can accurately identify a variety of protein biomarkers, and it can be better used in the diagnosis and treatment of renal diseases. Therefore, this review discusses the latest progress of exosomes proteomic analysis in kidney disease research from different aspects, which is expected to provide new ideas for the diagnosis and treatment of kidney disease.

    【Key words】?exosomes; proteomics; kidney diseases

    隨著人們物質(zhì)生活水平的提高,腎臟疾病的高發(fā)病率及死亡率已成為目前重大公共衛(wèi)生問題之一[1],對腎臟疾病進行早期診斷及早期治療尤為重要。血液和尿液檢查仍是臨床診斷腎臟疾病的首選,根據(jù)當前腎臟疾病改善全球預后KDIGO指南,診斷和風險分層主要是功能性標志物:肌酐和胱抑素C,腎小球濾過率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)和分析尿白蛋白排泄作為腎臟損害的主要標志物[2],但是這些體液檢驗通常因不夠靈敏或特異性不足,難以作出明確的診斷。目前影像學檢查在腎臟疾病的診斷中僅發(fā)揮有限的作用,主要用于診斷腎結石或大體解剖缺陷,如囊性疾病、惡性腫瘤和阻塞性腎病。重要的是,影像檢查使用的造影劑拓寬了腎臟成像診斷的范圍,同時也增加了腎毒性的可能。因此,腎臟穿刺仍是診斷腎臟疾病的金標準,但這種診斷操作具有侵入性,并伴有各種并發(fā)癥,出血是其最大危害[3],因此不適合在腎臟疾病診斷及監(jiān)測預后中多次使用,故腎臟疾病的診斷及預后監(jiān)測迫切需要新的生物標志物來敏感、特異地檢測腎臟損傷并實現(xiàn)靶向治療。外泌體蛋白質(zhì)組學分析能精準地鑒定出多種疾病的蛋白質(zhì)生物標志物,如癌癥[4~5]、自身免疫性疾病[6]等,近年來,不少研究發(fā)現(xiàn)外泌體蛋白能較好地運用于腎臟疾病的診療中,因此,從不同方面討論外泌體蛋白組學分析在腎臟疾病研究中的最新進展,有望為腎臟疾病的診療提供新思路。

    1?外泌體蛋白作為生物標志物載體的優(yōu)勢

    外泌體由B細胞、T細胞、腫瘤細胞等細胞釋放并存在于血液[7]、尿液[8]、腦脊液[9]、羊水[10]等不同體液中納米大?。?0~150納米)的外囊泡(External vesicle,EV)。在保持轉移物質(zhì)的生物活性的前提下,外泌體攜帶穩(wěn)定的組織特異性蛋白質(zhì)等物質(zhì)轉移至特定的靶細胞,改變靶細胞的生化組成以及信號通路[11~13],同時以細胞間通信的一種新形式,以及運載工具,重新編程靶細胞來調(diào)節(jié)其生理及病理過程[14],因此外泌體可以代表靶細胞的現(xiàn)階段的狀態(tài)。

    外泌體蛋白比傳統(tǒng)的血清學標志物具有獨特的功能,首先,與直接在血液中檢測到的蛋白質(zhì)相比,外泌體蛋白質(zhì)具有更高的敏感性,致死性全身照射小鼠的尿總蛋白質(zhì)組學與尿外泌體蛋白質(zhì)組學之間的比較,在尿外泌體鑒定出23種差異蛋白質(zhì)[15]。第二,外泌體蛋白高度穩(wěn)定,脂質(zhì)雙層可保護外泌體蛋白免受外部蛋白酶和其他酶的侵害,磷酸化蛋白可與冷凍5年的外泌體樣品分離[16]。第三,蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTM)是一種分解生命活動的重要翻譯后修飾,替代生物的生長發(fā)育,信號轉導,以及疾病的發(fā)生發(fā)展,可以改變蛋白質(zhì)結構和活性,介導細胞信號轉導,對外部環(huán)境刺激的響應往往通過PTM實現(xiàn)。PTM有許多形式,而磷酸化是最受矚目的[17]。所以,使用外泌體蛋白質(zhì)作為生物標志物及治療的載體是理想的,這允許最低限度地采用非侵入性“液體活檢”的方法來診斷甚至監(jiān)測疾病發(fā)展。

