ART3抑制劑3-MBA對(duì)小鼠睪丸生精功能的影響

段晨瑩，李 欣，趙羚均，許師源，原開敏，董智豪,3，郭冠華,4，王 棟*

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)春 130118；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193；3.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，洛陽(yáng) 471203； 4.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，太谷 030801)

睪丸和附睪是哺乳動(dòng)物精子發(fā)生和成熟的主要場(chǎng)所，精子發(fā)生需經(jīng)過(guò)精原干細(xì)胞增殖、減數(shù)分裂和精子變形等過(guò)程，變形后的精子離開睪丸進(jìn)入附睪后，進(jìn)一步發(fā)育成熟并逐漸獲得運(yùn)動(dòng)能力。該過(guò)程正常、高效、有序運(yùn)行，是確保精子功能正常的必要條件，需要精細(xì)而復(fù)雜的表達(dá)調(diào)控，期間的基因表達(dá)也就成為精子發(fā)生機(jī)制研究的重要內(nèi)容，為此，很多研究通過(guò)精子基因組、轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組挖掘雄性生育力的分子靶標(biāo)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，1頭種公牛一次射精可產(chǎn)生數(shù)十億精子，但精子功能基因組缺陷導(dǎo)致種公牛生精功能紊亂，生育能力變差，增加不孕風(fēng)險(xiǎn)，降低生產(chǎn)效率。為深入探究精子發(fā)生機(jī)制，深度挖掘種公畜的繁殖潛能，本團(tuán)隊(duì)前期對(duì)牛和小鼠精子變形期間差異基因進(jìn)行富集分析和蛋白網(wǎng)絡(luò)互作分析，發(fā)現(xiàn)了差異表達(dá)基因ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶3(ADP-ribosyl transferase 3，3)，該基因?qū)幼冃伟l(fā)揮了重要的調(diào)控作用。

ART3是單-ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶(mono(ADP-ribosyl) transferases，ARTs)家族成員，該家族以煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，NAD)為底物，將ADP-核糖基團(tuán)轉(zhuǎn)移至目標(biāo)蛋白的氨基酸殘基上，完成對(duì)目標(biāo)蛋白的ADP-核糖基化修飾。研究發(fā)現(xiàn)，參與ADP-核糖基作用的主要氨基酸殘基為精氨酸和半胱氨酸，然而，F(xiàn)riedrich等通過(guò)ART3蛋白結(jié)構(gòu)分析和體外轉(zhuǎn)染ART3酶活試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)ART3不具有ARTs家族特有的精氨酸特異性酶活性，也不具有半胱氨酸特異性酶活性，推測(cè)體外條件下ART3可能完全喪失了ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶活性，但是，該研究沒(méi)有深入挖掘該基因的生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn)，在人和牛精母細(xì)胞上可檢測(cè)到ART3蛋白，也可在小鼠和牛精子變形期間檢測(cè)到其表達(dá)，并且檢測(cè)到3基因與人非阻塞性無(wú)精癥(non-obstructive azoospermia，NOA)顯著相關(guān)，是導(dǎo)致男性不育的重要因素。但是，目前尚未見到關(guān)于3基因參與調(diào)控精子發(fā)生機(jī)制的報(bào)道，也未見到該基因缺陷導(dǎo)致NOA和男性不育機(jī)制的報(bào)道，ART3的確切生物學(xué)功能還需深入研究。

為此，本試驗(yàn)以小鼠為模式動(dòng)物，通過(guò)睪丸注射不同劑量ART3抑制劑3-甲氧基苯甲酰胺(3-methoxybenzamide，3-MBA)，檢測(cè)小鼠睪丸生理指標(biāo)，分析附睪尾精子的動(dòng)力學(xué)和形態(tài)學(xué)特征，探究ART3調(diào)控小鼠精子發(fā)生機(jī)制，為提高雄性動(dòng)物繁殖性能提供理論依據(jù)，也為治療雄性不育提供可治療的分子靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)動(dòng)物為6～8周齡健康且繁殖性能正常的雄性ICR小鼠，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，試驗(yàn)動(dòng)物在20～25 ℃、自然光照條件下飼養(yǎng)，自由采食、飲水，每周更換1次墊料。試驗(yàn)鼠及試驗(yàn)方法均符合中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)福利倫理審查(No：IAS2019-13)要求。

