馥感啉口服液中野菊花薄層鑒別研究

莊滿賢，蕭雪瑩

(廣州一品紅制藥有限公司，廣東 廣州 510760)

馥感啉口服液是廣州一品紅制藥有限公司獨(dú)家兒童用藥，具有清熱解毒、止咳平喘、益氣疏表的功效，用于小兒氣虛感冒所引起的發(fā)燒、咳嗽、氣喘、咽喉腫痛癥狀的治療[1]。馥感啉口服液由鬼針草、野菊花、西洋參、黃芪、板藍(lán)根、香菇、浙貝母、麻黃、白花前胡、甘草10味藥材提取而來(lái)，其中野菊花具有清熱解毒、瀉火平肝的功效，發(fā)揮主要藥效作用[2]。

馥感啉口服液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為WS-10230(ZD-0230)-2012Z，未對(duì)野菊花進(jìn)行質(zhì)量控制。薄層色譜鑒別法作為中藥質(zhì)量控制的有效手段，可行性已得到驗(yàn)證[3-5]。為了加強(qiáng)馥感啉口服液的質(zhì)量控制，本實(shí)驗(yàn)建立其藥效物質(zhì)野菊花的薄層鑒別方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CPA225D電子天平(德國(guó)賽多利斯股份公司)；Xp6電子微量天平(梅特勒儀器有限公司)；GoodSee-20E薄層成像系統(tǒng)(上?？普苌萍加邢薰?；KQ300DB超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑

蒙花苷對(duì)照品(111528-201107)、野菊花對(duì)照藥材(120995-201105，120995-201105)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；聚酰胺薄膜(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠)；馥感啉口服液(批號(hào)：20160406、20160408、20160502，廣州一品紅制藥有限公司)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備

取馥感啉口服液20 mL，采用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，萃取液置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，即得供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg蒙花苷的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 對(duì)照藥材溶液制備

精密稱取野菊花對(duì)照藥材0.3 g，置于具塞錐形瓶中，加水25 mL，加熱回流1 h，放冷，過(guò)濾，濾液用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，萃取液置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，用2 mL甲醇溶解，即得對(duì)照藥材溶液。

2.4 樣品測(cè)定

參照薄層色譜法《中國(guó)藥典》2015年版四部0502通則)，吸取對(duì)照品溶液5 μL、對(duì)照藥材溶液2 μL以及供試品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁溶液，熱風(fēng)吹干，置于紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.1 專屬性試驗(yàn) 按馥感啉口服液處方比例，取除野菊花藥材外的處方藥材，按照馥感啉口服液生產(chǎn)工藝制備缺野菊花的陰性樣品。取缺野菊花的陰性樣品，參照“2.1”項(xiàng)下方法制備缺野菊花的陰性對(duì)照供試品。

按照“2.4”項(xiàng)下方法，采用蒙花苷對(duì)照品、野菊花對(duì)照藥材、供試品、缺野菊花陰性對(duì)照品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，說(shuō)明該方法專屬性較好。結(jié)果見(jiàn)圖1。

1.蒙花苷對(duì)照品；2.野菊花對(duì)照藥材；3～5.供試品溶液，批號(hào)分別為20160502、20160406、20160408；6.缺野菊花的陰性樣品

2.5.2 靈敏度試驗(yàn) 按照“2.4”項(xiàng)下鑒別方法，比較供試品(批號(hào)：20160406)不同點(diǎn)樣量(1 μL、2 μL、3 μL、4 μL、5 μL)下斑點(diǎn)顯色情況。結(jié)果點(diǎn)樣量為1～5 μL時(shí)顯色效果較好，斑點(diǎn)清晰可見(jiàn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

1.蒙花苷對(duì)照品；2.野菊花對(duì)照藥材； 3～7.供試品溶液，點(diǎn)樣量分別為1～5 μL

2.5.3 耐用性試驗(yàn) (1)不同相對(duì)濕度的影響。按照“2.4”項(xiàng)下鑒別方法，平行點(diǎn)樣2個(gè)薄層板，分別在18%、88%的相對(duì)濕度條件下展開(kāi)，比較顯色的差異。結(jié)果顯示兩種極端濕度條件下顯色結(jié)果良好，提示常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下相對(duì)濕度對(duì)薄層顯色無(wú)明顯影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。

(2)不同溫度的影響。按照“2.4”項(xiàng)下鑒別方法操作，平行點(diǎn)樣2個(gè)薄層板，分別在4℃、35℃溫度條件下展開(kāi)，比較TLC圖譜的差異。結(jié)果提示環(huán)境溫度4～35℃不影響薄層鑒別結(jié)果。結(jié)果見(jiàn)圖4。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)前期采用3種方法制備供試品溶液，方法1為取供試品20 mL水浴蒸干后用甲醇溶解并定容至25 mL，方法2為采用正己烷萃取后將萃取液濃縮至2 mL，方法3為采用乙酸乙酯萃取后將乙酸乙酯蒸干，再用2 mL甲醇溶解。經(jīng)考察，方法3制備的供試品溶液斑點(diǎn)清晰，分離度較好，因此采用方法3作為供試品溶液制備方法。

1.蒙花苷對(duì)照品；2.野菊花對(duì)照藥材；3～5.供試品溶液(批號(hào)分別為20160502、20160406、20160408)

前期通過(guò)對(duì)硅膠G、聚酰胺薄膜進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)聚酰胺薄膜分離效果較好，因此采用聚酰胺薄膜作為固定相；通過(guò)對(duì)不同展開(kāi)劑乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)、乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)、乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)分離效果最好；考察展距分別為10 cm、20 cm的分離效果，結(jié)果展距為20 cm時(shí)分離效果較好；考察展開(kāi)后直接觀察和用2%三氯化鋁溶液顯色后觀察的效果，發(fā)現(xiàn)采用2%三氯化鋁溶液顯色后斑點(diǎn)更清晰，因此采用2%三氯化鋁溶液作為顯色劑。

一系列考察結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性、重復(fù)性、耐受性均較好。點(diǎn)樣量的多少雖對(duì)Rf值無(wú)明顯影響；由于不同產(chǎn)地以及批次中藥材的質(zhì)量差異較大，每批樣品的鑒別應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)節(jié)點(diǎn)樣。所建立的方法可用于馥感啉口服液中野菊花的薄層鑒別，為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供參考。