    2?外泌體蛋白的質(zhì)譜分析技術

    在1994年第一屆國際雙向電泳大會上,澳大利亞Macquarie大學的Wilkins首次提出蛋白質(zhì)組這個概念。目前, 基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry LC-MS /MS)的定量蛋白質(zhì)組學技術飛速發(fā)展,已經(jīng)成為蛋白質(zhì)組學研究的主要分析手段。定量分析可以是絕對的也可以是相對的,實際上,MS的許多生化應用都依賴于相對定量,而相對定量則分為非標記定量技術及穩(wěn)定同位素標記定量技術。2.1?非標記定量技術?非標記定量技術主要的方法如下:一種是基于質(zhì)譜峰的峰面積或峰強度來進行定量[18],另外一種是基于蛋白的肽段鑒定數(shù)來進行定量[19]。近年來,基于質(zhì)譜的非標記定量技術隨著其數(shù)據(jù)處理軟件和程序的不斷開發(fā),該技術得到了較廣泛的應用,如SAINT-MS1[20]、RIPPER[21]。非標記定量技術少了標記步驟,減少了標記時導致的誤差,而且因為每個樣品是分開進行分析的,所以解決了分析樣品數(shù)量的煩惱,甚至可以實現(xiàn)同時多組生物樣品的高通量定量分析。

    2.2?穩(wěn)定同位素標記定量技術?蛋白質(zhì)組學相對定量的經(jīng)典方法——穩(wěn)定的同位素標記技術,是向樣品中引入穩(wěn)定同位素標記,通過比較不同同位素標記物的質(zhì)譜信號強度實現(xiàn)不同樣品中蛋白質(zhì)的相對定量分析。樣本在質(zhì)譜分析前、穩(wěn)定同位素標記后混合,一次性實現(xiàn)差異蛋白質(zhì)定量,有效消除了非標記定量分析過程中的不穩(wěn)定性,最大程度減小了定量誤差,主要技術包括通過細胞培養(yǎng)中的氨基酸對同位素進行穩(wěn)定同位素標記(SILAC)、酶促標記法以及化學標記法,化學標記法是蛋白質(zhì)組學研究中最常用的方法之一,因為它提供了將同位素標記選擇性地引入肽或蛋白質(zhì)所需位置的靈活性。它有一個類似于代謝標記的原理,化學反應是用來將這些標記合并到它們想要的位置[22]。一般的外泌體蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析流程如圖1。

    3?外泌體蛋白質(zhì)組學在腎臟疾病診療中的應用

    腎臟是一個復雜的器官,對體內(nèi)體液平衡起著至關重要的作用,其損傷以及改變對個人的健康產(chǎn)生巨大影響。腎臟的功能單位,即腎單位,在不同的結構(腎小球、小管等)和高度分化的極化上皮細胞方面顯示出精細的組織結構,所有這些細胞都具有特定的轉運特性。因此,編碼不同蛋白質(zhì)的基因突變,如受體、通道和轉運蛋白、酶、轉錄因子和結構成分,不僅影響腎功能,而且影響腎外器官。因此,外泌體蛋白質(zhì)組學在腎臟的形成及相關疾病的診療是具有一定潛力的。

    3.1?糖尿病腎病?糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是一種進行性腎臟疾病,是糖尿病的主要并發(fā)癥,也是終末期腎臟疾病最常見的病因,以腎病綜合征和彌漫性腎小球硬化為特征。早期DN無明顯的癥狀。目前,在診斷有糖尿病的基礎上,微量白蛋白尿以及大量蛋白尿為評估糖尿病腎病風險的最佳無創(chuàng)性指標,但仍有其局限性。RAIMONDO等人[24]應用無標記LC-MS/MS方法從2型DN動物模型中分離出尿外泌體的差異蛋白質(zhì)組,這些蛋白質(zhì)主要是膜相關或細胞質(zhì)的,參與運輸、信號和細胞黏附,是外泌體蛋白的經(jīng)典功能,提示外泌體蛋白質(zhì)組學在DN生物標志物發(fā)現(xiàn)中的潛力。ZUBIRI等人[25]發(fā)現(xiàn)DN大鼠腎組織中的調(diào)節(jié)蛋白-30明顯下調(diào),同樣的,在其尿外泌體也有相同的變化趨勢,同時這些結果在人類樣本的初步研究中得到了進一步證實。同樣,ZUBIRI等[26]發(fā)現(xiàn)DN患者尿外泌體中AMBP、MLL3和VDAC1呈現(xiàn)顯著的改變,表明外泌體蛋白質(zhì)組學可以作為DN早期診斷和進展監(jiān)測的新工具。