1.2 主要試劑及藥品配制

3-MBA、二甲基亞砜(DMSO)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；戊巴比妥鈉購(gòu)自德國(guó)Merck公司；無(wú)水乙醇、75%醫(yī)用酒精和二甲苯購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司；石蠟購(gòu)自上海華靈康復(fù)器械廠；多聚甲醛購(gòu)自天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；生理鹽水購(gòu)自北京萃鋒科技有限公司；蘇木素、蘇木素分化液、蘇木素返藍(lán)液、伊紅購(gòu)自武漢賽維爾生物有限公司。

3-MBA溶液配制：參考Shi和Lodhi等的方法，用DMSO將3-MBA粉末配置為濃度為0.302、0.906和1.510 mg·mL的溶液，配置方法如下：電子天平稱取0.302、0.906和1.510 mg的3-MBA粉末，分別溶解在1 mL DMSO中。

1.3 試驗(yàn)鼠注射ART3抑制劑

隨機(jī)選取66只雄性小鼠，其中63只分為3組，每組21只，分別注射濃度為0.302、0.906和1.510 mg·mL的3-MBA，其余3只為對(duì)照組，注射DMSO溶液。在注射3-MBA前，以60 mg·kg體重劑量腹腔注射2%戊巴比妥鈉，待小鼠完全處于麻醉狀態(tài)后使其保持仰臥姿勢(shì)，將睪丸從腹腔輕輕揉入陰囊后，用75%醫(yī)用酒精對(duì)陰囊部位消毒，左手食指與拇指固定單側(cè)睪丸，右手持連接1 mL注射器的無(wú)菌靜脈輸液針(內(nèi)含3-MBA注射液)，根據(jù)睪丸表面血管分布情況，避開睪丸白膜上的血管直接穿透陰囊進(jìn)入睪丸，用力推注射器將3-MBA注射液緩慢注入睪丸，根據(jù)小鼠體重決定注射劑量，計(jì)算方法為3-MBA注射液體積等于小鼠體重(V=M，V為注射體積，單位μL；M為小鼠體重，單位g)。對(duì)側(cè)睪丸同樣處理后，處理鼠單籠飼養(yǎng)。對(duì)照組雄性ICR小鼠雙側(cè)睪丸分別注射與處理組等體積的DMSO溶液。

1.4 樣本采集

于注射3-MBA溶液3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d后，脫頸處死試驗(yàn)鼠，用剪刀打開小鼠腹腔，從陰囊中取出小鼠雙側(cè)睪丸和附睪，將睪丸置于含4%多聚甲醛溶液的1.5 mL離心管中固定24～48 h；附睪置于含1 mL生理鹽水的1.5 mL離心管中，并用眼科剪剪碎附睪尾組織。然后，將離心管置于37 ℃水浴鍋恒溫保存20 min，以使精子從附睪尾充分浮游至上清液。

1.5 睪丸組織HE染色

1.5.1 制作睪丸組織石蠟切片 將固定好的小鼠睪丸組織依次置于50%乙醇(1.5 h)、75%乙醇(1.5 h)、85%乙醇(1 h)、95%乙醇(1 h)、無(wú)水乙醇Ⅰ(30 min)、無(wú)水乙醇Ⅱ(30 min)的梯度酒精中脫水，然后依次采用二甲苯∶無(wú)水乙醇=1∶1的混合液(1 h)、二甲苯Ⅰ(1 h)、二甲苯Ⅱ(1 h)透明后，于溶解好的石蠟中浸泡3 h。包埋好后，經(jīng)石蠟切片機(jī)切割成5 μm厚睪丸切片，將切片置于40 ℃左右溫水中展片，再用黏附載玻片貼片后置于55 ℃恒溫干燥箱中烤片5 h，使組織切片完全貼合在載玻片上。

