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    接種蚯蚓與添加有機物料對茶園土壤結(jié)構(gòu)的影響*

    2021-04-08 03:39:00程思遠梅慧玲王炫清劉馨秋馬青平黎星輝
    土壤學(xué)報 2021年1期

    程思遠,李 歡,梅慧玲,王炫清,劉馨秋,陳 暄,馬青平,黎星輝?

    (1. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)茶葉科學(xué)研究所,南京 210095;2. 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院休閑農(nóng)業(yè)研究所,南京 210095;3. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)國家有機類肥料工程技術(shù)研究中心,南京 210095)

    茶樹(Camellia sinensis(L.)O. Kuntze)是重要的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟作物,我國茶葉產(chǎn)量和種植面積均為世界第一[1]。有“生態(tài)系統(tǒng)工程師”之名的蚯蚓,其作為大型土壤動物,能通過破碎、取食、消化、分泌、排泄(蚯蚓糞)、掘穴等一系列生命活動改善土壤理化性質(zhì)、促進有機質(zhì)積累、調(diào)節(jié)土壤中碳氮磷循環(huán)、促進物質(zhì)循環(huán)和能量代謝,利用腸道內(nèi)的活性酶降解土壤有機物[2-4]。蚯蚓活動促進黏砂粒黏結(jié)為團聚體,顯著促進土壤微團聚體的形成,將土壤中有機殘體與礦物混合,增加團聚體有機碳含量,對提高土壤肥力有重要作用[5]。然而,目前對蚯蚓風(fēng)化土壤礦物和礦物固持有機碳的機理還不清楚。土壤團聚體的物理保護和礦物的化學(xué)保護是影響土壤有機碳穩(wěn)定的重要因素,但目前通常是將土壤團聚體和礦物-有機復(fù)合體隔離開來研究。

    同步輻射紅外顯微成像技術(shù)(SR-FTIR)具有快速、直接、精準(zhǔn)且光譜寬(10~10 000 cm-1)、亮度高、發(fā)散度小以及具備時間結(jié)構(gòu)等優(yōu)良特性,可原位檢測土壤團聚體中礦物和有機官能團,分析微米級局域樣品[6-8],能夠從生物樣品紅外光譜中識別振動的分子成分[9]。本文采用SR-FTIR 顯微光譜技術(shù)研究土壤團聚體中礦物-有機復(fù)合體的紅外成像規(guī)律和官能團特征,相比于傳統(tǒng)的紅外光譜技術(shù),使用SR-FTIR 技術(shù)可以使衍射限制在幾毫米,它具有超聲高分辨率,能提供一個準(zhǔn)確的信號,為試驗結(jié)果提供了更高的精準(zhǔn)度[10]。

    不同有機物料的添加可提升土壤有機質(zhì)含量。菜籽餅富含高蛋白和氨基酸;茶樹修剪物富含多種礦質(zhì)營養(yǎng)及特殊的生化物質(zhì);生物質(zhì)炭含有60%以上的碳,具有較強的熱穩(wěn)定性和抗分解性[11],是較好的土壤改良劑。近年來,將農(nóng)林廢棄物(如秸稈和果樹枝條)制成生物質(zhì)炭還田被認為是土壤增肥的重要途徑[12]。我國每年茶樹修剪物數(shù)量可觀,本研究充分利用茶樹修剪物等資源,將茶樹修剪物制成的生物質(zhì)炭,對比茶園常用有機肥菜籽餅肥進行試驗,意圖探索茶樹修剪物對土壤培肥的意義。為探究蚯蚓與不同有機物料互作對土壤結(jié)構(gòu)的影響,本文結(jié)合蚯蚓活動和不同有機物料展開培養(yǎng)實驗,通過測定土壤理化性質(zhì)和同步輻射紅外光譜(SR-FTIR),原位表征土壤團聚體成像特征和有機碳的存在形式,揭示蚯蚓與有機物料對茶園土壤結(jié)構(gòu)的影響,為茶園土壤管理提供一些科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試土壤:盆栽土壤取自江蘇省南京市玄武區(qū)中山陵茶園(118°50' E,32°03' N),2018 年茶園年平均氣溫為15.3 ℃,該茶園為溫帶季風(fēng)氣候,年均降雨量1 106.5 mm。根據(jù)茶園的地形與種植面積情況采用S 散點法確定5 個取樣點,采集茶樹行間0~20 cm 表層土壤,將各個采樣點的土壤混勻,攤開剔除雜物后,自然風(fēng)干,過2 mm 篩待用。