    3.2?高血壓性腎病?蛋白尿是高血壓患者中心血管風險和腎臟損害的指標,慢性腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system,RAS)抑制可促進血壓控制并防止新發(fā)性白蛋白尿的發(fā)展。然而,盡管存在慢性RAS阻滯,仍有大量患者發(fā)生蛋白尿,并且其生理病理機制尚未得到充分研究。GONZALEZ-CALERO等人[27]對目標患者進行了3年的隨訪,其分類為:a)持續(xù)性白蛋白尿患者;b)發(fā)生新蛋白尿的患者;c)維持蛋白尿的患者,組之間進行外泌體蛋白質(zhì)組學分析,總共鑒定出487種蛋白質(zhì),其中48種蛋白質(zhì)在對高血壓和/或蛋白尿的反應中顯示出改變的模式,通過GO富集分析發(fā)現(xiàn)顯著改變的蛋白質(zhì)是免疫應答、補體激活、蛋白水解和代謝過程的主要參與者,主要與硫化合物、脂質(zhì)和多糖的代謝有關。鑒定出的蛋白質(zhì)構成藥物開發(fā)的潛在靶標,并可能有助于確定治療策略,以避開長期治療的高血壓患者的蛋白尿進展。

    3.3?腎結石?全球范圍內(nèi),約80%的腎結石由草酸鈣與磷酸鈣混合而成[28],SINGHTO等[29]發(fā)現(xiàn)與CaO一水化合物(CaOx monohydrate,COM)一起孵育的巨噬細胞外泌體中,Annexin A2 等26種蛋白質(zhì)的含量發(fā)生了明顯變化,經(jīng)蛋白質(zhì)網(wǎng)絡分析表明,這些差異的蛋白質(zhì)參與了細胞骨架和肌動蛋白的結合、鈣結合、應激反應、轉錄調(diào)節(jié)、免疫反應以及細胞外基質(zhì)的分解。經(jīng)功能分析得知,經(jīng)COM處理的外泌體增強了腎小管細胞的IL-8產(chǎn)生,激活了中性粒細胞遷移,增加了外泌體膜的脆性,與COM晶體的結合能力增強,隨后增強了通過細胞外基質(zhì)遷移腔室的晶體入侵。這表明巨噬細胞外泌體在對COM晶體的炎癥反應中起重要作用,并且可能參與腎間質(zhì)的晶體侵襲、轉錄調(diào)控、免疫應答和細胞外基質(zhì)分解。因此,這些來自COM處理的巨噬細胞的外泌體誘導的協(xié)同反應極大可能促進腎結石的形成。但仍需進一步的研究,特別是在臨床上證實此假設。

    3.4?心腎綜合征?慢性心力衰竭(chronic heart failure,HF)破壞正常的腎功能,并導致進一步促進HF進展的心腎綜合征。MELENOVSKY等人[30]在慢性容量超負荷的雄性大鼠體內(nèi)使用主動脈-腔靜脈瘺管誘發(fā)HF,發(fā)現(xiàn)HF腎臟相對于對照組,有67種蛋白質(zhì)的表達差異約1.5倍,且差異最大的是血管緊張素轉換酶,上調(diào)20倍,高級糖基化產(chǎn)物特異性受體、骨膜素、caveolin-1和其他與內(nèi)皮功能有關的其他蛋白質(zhì)(vWF、cavins1-3、T-kininogen2),促炎性ECM激活(MFAP4、collagen-VI、galectin-3、FHL-1、calponin)和參與腎小球濾過膜完整性的蛋白質(zhì)(CLIC5、ZO-1),這些差異蛋白質(zhì)可以與腎內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活協(xié)同作用,并且可以作為治療心腎綜合征的標志物以及治療靶標。

    3.5?監(jiān)測移植組織的免疫排斥反應?腎臟移植是終末期腎臟疾病的首選和最成功的治療方法,但因為受體及供體免疫表型的因素,需要檢測移植是否成活,腎穿則是監(jiān)測的“金標準”,但反復的侵入性操作,產(chǎn)生較多的并發(fā)癥風險和相對較高的費用。有研究證明腎移植后T細胞參與腎臟同種異體移植的急性排斥過程[31],PARK團隊[32]研發(fā)了iKEA監(jiān)測平臺——整合的腎臟外泌體測定法,此平臺可檢測T細胞淋巴細胞的尿液外泌體,并成功發(fā)現(xiàn)CD3是檢測T細胞來源尿液外泌體的有效標記。SIGDEL等[33]從移植患者中鑒定出的349種外泌體蛋白中,功能上涉及炎癥和應激反應的11種尿液外泌體蛋白在急性排斥患者的尿液樣本中含量更高,其中3種是尿液外泌體所獨有的。尿液外泌體特異的蛋白質(zhì)改變提供了潛力,并提供了一組獨特的敏感生物標志物來監(jiān)測腎移植急性排斥。