1.5.2 HE染色 石蠟切片經(jīng)二甲苯Ⅰ(30 min)、二甲苯Ⅱ(30 min)脫蠟后，依次置于二甲苯∶無(wú)水乙醇=1∶1的混合液、無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇中各復(fù)水5 min，再用蒸餾水洗5 min；然后用蘇木素染色3 min、蒸餾水洗3 min、分化液分化10 s、蒸餾水洗2 min、返藍(lán)液返藍(lán)20 s、蒸餾水洗2 min、伊紅染色8 min、蒸餾水洗5 min，睪丸石蠟切片經(jīng)H&E染色后，依次經(jīng)85%乙醇(1 min)、95%乙醇(1 min)、無(wú)水乙醇Ⅰ(5 min)、無(wú)水乙醇Ⅱ(5 min)的梯度酒精脫水，再經(jīng)二甲苯Ⅰ(5 min)、二甲苯Ⅱ(5 min)透明；最后，用中性樹脂封片，置于正置熒光顯微鏡下觀察。

1.6 3-MBA處理鼠附睪尾精子的生理指標(biāo)檢測(cè)

1.6.1 附睪尾精子的精液質(zhì)量分析 用移液槍從附睪上清液中吸取10份精子懸液(每份5～10 μL)分別滴至37 ℃預(yù)熱的Leja板中，靜置2 min，用HamiltonThorne IVOS II全自動(dòng)精子分析儀分別在200×和400×鏡下進(jìn)行鏡檢。鏡檢時(shí)，隨機(jī)選取Leja板中的8個(gè)不同區(qū)域進(jìn)行分析。鏡檢后統(tǒng)計(jì)每份精液的濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率和活力，并計(jì)算出均值。

1.6.2 精子畸形率分析 用移液槍從附睪上清液中吸取10 μL精子懸液滴至黏附載玻片上，并用槍頭涂抹均勻，涂片后用酒精擦拭過(guò)的蓋玻片封片，并在室溫下風(fēng)干。然后，將制作好的切片置于100×油鏡下檢查精子形態(tài)，計(jì)數(shù)結(jié)構(gòu)完整和畸形的精子，畸形精子主要類別有：胖頭精子、圓頭精子、雙頭精子、無(wú)頭精子和尾部角彎折、卷曲、斷裂、雙尾精子等。每只小鼠檢查1 000個(gè)精子，畸形率(%)=((1 000-正常精子)/1 000)×100。

1.7 數(shù)據(jù)分析

使用Excel和SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素ANOVA法進(jìn)行方差分析，采用檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn)，<0.05表示差異顯著，<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 不同劑量3-MBA對(duì)小鼠睪丸生精細(xì)胞的影響

圖1顯示，小鼠睪丸注射不同劑量3-MBA后，0.302、0.906和1.510 mg·mL劑量組分別在注射后12 h、6 h和3 h曲細(xì)精管內(nèi)觀察到空泡，并隨時(shí)間推移空泡逐漸增多增大，同時(shí)觀察到曲細(xì)精管內(nèi)生精細(xì)胞逐漸減少，排布變得散亂不規(guī)則。0.906 和1.510 mg·mL劑量組于注射后5 d空泡面積達(dá)到最大，且曲細(xì)精管出現(xiàn)空管現(xiàn)象，而0.302 mg·mL劑量組則于注射后3 d空泡面積達(dá)到最大，與注射后3 d相比，注射后5 d空泡面積減少，生精細(xì)胞數(shù)量增加，有恢復(fù)趨勢(shì)。

A.對(duì)照組小鼠睪丸切片;B1-B7分別為注射0.302 mg·mL-1 3-MBA后3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d和5 d切片；C1-C7分別為注射0.906 mg·mL-1 3-MBA后3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d和5 d切片；D1-D7分別為注射1.510 mg·mL-1 3-MBA后3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d和5 d切片A. Testicular section of control mice; B1-B7 are sections at 3 h, 6 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d and 5 d after 0.302 mg·mL-1 3-MBA injection, respectively; C1-C7 are sections at 3 h, 6 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d and 5 d after 0.906 mg·mL-1 3-MBA injection, respectively; D1-D7 are sections at 3 h, 6 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d and 5 d after 1.510 mg·mL-1 3-MBA injection, respectively 圖1 不同劑量3-MBA處理后小鼠睪丸切片HE染色結(jié)果(40×)Fig.1 HE staining results of testicular section of mice treated with different doses of 3-MBA(40×)