    茶樹修剪物:茶樹修剪物采集于南京雅潤茶葉有限公司高淳茶葉基地,將茶園修剪枝條按照粗細大小長短順序整理后及時攤開曬干,碾磨過20 目篩子待用。

    生物質(zhì)炭:將茶樹修剪物曬干剪碎(<5 cm),裝入1 m3的反應(yīng)爐設(shè)備中,密封后,由外部的電加熱器將內(nèi)部的茶樹修剪物以每分鐘升溫8.5 ℃至400 ℃左右,保持8~10 h,至反應(yīng)爐的通風(fēng)管中沒有明顯的濃煙排出為止[13]。

    蚯蚓和菜籽餅:蚯蚓和菜籽餅購自于江蘇省句容市王軍蚯蚓專業(yè)養(yǎng)殖有限公司,蚯蚓品種為威廉環(huán)毛蚓(Pheretima guillelmi),屬上食下居型蚯蚓[14]。在實驗開始前利用濾紙法排空蚯蚓腸道,清腸方法:將干凈的濾紙放置在燒杯的底部,再向燒杯里加少許蒸餾水,以剛好浸沒濾紙,然后將蚯蚓放置于濾紙上后用保鮮膜將燒杯封口,并用注射器針頭將上方的保鮮膜扎孔,然后將燒杯放入溫度為20 ℃,濕度為80%~85%的恒溫箱中黑暗中清腸24 h。

    供試土壤和有機物料基本理化性質(zhì)見表1。

    表1 供試土壤和有機物料基本理化性質(zhì)Table 1 Basic physical and chemical properties of the soil and organic material tested

    1.2 試驗方法

    于2018 年5 月18 日采集中山陵茶園土壤模擬盆栽培養(yǎng)試驗,設(shè)置5 個處理,分別為:1)不施肥處理(CK);2)不施肥+蚯蚓(BE);3)15 g 菜籽餅(盆栽土重量的0.5%)+蚯蚓(CE);4)60 g 茶樹修剪物(盆栽土重量的2%)+蚯蚓(JE);5)60 g生物質(zhì)炭(盆栽土重量的2%)+蚯蚓(TE)。每個處理重復(fù)5 次,每盆裝培養(yǎng)土3 kg。原始蚯蚓經(jīng)過清腸處理后每1 kg 土壤接種蚯蚓10 g±0.02 g(2條)。選取一年生長勢基本一致的無性系健壯茶苗“龍井長葉”用于試驗,每盆栽植6 株,并根據(jù)茶苗的生長環(huán)境溫度、濕度和觀察茶苗長勢不定期用去離子水澆灌茶苗,使試驗土壤含水率保持在田間持水量的85%左右。