    3.6?海綿狀海綿腎病?海綿狀海綿腎?。╩edullary sponge kidney,MSK)是一種罕見且被忽視的腎臟疾病,通常與腎鈣化/腎結石病和腎盂前導管中的囊性異常有關,MSK的診斷準確性目前較低,因為它取決于個人經(jīng)驗,并且診斷需要有創(chuàng)放射線和/或腎毒性造影劑進行醫(yī)學成像。BRUSCHI等人[34]從MSK患者的尿液中分離出外泌體并鑒定其中蛋白質(zhì)含量,確定了由20種高區(qū)分蛋白組成的核心小組,最有特征的是Ficolin 1、甘露聚糖結合凝集素絲氨酸蛋白酶2(MASP2)和補體成分4-結合蛋白β(C4BPB),這些都是凝集素補體途徑的主要調(diào)節(jié)成員,F(xiàn)icolin 1可以與MASP2形成復合物以激活凝集素補體途徑[35],而在MSK患者中MASP2的下調(diào)伴隨著C4BPB的上調(diào),C4BPB是一種多聚體蛋白,通過阻止經(jīng)典C3和C5轉化酶的形成來抑制補體級聯(lián)反應的激活[36]。這可能反映了腎臟減輕凝集素補體途徑激活的生理嘗試。這也可以解釋FCN1和MASP2的反調(diào)控。但是,需要更多的研究來證實這種效果。所以,根據(jù)以上外泌體蛋白數(shù)據(jù)首次表明凝集素補體途徑可能參與了與MSK相關的復雜生物機制。

    4?展望

    目前,隨著疾病的多樣化,傳統(tǒng)的診療手段已滿足不了人們對疾病診療的期望,應運而生的精準醫(yī)學成為熱門的話題,而外泌體蛋白質(zhì)組學代表細胞的特定標記,能最大程度地反映細胞的狀態(tài),因此成為疾病診療的標志物的候選者,但由于目前外泌體的分離純化以及蛋白質(zhì)組學的分析技術尚未成熟,導致相關研究較少,所以,需要進一步深入研究外泌體蛋白質(zhì),尤其是腎臟疾病,甚至更多相關疾病的預防、診斷、治療和預后等方面,從而在腎臟疾病的診治上獲得新的思路。

    參 考 文 獻

    [1]?車春紅,朱國貞.NGAL與腎臟疾病相關性的研究進展[J].生命科學,2019,31(1):99-105.

    [2]?FIEDLER G M,VOGT B.Laboratory tests for kidney disease[J].Internist (Berl),2019,60(5):485-501.

    [3]?MHAMEDI S A,MEGHRAOUI H,BENABDELHAK M,et al.La ponction biopsie rénale:indications,complications et rsultats[J].Pan Afr Med J,2018,31:44.

    [4]?孫楠,孫守國,盧志亮,等.肺鱗癌患者血漿外泌體中蛋白標志物的診斷價值[J].中華腫瘤雜志,2018,40(6):418-421.

    [5]?張浩亮.食管鱗狀細胞癌血漿外泌體腫瘤標記物的蛋白質(zhì)組學篩選及驗證[D].鄭州:鄭州大學,2018.

    [6]?CECCHETTINI A,F(xiàn)INAMORE F,PUXEDDU I,et al.Salivary extracellular vesicles versus whole saliva:new perspectives for the identification of proteomic biomarkers in Sjgren's syndrome[J].Clin Exp Rheumatol,2019,37 Suppl 118(3):240-248.

    [7]?WHITESIDE T L.Proteomic analysis of plasma-derived exosomes in defining their role as biomarkers of disease progression,response to therapy and outcome[J].Proteomes,2019,7(3):27.

    [8]?STREET J M,KORITZINSKY E H,GLISPIE D M,et al.Urine exosomes:an emerging trove of biomarkers[J].Adv Clin Chem,2017,78:103-122.

    [9]?HAYASHI N,DOI H,KURATA Y,et al.Proteomic analysis of exosome-enriched fractions derived from cerebrospinal fluid of amyotrophic lateral sclerosis patients[J].Neurosci Res, 2019,S0168-0102(19):30487-30490.

    [10]?EBERT B,RAI A J.Isolation and characterization of amniotic fluid-derived extracellular vesicles for biomarker discovery[J].Methods Mol Biol,2019,1885:287-294.

    [11]?BORIACHEK K,ISLAM M N,MLLER A,et al.Biological functions and current advances in isolation and detection strategies for exosome nanovesicles[J].Small,2018,14(6):1702153.

    [12]?LIN J,LI J,HUANG B,et al.Exosomes:novel biomarkers for clinical diagnosis[J].Sci World J,2015,2015:1-8.

    [13]?ZHU T,WANG Y,JIN H,et al.The role of exosome in autoimmune connective tissue disease[J].Ann Med,2019,51(2):101-108.

    [14]?TOMASETTI M,LEE W,SANTARELLI L,et al.Exosome-derived microRNAs in cancer metabolism:possible implications in cancer diagnostics and therapy[J].Exp Mol Med,2017,49(1):e285.