2.2 注射不同劑量3-MBA后附睪尾精子動(dòng)力學(xué)分析

2.2.1 不同劑量3-MBA對(duì)精子密度的影響 表1顯示，小鼠睪丸注射不同劑量3-MBA后，與對(duì)照組相比，0.302 mg·mL劑量組無(wú)顯著差異(>0.05)，而0.906和1.510 mg·mL劑量組附睪尾精子密度從注射后3 d開始極顯著降低(<0.01)，且呈劑量依賴性降低。

表1 注射不同劑量3-MBA后附睪尾的精子密度Table 1 The density of sperms in caudal epididymis after injection of different doses of 3-MBA 106·mL-1

2.2.2 不同劑量3-MBA對(duì)精子活力的影響 表2顯示，小鼠睪丸注射不同劑量3-MBA后，與對(duì)照組相比，3個(gè)劑量組于注射后3、6和12 h附睪尾精子活力均無(wú)顯著差異(>0.05)，1.510 mg·mL劑量組從注射后1 d開始顯著降低(<0.05)，注射后2 d達(dá)到極顯著水平(<0.01)。0.906 mg·mL劑量組從注射后2 d開始精子活力極顯著降低(<0.01)，且隨時(shí)間推移進(jìn)一步降低，而0.302 mg·mL劑量組精子活力于注射后5 d后才開始顯著降低(<0.05)。

表2 注射不同劑量3-MBA后附睪尾精子活力Table 2 The motility of sperm in caudal epididymis after injection of different doses of 3-MBA %

2.2.3 不同劑量3-MBA對(duì)精子前向運(yùn)動(dòng)比例的影響 表3顯示，小鼠睪丸注射不同劑量3-MBA后，與對(duì)照組相比，3個(gè)劑量組于注射后3、6和12 h附睪尾前向運(yùn)動(dòng)精子比例均無(wú)顯著差異(>0.05)，1.510 mg·mL劑量組于注射后1 d極顯著降低(<0.01)，0.906 mg·mL劑量組于注射后2 d開始顯著降低(<0.05)，第3天達(dá)到極顯著水平(<0.01)，且隨時(shí)間推移進(jìn)一步降低，而0.302 mg·mL劑量組于注射后3 d精子前向運(yùn)動(dòng)比例才開始極顯著降低(<0.01)。

表3 注射不同劑量3-MBA后附睪尾精子前向運(yùn)動(dòng)比率Table 3 The progressive of sperms in caudal epididymis after injection of different doses of 3-MBA %

2.3 不同劑量3-MBA對(duì)附睪尾精子形態(tài)的影響

表4顯示，小鼠睪丸注射不同劑量3-MBA后，與對(duì)照組相比，3個(gè)劑量組于注射后3 h、6 h、12 h和1 d附睪尾精子畸形率均無(wú)顯著差異(>0.05)，1.510和0.906 mg·mL劑量組均從注射后2 d開始精子畸形率顯著增加(<0.05)，第3天達(dá)到極顯著水平(<0.01)，而0.302 mg·mL劑量組則從注射后3 d才觀察到精子畸形率極顯著增加(<0.01)。與對(duì)照組小鼠相比，抑制ART3后，小鼠精子頭部與頸部連接處斷裂(圖2C)，精子尾部出現(xiàn)斷裂(圖2B)、彎折(圖2D～F)和卷曲(圖2G～H)等異常形態(tài)。

表4 注射不同劑量3-MBA后附睪尾精子畸形率Table 4 The malformation rate of sperms in caudal epididymis after injection of different doses of 3-MBA %

A.形態(tài)正常的精子。B～H.異常形態(tài)精子(紅色箭頭指向精子畸形處)：B.精子尾部斷裂；C.頭部和頸部彎折；D～E.精子尾部彎折；F精子尾部成角彎折；G～H.精子尾部卷曲A. The normal morphology sperms. B-H. The abnormal morphology sperms (the red arrows point to the site of the sperm deformity): B. Break of the sperm tail; C. Bent of the sperm head and tail; D-E. Bent of the sperm tail; F. Angular bending of the sperm tail; G-H. Curl of the sperm tail圖2 3-MBA處理后附睪尾精子畸形形態(tài)圖片(100×)Fig.2 Image of abnormal morphology sperms in caudal epididymis after 3-MBA treatment(100×)