    1.3 測定項目與方法

    試驗培養(yǎng)3 個月時采集土壤樣品進行分析測試,6 個月時采集一次土壤樣品測定pH。土壤基本理化性質(zhì)采用常規(guī)方法[15]測定。pH 利用ORION 3STAR(Thermo 公司,美國)pH 計測定(土壤/水為1/2.5 的質(zhì)量體積比);全碳、全氮采用vario MACRO cube 系列元素分析儀(Elementar 公司,德國)測定。有機質(zhì)采用重鉻酸鉀容量法測定,有機質(zhì)(OM)含量依據(jù)“OM 含量=TC 含量×1.724”進行換算[16-17]。同步輻射紅外顯微光譜技術(shù)(SR-FTIR)與樣品處理:采用國家蛋白質(zhì)科學(xué)研究設(shè)施中的BL01B 紅外線站設(shè)備進行同步輻射光源(Synchrotron Radiation Facility,SSRF)顯微成像檢測土壤微團聚體[18]。選取培養(yǎng)了3 個月的土壤顆粒為研究對象,用水包埋土壤樣品,并保持其完整性,在全封閉式快速冷凍切片機(徠卡,型號CM1950,德國)內(nèi)進行-20 ℃低溫切片,厚度約為2 μm。切好的樣品平鋪放置在低輻射的Low-E 鏡片上,干燥后在國家上海蛋白質(zhì)科學(xué)研究設(shè)施五線六站BL01B 線站紅外顯微成像儀進行觀察(圖1)。面掃設(shè)置參數(shù):光譜范圍650~4 000 cm-1;光闌孔徑20 μm×20 μm;步長10 μm×10 μm;光譜分辨率4 cm-1;掃描次數(shù)64 次。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)處理及分析采用 Excel 2010、SPSS19.0完成。

    2 結(jié) 果

    2.1 土壤酸堿度(pH)

    培養(yǎng)3 個月和6 個月時,土壤pH 均值如圖2所示,CK 處理分別為6.57、6.44,BE 處理分別為6.59、5.97,CE 處理分別為6.15、5.75,JE 處理分別為6.43、6.16,TE 處理分別為6.69、6.34,5 個處理組中第3 月pH 均值均高于第6 月,表明即使在蚯蚓活動下,添加不同有機物料處理的土壤pH均呈下降趨勢;但添加茶樹修剪物和生物質(zhì)炭處理有緩解土壤酸化效果,但無顯著性差異。

    2.2 土壤全碳、全氮及碳氮比

    從各處理(CK、BE、CE、JE、TE)中選取3次重復(fù)測定土壤基本養(yǎng)分狀況,如表2 所示。相較于CK 處理,BE 處理的土壤全碳、有機質(zhì)含量有升高趨勢,表明蚯蚓活動可提高土壤肥力;與BE 處理相比,蚯蚓配施有機物料的 CE、JE、TE 處理均提高了土壤全碳、全氮和有機質(zhì)含量,TE 處理提高效果最明顯,說明生物質(zhì)炭與蚯蚓配施對土壤肥力提升效果最好。

    表2 不同施肥處理與接種蚯蚓下盆栽土壤基本養(yǎng)分狀況Table 2 Basic nutrient status of the soil in the pot relative to treatment

    2.3 土壤團聚體的顯微成像規(guī)律

    本試驗各處理中土壤團聚體的同步輻射紅外顯微成像如圖3 所示,土壤中官能團的指定如下:黏土礦物(Clay-OH,3 620 cm-1),脂肪(-C-H,2 920 cm-1),蛋白質(zhì)(-NH,1 650 cm-1),多糖(-OH,1 080 cm-1)[19]。從同步輻射紅外顯微成像圖可以看出多糖、蛋白質(zhì)、脂肪和黏土礦物均呈高度異質(zhì)性分布,且黏土礦物與多糖的分布規(guī)律較為相似,蛋白質(zhì)與脂肪的分布規(guī)律相似,而黏土礦物與蛋白質(zhì)和脂肪的分布規(guī)律有較大的差異;其中CK、BE 和TE 組中的多糖、蛋白質(zhì)、脂肪和黏土礦物的分布形狀為團狀,而CE 和JE 組中的黏土礦物與大分子有機物具有較高的分散性。