    [15]?KULKARNI S,KOLLER A,MANI K M,et al.Identifying urinary and serum exosome biomarkers for radiation exposure using a data dependent acquisition and SWATH-MS combined workflow[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys,2016,96(3):566-577.

    [16]?CHEN I H,XUE L,HSU C C,et al.Phosphoproteins in extracellular vesicles as candidate markers for breast cancer[J].Proc Natl Acad Sci USA,2017,114(12):3175-3180.

    [17]?OLSEN J V,BLAGOEV B,GNAD F,et al.Global,in vivo,and site-specific phosphorylation dynamics in signaling networks[J].Cell,2006,127(3):635-648.

    [18]?BONDARENKO P V,CHELIUS D,SHALER T A.Identification and relative quantitation of protein mixtures by enzymatic digestion followed by capillary reversed-phase liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Anal Chem,2002,74(18):4741-4749.

    [19]?LIU H B,SADYGOV R G,YATES J R.A model for random sampling and estimation of relative protein abundance in shotgun proteomics[J].Anal Chem,2004,76(14):4193-4201.

    [20]?CHOI H,GLATTER T,GSTAIGER M,et al.SAINT-MS1:protein-protein interaction scoring using label-free intensity data in affinity purification-mass spectrometry experiments[J].J Proteome Res,2012,11(4):2619-2624.

    [21]?VAN RIPER S K,HIGGINS L,CARLIS J V,et al.RIPPER:a framework for MS1 only metabolomics and proteomics label-free relative quantification[J].Bioinformatics,2016,32(13):2035-2037.

    [22]?ANAND S,SAMUEL M,ANG C S,et al.Label-Based and Label-Free Strategies for Protein Quantitation[J]. Methods Mol Biol, 2017,1549:31-43.

    [23]?LI J,HE X Q,DENG Y Y,et al.An update on isolation methods for proteomic studies of extracellular vesicles in biofluids[J].Molecules,2019,24(19):3516.

    [24]?RAIMONDO F,CORBETTA S,MOROSI L,et al.Urinary exosomes and diabetic nephropathy:a proteomic approach[J].Mol Biosyst,2013,9(6):1139-1146.

    [25]?ZUBIRI I,POSADA-AYALA M,BENITO-MARTIN A,et al.Kidney tissue proteomics reveals regucalcin downregulation in response to diabetic nephropathy with reflection in urinary exosomes[J].Transl Res,2015,166(5):474-484.e4.

    [26]?ZUBIRI I,POSADA-AYALA M,SANZ-MAROTO A,et al.Diabetic nephropathy induces changes in the proteome of human urinary exosomes as revealed by label-free comparative analysis[J].J Proteom,2014,96:92-102.

    [27]?GONZALEZ-CALERO L,MARTNEZ P J,MARTIN-LORENZO M,et al.Urinary exosomes reveal protein signatures in hypertensive patients with albuminuria[J].Oncotarget,2017,8(27):44217-44231.

    [28]?KHAN S R,PEARLE M S,ROBERTSON W G,et al.Kidney stones[J].Nat Rev Dis Primers,2016,2:16008.

    [29]?SINGHTO N,THONGBOONKERD V.Exosomes derived from calcium oxalate-exposed macrophages enhance IL-8 production from renal cells,neutrophil migration and crystal invasion through extracellular matrix[J].J Proteomics,2018,185:64-76.

    [30]?MELENOVSKY V,CERVENKA L,VIKLICKY O,et al.Kidney response to heart failure:proteomic analysis of cardiorenal syndrome[J].Kidney Blood Press Res,2018,43(5):1437-1450.

    [31]?VALLABHAJOSYULA P,KORUTLA L,HABERTHEUER A,et al.Tissue-specific exosome biomarkers for noninvasively monitoring immunologic rejection of transplanted tissue[J].J Clin Invest,2017,127(4):1375-1391.

    [32]?PARK J,LIN H Y,ASSAKER J P,et al.Integrated kidney exosome analysis for the detection of kidney transplant rejection[J].ACS Nano,2017,11(11):11041-11046.

    [33]?SIGDEL T K,NG Y W,LEE S,et al.Perturbations in the urinary exosome in transplant rejection[J].Front Med (Lausanne),2014,1:57.

    [34]?BRUSCHI M,GRANATA S,CANDIANO G,et al.Proteomic analysis of urinary extracellular vesicles reveals a role for the complement system in medullary sponge kidney disease[J].Int J Mol Sci,2019,20(21):5517.

    [35]?THIEL S.Complement activating soluble pattern recognition molecules with collagen-like regions,mannan-binding lectin,ficolins and associated proteins[J].Mol Immunol,2007,44(16):3875-3888.