3 討 論

ART3參與細(xì)胞代謝的多種途徑，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、凋亡均具有重要意義，但ART3調(diào)控精子發(fā)生過(guò)程中細(xì)胞增殖、分化的研究還未見報(bào)道。研究表明，人和牛精母細(xì)胞均檢測(cè)到ART3表達(dá)，推測(cè)其可能為信號(hào)傳導(dǎo)重要分子節(jié)點(diǎn)，可確保精母細(xì)胞成熟和分裂有序發(fā)生，促進(jìn)精母細(xì)胞向單倍體精細(xì)胞發(fā)育。本研究通過(guò)在小鼠睪丸注射3-MBA抑制ART3后，發(fā)現(xiàn)小鼠睪丸曲細(xì)精管內(nèi)生精細(xì)胞明顯減少，附睪尾精子濃度在注射3-MBA 后不同處理組均逐漸降低，到5 d后約降低0.358×10·mL～1.528×10·mL，降低的顯著程度因抑制劑用量和處理時(shí)間而異。結(jié)果表明，抑制ART3導(dǎo)致小鼠睪丸精子發(fā)生過(guò)程受阻，降低了生精數(shù)量，損害了雄性生育力。研究發(fā)現(xiàn)，精子發(fā)生和腫瘤發(fā)生具有相似性，目前，已發(fā)現(xiàn)28B、2、等是在睪丸生殖細(xì)胞和癌癥細(xì)胞特異性表達(dá)的腫瘤-睪丸(cancer-testis，CT)基因。研究發(fā)現(xiàn)，三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancers，TNBCs)是基因顯著表達(dá)的癌癥之一，TNBCs細(xì)胞過(guò)表達(dá)3研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)使細(xì)胞增殖更快，凋亡率更低，并發(fā)現(xiàn)ART3通過(guò)誘導(dǎo)Akt和ERK磷酸化促進(jìn)了TNBC細(xì)胞增殖并抑制其凋亡。因此，推測(cè)3基因可能也像上述基因一樣，是一種新型基因，其在睪丸生殖細(xì)胞和TNBCs細(xì)胞中的表達(dá)模式可能具有一定相似性。未來(lái)的研究將繼續(xù)通過(guò)在小鼠睪丸抑制ART3，探討ART3是否通過(guò)誘導(dǎo)Akt和ERK磷酸化，進(jìn)而調(diào)控生精細(xì)胞增殖分化，以深入闡明ART3在小鼠精子發(fā)生過(guò)程中的分子機(jī)制。

精子發(fā)生是以支持細(xì)胞(sertoli cells，SCs)與生殖細(xì)胞相互協(xié)調(diào)為前提的，SCs與生殖細(xì)胞相互作用，為精子發(fā)生提供形態(tài)學(xué)和營(yíng)養(yǎng)支持，SCs還通過(guò)內(nèi)分泌、旁分泌和自分泌釋放各種細(xì)胞因子，以維持精子發(fā)生所需的微環(huán)境穩(wěn)態(tài)，確保精子發(fā)生正常高效。一旦SCs功能障礙，將直接導(dǎo)致精子發(fā)生失敗。據(jù)報(bào)道，無(wú)精子癥患者中支持細(xì)胞綜合征(sertoli cell-only syndrome，SCOS)患病率高達(dá)26.3%～57.8%。本研究發(fā)現(xiàn)，抑制3后小鼠睪丸曲細(xì)精管內(nèi)出現(xiàn)空泡化，且隨劑量增加和時(shí)間的推移，空泡面積也隨之增大，生精細(xì)胞排布紊亂。作為一種GPI錨定膜蛋白，ART3可能與SCs產(chǎn)生的各種分泌因子及細(xì)胞連接蛋白相互作用，參與并維持了SCs和生殖細(xì)胞之間的相互支撐和相互調(diào)節(jié)關(guān)系。抑制3后，可能導(dǎo)致SCs和生精細(xì)胞間的連接變得松散，SCs對(duì)生精細(xì)胞的支撐、營(yíng)養(yǎng)、調(diào)控作用受損，使精子發(fā)生受阻，影響了精子發(fā)生的進(jìn)程，并導(dǎo)致精子發(fā)生不完全不充分。