    2.4 土壤有機碳的存在形式

    利用紅外顯微光譜技術(shù)(SR-FTIR)定性研究不同施肥處理中土壤有機碳的存在形式,圖4 為各處理土壤團聚體的紅外吸收光譜。從圖中可以看到當(dāng)樣品在 3 620 cm-1左右會出現(xiàn)強烈的醇羥基-OH伸縮震動,波數(shù)在2 880 cm-1左右處會出現(xiàn)不對稱脂肪族-C-H 伸展震動,波數(shù)在1 732 cm-1左右處會出現(xiàn)不飽和鍵C=C 震動、不飽和鍵C=O 震動以及蛋白質(zhì)-NH 伸縮震動,波數(shù)在1 150 cm-1左右處會出現(xiàn)C-O 拉伸彎曲、多糖-OH 伸縮震動。相比CK處理,其他處理的伸縮震動整體更強烈,說明蚯蚓配施有機物料可使大分子有機官能團與礦物結(jié)合能力增強,提高土壤固存能力,從而增加土壤中有機質(zhì)含量,其中CE 和TE 組更強烈,表明蚯蚓配施菜籽餅肥和生物質(zhì)炭提高土壤肥力效果更好,有利于茶樹生長。

    2.5 黏土礦物和大分子有機物的官能團相關(guān)性

    黏土礦物和大分子有機物的官能團相關(guān)性越強,礦物固碳越多,土壤肥力越高。土壤團聚體中黏土礦物和大分子有機官能團的相關(guān)性分析如圖5所示,5 個處理中黏土礦物和有機官能團的決定系數(shù)(R2)由小到大均依次為:黏土礦物-蛋白質(zhì)、黏土礦物-多糖、黏土礦物-脂肪。該結(jié)果表明,土壤團聚體中的黏土礦物和大分子有機物親和性有所差異,其中黏土礦物-脂肪的親和性最高,黏土礦物-蛋白質(zhì)親和性最低,黏土礦物-多糖親和性次之,且這種親和性差異不受有機物料與蚯蚓互作的影響。

    3 討 論

    在土壤生態(tài)系統(tǒng)中蚯蚓是最典型的大型動物之一,蚯蚓活動對改善土壤理化性質(zhì)、促進物質(zhì)循環(huán)和能量代謝有重大貢獻[20-22]。井大煒等[23]研究表明,有機肥與蚯蚓糞的施用能顯著改善土壤物理性狀,提高土壤有機質(zhì)含量,增強植物根系活力。這與本試驗紅外顯微光譜技術(shù)(SR-FTIR)定性分析土壤有機質(zhì)的結(jié)果一致,相較于CK,其他四組處理的碳官能團伸縮震動更強烈,表明接種蚯蚓處理可提高黏土礦物對大分子有機官能團結(jié)合能力,從而提高土壤肥力。本研究采用的樣品水包埋法結(jié)合低溫冷凍切片技術(shù),與傳統(tǒng)有機包埋法相比,可防止有機包埋試劑如樹脂、石蠟,OCT 包埋液的影響,同時保證了土壤團聚體樣品的完整性。

    李萍萍等[24]研究表明,與不施肥處理相比,配施不同有機化肥可有效提高土壤養(yǎng)分含量,均不同程度提高了土壤有機質(zhì)含量。這與本試驗結(jié)果一致,試驗中蚯蚓配施有機物料的土壤處理中有機質(zhì)和全碳含量均有所提高。茶樹生長的土壤pH 應(yīng)控制在4.5~6.0,最適宜種植茶樹的pH 在4.5~5.5,但就pH 值降低這一現(xiàn)象,Abe 等[25]發(fā)現(xiàn)大量種植茶樹可以加速土壤酸化,K. OH[26]和Wang[27]等研究表明種植茶樹時限越長土壤酸化越明顯。這說明本試驗中土壤pH 下降的原因是蚯蚓活動和茶苗長時間種植的綜合作用。