    [36]?RAWAL N,RAJAGOPALAN R,SALVI V P.Stringent regulation of complement lectin pathway C3/C5 convertase by C4b-binding protein (C4BP)[J].Mol Immunol,2009,46(15):2902-2910.

    (收稿日期:2020-06-22?修回日期:2020-07-23)

    (編輯:梁明佩)

    999久久久精品免费观看国产| 国产久久久一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 国内精品久久久久久久电影| 精品免费久久久久久久清纯| 日日撸夜夜添| 三级国产精品欧美在线观看| 精品久久久噜噜| 最近的中文字幕免费完整| 精品久久久精品久久久| 国产精品女同一区二区软件| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久久久国产网址| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久人人爽人人片av| 国产高清国产精品国产三级 | 久久99蜜桃精品久久| 99久久精品一区二区三区| 黄色视频在线播放观看不卡| 搡老乐熟女国产| 成人国产麻豆网| 这个男人来自地球电影免费观看 | 一级毛片电影观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 观看av在线不卡| 国产人妻一区二区三区在| 久久国产乱子免费精品| 一个人看的www免费观看视频| 国产 一区 欧美 日韩| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品欧美亚洲77777| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产黄片美女视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 亚洲天堂av无毛| 一级av片app| 国产高清有码在线观看视频| 777米奇影视久久| 26uuu在线亚洲综合色| 中文天堂在线官网| 久久久久国产网址| 欧美日韩亚洲高清精品| 99热这里只有精品一区| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲一区二区三区欧美精品| 新久久久久国产一级毛片| 国产在视频线精品| 亚洲av成人精品一二三区| 日本-黄色视频高清免费观看| 另类亚洲欧美激情| 亚洲精品国产av成人精品| 777米奇影视久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲经典国产精华液单| 美女视频免费永久观看网站| 欧美成人a在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 三级国产精品片| 久久久久久久精品精品| 亚洲欧洲日产国产| 欧美另类一区| 一级二级三级毛片免费看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 99热网站在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产有黄有色有爽视频| 一级二级三级毛片免费看| 大陆偷拍与自拍| 免费人成在线观看视频色| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产精品福利在线免费观看| 女人久久www免费人成看片| 成年女人在线观看亚洲视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 毛片一级片免费看久久久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲欧美日韩东京热| 国产淫语在线视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 下体分泌物呈黄色| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 少妇人妻 视频| 一个人看视频在线观看www免费| videos熟女内射| 一级av片app| 国产亚洲一区二区精品| 一区二区三区乱码不卡18| 少妇人妻 视频| 国产高潮美女av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 在线看a的网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕免费在线视频6| 熟女人妻精品中文字幕| 精品久久久久久久末码| 777米奇影视久久| 两个人的视频大全免费| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产成人a区在线观看| 久久久久久久国产电影| 精品人妻熟女av久视频| 性色avwww在线观看| 嫩草影院新地址| 国产一区亚洲一区在线观看| 日韩中字成人| 街头女战士在线观看网站| 三级经典国产精品| 亚洲第一av免费看| 下体分泌物呈黄色| 老司机影院成人| 国产精品偷伦视频观看了| 九草在线视频观看| 国产在线一区二区三区精| 午夜老司机福利剧场| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美另类一区| 国产成人精品婷婷| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲国产日韩一区二区| 秋霞伦理黄片| 国产亚洲欧美精品永久| 熟女电影av网| 国产伦在线观看视频一区| 久久婷婷青草| 精品亚洲成a人片在线观看 | 大话2 男鬼变身卡| 观看av在线不卡| 最近最新中文字幕免费大全7| 一级毛片 在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 少妇被粗大猛烈的视频| 日本与韩国留学比较| 日日啪夜夜爽| 成年av动漫网址| 国产一区有黄有色的免费视频| 热re99久久精品国产66热6| 韩国av在线不卡| 久久久久性生活片| 亚洲av.av天堂| 日日啪夜夜撸| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久久欧美国产精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲四区av| 亚洲怡红院男人天堂| 22中文网久久字幕| 少妇的逼好多水| 九色成人免费人妻av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 亚洲欧美精品专区久久| 精品国产露脸久久av麻豆| 赤兔流量卡办理| 日韩亚洲欧美综合| 高清av免费在线| 波野结衣二区三区在线| 亚洲国产色片| 十分钟在线观看高清视频www | 日韩伦理黄色片| 欧美激情国产日韩精品一区| 97精品久久久久久久久久精品| 国产男人的电影天堂91| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 成人综合一区亚洲| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品久久久久久电影网| 国产精品.