精子結(jié)構(gòu)和功能的完整性可直接影響精子成熟、活力、獲能等，是動(dòng)物成功受精的先決條件，是提升家畜精液品質(zhì)需要研究和解決的重要瓶頸之一。本研究中，注射3-MBA后小鼠精子活力和前向運(yùn)動(dòng)精子比例這兩個(gè)運(yùn)動(dòng)參數(shù)均逐漸降低，雖然因注射劑量不同下降程度有所差異，但都逐漸達(dá)到了顯著水平，尤其是注射5 d后，精子活力顯著降低了5.93%～26.33%；前向運(yùn)動(dòng)精子減少了7.39%～22.68%。結(jié)果表明，注射3-MBA抑制了ART3蛋白的生理功能，可能損害了睪丸精子結(jié)構(gòu)的完整性，進(jìn)而影響到精子活力和前向運(yùn)動(dòng)等功能。已有研究表明，附睪尾精子活力降低是雄性生育能力下降的關(guān)鍵因素。另外，精子尾部結(jié)構(gòu)的完整性和功能性是精子活力的重要影響因素，也是精子能夠成功抵達(dá)受精地點(diǎn)，確保精卵結(jié)合和融合的前提條件，若精子尾部形成相關(guān)基因表達(dá)缺陷或蛋白結(jié)構(gòu)和功能缺陷，就可能導(dǎo)致少精子癥和畸形精子癥，最終導(dǎo)致受精失敗或生育能力喪失。本團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)，ART3定位于牛和小鼠圓形、長(zhǎng)形精細(xì)胞，且呈趨向于精子尾部形成方向的極性分布特點(diǎn)，ART3還定位于牛和小鼠附睪尾精子的頭部以及尾部靠近頭部部分，推測(cè)ART3可能與精子頭和尾部形成有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，睪丸注射3-MBA后，小鼠精子畸形率逐漸增加，5 d后達(dá)到顯著水平，比注射前增加約10.2%～26.9%，精子尾部主要表現(xiàn)為斷裂、彎折和卷曲等，頭頸出現(xiàn)對(duì)折，說(shuō)明ART3與精子尾部、頸部形成有關(guān)，并通過(guò)影響精子形態(tài)結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步影響了精子的活力、精卵結(jié)合等功能。

綜上所述，本研究推測(cè)，精子發(fā)生是在SCs構(gòu)成的穩(wěn)態(tài)微環(huán)境下有序進(jìn)行的，ART3作為一個(gè)膜錨定蛋白，可能在維持SCs與生精細(xì)胞的關(guān)系中發(fā)揮了重要作用，也可能促進(jìn)了精子發(fā)生過(guò)程中系列生精細(xì)胞的有序遷移，并且，ART3還可能促進(jìn)了曲細(xì)精管中進(jìn)行性變化的系列生精細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完善和功能發(fā)揮。總而言之，該基因的正常表達(dá)是精子發(fā)生正常有序進(jìn)行的前提基礎(chǔ)。

4 結(jié) 論

本研究通過(guò)抑制ART3導(dǎo)致附睪尾精子尾部形成發(fā)生缺陷，精子畸形率增加，結(jié)構(gòu)異常，進(jìn)一步影響了精子運(yùn)動(dòng)能力、活力等功能，說(shuō)明ART3通過(guò)參與調(diào)控精子發(fā)生影響精子的結(jié)構(gòu)和功能，降低精子數(shù)量和質(zhì)量，并導(dǎo)致精子發(fā)生紊亂。然而其調(diào)控精子發(fā)生的詳細(xì)機(jī)制還需進(jìn)一步研究確認(rèn)。相關(guān)研究將對(duì)提高動(dòng)物精液品質(zhì)具有重要意義，也可為治療雄性不育提供新的靶向基因。