    生物質(zhì)炭因含有以可溶性狀態(tài)在土壤中存在的Ca、K、Mg 等元素,可提高土壤固碳能力,目前被認為是土壤較好的改良劑,相比其他有機物料能更明顯改善土壤理化性質(zhì)。蚯蚓能促進土壤微生物的活動和養(yǎng)分循環(huán),蚯蚓糞與分泌物可以提高土壤有機質(zhì)和養(yǎng)分狀況[28-29]。單武雄等[30]研究發(fā)現(xiàn)連續(xù)施用菜籽餅肥可以有效提供更多的碳和氮源,使土壤微生物數(shù)量增加,提高土壤養(yǎng)分有效性。本試驗不同施肥處理土壤紅外吸收光譜在CE 和TE 組中碳官能團信號最強,表明蚯蚓配施菜籽餅肥和生物質(zhì)炭更有利于提高土壤肥力。蚯蚓活動可促進土壤團聚體的形成,改善土壤質(zhì)地,Lehmann 等[31]采用同步輻射紅外顯微成像方法研究土壤團聚體時發(fā)現(xiàn),土壤團聚體的碳官能團分布具有異質(zhì)性,Riedel 等[32]研究發(fā)現(xiàn)泥炭地中活性鐵可以優(yōu)先保護芳香族化合物,Mayer 和Xing[33]指出土壤團聚體中礦物-有機復(fù)合體相互作用有利于保護有機質(zhì)及有機質(zhì)內(nèi)部聚合物,Tisdall 和Oades[34]發(fā)現(xiàn)黏土礦物和大分子有機物均有分散性,且微土壤團聚體更穩(wěn)定。

    大量研究表明因土施肥、化肥與有機肥配施可以緩急相濟,短長互補,充分發(fā)揮各自的增產(chǎn)潛力,可改善土壤團粒結(jié)構(gòu),延緩?fù)寥浪峄?,提高土壤保肥能力,在改土培肥方面有顯著作用。近年來,針對我國土壤有機質(zhì)含量嚴重下降的狀況,農(nóng)業(yè)部實施土壤有機質(zhì)提升行動,提高耕地土壤有機質(zhì)水平已經(jīng)成為國家層面的戰(zhàn)略決策。茶葉是我國重要經(jīng)濟作物,農(nóng)業(yè)部印發(fā)了茶園有機肥代替化肥技術(shù)方案,以求大力提升茶園土壤有機質(zhì)水平。提升土壤肥力的核心是增加土壤有機質(zhì)含量,提升土壤有機質(zhì)穩(wěn)定性。為防止有機質(zhì)的流失,有必要關(guān)注有機質(zhì)的穩(wěn)定化過程。本文研究了5 個處理的盆栽土壤團聚體的同步輻射紅外顯微成像特征和規(guī)律,為研究蚯蚓活動配施有機物料對茶園土壤結(jié)構(gòu)的影響提供科學(xué)依據(jù)。

    4 結(jié) 論

    與不施肥處理相比,接種蚯蚓與有機物料配施處理提高了土壤全碳含量,提升黏土礦物對大分子有機官能團的結(jié)合能力,其中蚯蚓配施菜籽餅肥和生物炭對提高土壤肥力效果明顯。即使在蚯蚓活動下,添加不同有機物料的各個處理中土壤pH 值均呈下降趨勢,但添加茶樹修剪物和生物炭可延緩?fù)寥浪峄俾省M捷椛浼t外顯微成像結(jié)果表明土壤團聚體中多糖、蛋白質(zhì)、脂肪和黏土礦物均呈高度異質(zhì)性分布,其中黏土礦物與多糖的分布規(guī)律相似,蛋白質(zhì)與脂肪的分布規(guī)律相似,而黏土礦物與蛋白質(zhì)和脂肪的分布規(guī)律有較大的差異。土壤團聚體中的黏土礦物和有機官能團的決定系數(shù)(R2)由小到大均依次為:黏土礦物-蛋白質(zhì)、黏土礦物-多糖、黏土礦物-脂肪,親和性有差異且不受蚯蚓活動和施肥處理的影響,土壤團聚體通過礦物-有機復(fù)合體將有機質(zhì)留存于土壤中,提高土壤有機質(zhì)含量。

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