久久久| 亚洲av不卡在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 国产精品无大码| 国产黄频视频在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 成人国产av品久久久| 嘟嘟电影网在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 国产视频首页在线观看| 亚洲av.av天堂| 又大又黄又爽视频免费| 久久99精品国语久久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 午夜福利在线在线| 边亲边吃奶的免费视频| 免费观看在线日韩| 成年av动漫网址| 久久99热6这里只有精品| 99热这里只有是精品在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | av线在线观看网站| 老熟女久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 涩涩av久久男人的天堂| 观看免费一级毛片| 国产成人精品一,二区| 成人综合一区亚洲| 成人一区二区视频在线观看| 久久婷婷青草| 欧美+日韩+精品| 国产永久视频网站| 国产高潮美女av| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产免费福利视频在线观看| 精品久久国产蜜桃| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品国产三级专区第一集| 国产乱人偷精品视频| 成人无遮挡网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 黄色视频在线播放观看不卡| 国产一区亚洲一区在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久国产精品大桥未久av | 成人特级av手机在线观看| 久久99精品国语久久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 熟女电影av网| 成人毛片a级毛片在线播放| 交换朋友夫妻互换小说| 午夜福利在线在线| 最黄视频免费看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 婷婷色麻豆天堂久久| 免费观看av网站的网址| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美性感艳星| 一级毛片我不卡| 一个人免费看片子| 赤兔流量卡办理| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 九九在线视频观看精品| 在线天堂最新版资源| 中文天堂在线官网| 国产精品偷伦视频观看了| 国产成人91sexporn| 精品一区二区免费观看| 久久久久视频综合| 精品久久久久久久久av| 毛片一级片免费看久久久久| 精品一区二区三区视频在线| 国产亚洲一区二区精品| 韩国高清视频一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一级av片app| 午夜免费观看性视频| 国产毛片在线视频| 久久鲁丝午夜福利片| 色网站视频免费| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 黄片wwwwww| 精品午夜福利在线看| 深爱激情五月婷婷| 日韩免费高清中文字幕av| 国产中年淑女户外野战色| 国产爽快片一区二区三区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日韩欧美一区视频在线观看 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久a久久爽久久v久久| 内射极品少妇av片p| www.av在线官网国产| av福利片在线观看| 午夜福利在线在线| 中国三级夫妇交换| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美+日韩+精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲天堂av无毛| 搡老乐熟女国产| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 激情五月婷婷亚洲| 一区二区三区免费毛片| 韩国av在线不卡| 性色avwww在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品第二区| 新久久久久国产一级毛片| 久久婷婷青草| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 国产精品人妻久久久久久| 日韩电影二区| 欧美高清成人免费视频www| 一个人看的www免费观看视频| 国产乱人视频| 久久久久久伊人网av| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲欧美清纯卡通| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一级爰片在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久av网站| 免费人成在线观看视频色| 91狼人影院| 精品少妇黑人巨大在线播放| 最近中文字幕2019免费版| 日本色播在线视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲欧洲日产国产| 免费观看无遮挡的男女| 欧美3d第一页| 九九爱精品视频在线观看| av专区在线播放| 久久国产精品大桥未久av | 欧美一级a爱片免费观看看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产69精品久久久久777片| h视频一区二区三区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲精品,欧美精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 嫩草影院入口| 国产v大片淫在线免费观看| kizo精华| 中文天堂在线官网| 97超视频在线观看视频| 欧美97在线视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 91精品一卡2卡3卡4卡| 精品酒店卫生间| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品一区蜜桃| 成人免费观看视频高清| freevideosex欧美| 亚洲av.av天堂| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 超碰97精品在线观看| 中文资源天堂在线| 免费观看av网站的网址| 亚洲欧美精品专区久久| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲国产最新在线播放| 丝瓜视频免费看黄片| 18+在线观看网站| 亚洲久久久国产精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 我的老师免费观看完整版| 草草在线视频免费看| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产视频内射| 国产午夜精品一二区理论片| 永久免费av网站大全| 精品国产三级普通话版| 欧美精品一区二区免费开放| 99久久中文字幕三级久久日本| 美女福利国产在线 | 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产亚洲欧美精品永久| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 香蕉精品网在线| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 中文天堂在线官网| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 一区二区三区免费毛片| 成年av动漫网址| 日本黄色日本黄色录像| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 午夜激情福利司机影院| 国产在线男女| 日韩人妻高清精品专区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| xxx大片免费视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 97超碰精品成人国产| 最黄视频免费看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲图色成人| 国产男女超爽视频在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 一二三四中文在线观看免费高清| 久热久热在线精品观看| 不卡视频在线观看欧美| 久久国产乱子免费精品| av国产精品久久久久影院| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲欧洲国产日韩| 免费观看无遮挡的男女| 日韩免费高清中文字幕av| 国产精品蜜桃在线观看| h日本视频在线播放| 日日撸夜夜添| 欧美zozozo另类| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲无线观看免费| 国产av精品麻豆| 精品一区二区免费观看| 国模一区二区三区四区视频| 欧美成人午夜免费资源| 五月开心婷婷网| 七月丁香在线播放| 午夜老司机福利剧场| 欧美97在线视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产高清有码在线观看视频| av线在线观看网站| 在线天堂最新版资源| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 午夜视频国产福利| 国产亚洲5aaaaa淫片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费黄色在线免费观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日本与韩国留学比较| 亚洲色图综合在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| av.在线天堂| 多毛熟女@视频| 免费看av在线观看网站| 久久久久国产网址| 久久久久久久久大av| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 秋霞伦理黄片| 欧美日韩在线观看h| 天天躁日日操中文字幕| 超碰97精品在线观看| 亚洲精品一二三| 久久精品国产自在天天线| 毛片女人毛片| 老司机影院毛片| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲av欧美aⅴ国产| av一本久久久久| 极品教师在线视频| 熟女电影av网| 欧美国产精品一级二级三级 | 女人十人毛片免费观看3o分钟| 极品少妇高潮喷水抽搐| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人精品一,二区| 久久99蜜桃精品久久| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲精品一区蜜桃| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美一区二区亚洲| 国产高清三级在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日韩强制内射视频| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美xxⅹ黑人| 久久综合国产亚洲精品| 国产亚洲一区二区精品| 看免费成人av毛片| 一级a做视频免费观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久久亚洲精品成人影院| av卡一久久| 久久亚洲国产成人精品v| 黑人高潮一二区| 国产成人aa在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 精品午夜福利在线看| 一级av片app| 在线看a的网站| 亚洲色图综合在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 街头女战士在线观看网站| av卡一久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一区二区av电影网| 精品人妻熟女av久视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久久国产一区二区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产乱人视频| 午夜福利影视在线免费观看| 少妇高潮的动态图| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 永久免费av网站大全| 91精品伊人久久大香线蕉| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品色激情综合| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 伦理电影免费视频| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲成人手机| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品成人在线| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 国产一区二区在线观看日韩| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 少妇人妻 视频| 精品人妻熟女av久视频| 久久国产精品大桥未久av | 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 妹子高潮喷水视频| 国产高潮美女av| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产伦理片在线播放av一区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久热久热在线精品观看| 交换朋友夫妻互换小说| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品久久久久久电影网| 99热这里只有是精品在线观看| 男女免费视频国产| 精品久久久久久久末码| 国产毛片在线视频| 激情五月婷婷亚洲| av在线老鸭窝| 在线观看一区二区三区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产爱豆传媒在线观看| 日本欧美国产在线视频| 国产精品.久久久| 丰满乱子伦码专区| av在线老鸭窝| 国产精品av视频在线免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 午夜福利视频精品| 五月开心婷婷网| 亚洲成人手机| 国产精品一区二区在线观看99| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 一个人看视频在线观看www免费| 免费大片18禁| 亚洲国产日韩一区二区| 观看美女的网站| 蜜桃在线观看..| 亚洲欧洲日产国产| 丝袜喷水一区| 日本wwww免费看| 欧美 日韩 精品 国产| 日日啪夜夜撸| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 人妻 亚洲 视频| 精品午夜福利在线看| av黄色大香蕉| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲av综合色区一区| 午夜福利在线在线| 国产精品一区www在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 美女内射精品一级片tv| 国产欧美亚洲国产| 观看美女的网站| 国产成人一区二区在线| 成人影院久久| 亚洲人成网站在线观看播放| 在线观看三级黄色| 在线观看人妻少妇| 国产成人91sexporn| 内地一区二区视频在线| 美女主播在线视频| 国产精品伦人一区二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产 精品1| 久久久久久九九精品二区国产| 日韩亚洲欧美综合| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 人人妻人人看人人澡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 在线观看免费视频网站a站| 久久人人爽人人爽人人片va| 黄色欧美视频在线观看| 97超视频在线观看视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲综合色惰| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 精品一区二区免费观看| 又爽又黄a免费视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 精品人妻一区二区三区麻豆| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产色爽女视频免费观看| 日本vs欧美在线观看视频 | 美女高潮的动态| 日本av免费视频播放| 亚洲av综合色区一区| 成人黄色视频免费在线看| 男人狂女人下面高潮的视频| 日本色播在线视频| 中文字幕免费在线视频6| 搡女人真爽免费视频火全软件| 直男gayav资源| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲国产欧美在线一区| 在线观看人妻少妇| 精品午夜福利在线看| 久久婷婷青草|