沒食子酸對(duì)鼻咽癌體外放射敏感性的影響*

林重華，楚婷，許美鳳，李路，師盼，舒易方，瞿家權(quán)，，

(1.吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)影像技術(shù)系，湖南吉首 416000；2.重慶市黔江中心醫(yī)院腫瘤科，重慶 409000；3.中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，重慶 400038；4.中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科放療室，重慶 400038)

沒食子酸(gallic acid，GA)又稱為五倍子酸或棓酸，是一種具有多酚結(jié)構(gòu)有機(jī)酸[1]，主要存在于五倍子、漆樹、金縷梅、茶葉、橡樹皮等植物中，藥用或工業(yè)提取沒食子酸的主要途徑是通過水解五倍子。五倍子藥材的有效成份主要是沒食子酸，具有抗氧化、抗菌和抗病毒作用，有較高畜牧水產(chǎn)養(yǎng)殖和藥用開發(fā)價(jià)值[2]。小劑量沒食子酸抑制ras癌基因信號(hào)活化和免疫調(diào)節(jié)的作用，但其抗腫瘤作用具體機(jī)制不明[3-4]。鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我國南方地區(qū)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤，以低分化未分化癌為主要組織學(xué)類型，對(duì)放化療均敏感[5]。放射治療完全緩解后腫瘤復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是晚期鼻咽癌治療棘手的問題，獲得性放療抵抗被認(rèn)為是鼻咽癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵影響因素[6]。因此，本研究采用放療增敏藥物篩選模型檢測(cè)沒食子酸對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖和體外放療敏感性影響，并初步探討沒食子酸增加放療誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷作用的分子機(jī)制，為進(jìn)一步定向篩選放療協(xié)同增效候選化學(xué)實(shí)體和天然多酚和黃酮類抗腫瘤分子靶點(diǎn)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1受試物 沒食子酸一水合物(貨號(hào)：398225)購于Sigma-Aldrich公司，含量≥98.0%，符合美國化學(xué)協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。沒食子酸一水合物用磷酸鹽緩沖液溶解后，經(jīng)0.45 μm無菌濾器過濾，配制成母液濃度為500.0 μmol·L-1的溶液，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2細(xì)胞 人鼻咽癌細(xì)胞系HNE-1從中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)研究中心購買，10%胎牛血清RPMI-1640完全培養(yǎng)基(HyClone公司，貨號(hào)：SH30809.01)，置于5%二氧化碳恒溫37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱，常規(guī)消化傳代，對(duì)數(shù)生長期制成單細(xì)胞懸液備用。放療抵抗鼻咽癌細(xì)胞株參考文獻(xiàn)[7]采用深部X射線多分次亞致死劑量暴露法構(gòu)建。本研究采用的放療抵抗HNE1-IR和對(duì)照組放療敏感HNE1細(xì)胞株均為多輪亞致死照射后4～15傳代并通過下文的放射克隆存活法鑒定。

1.1.3試劑 RPMI-1640培養(yǎng)基(HyClone公司，貨號(hào)：SH30809，01)；胎牛血清(以色列Biological Industries公司，批號(hào)：04-121-1A)；胰蛋白酶、RIPA細(xì)胞裂解液、Hoechst33258熒光染料溶液、0.5%結(jié)晶紫染料購于碧云天生物技術(shù)有限公司(批號(hào)：C0203，P0013K，C1018，C0121)；Annexin V-FITC/7-AAD雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(美國BD Biosciences公司，貨號(hào)：556547)，噻唑藍(lán)(MTT)、二甲亞砜(DMSO)均為美國Sigma公司(貨號(hào)：M2128，472301)；蛋白酶和磷酸化酶抑制劑為美國Roche公司(貨號(hào)：4693159001，4906837001)；β-actin和程序性死亡配體1(programmed dealth-ligand 1，PD-L1)人單克隆抗體，抗兔和抗鼠二抗均為美國Santa Cruz公司(貨號(hào)：sc-8432，sc-293425，sc-2357，sc-516102)，STAT3和STAT3(Tyr705)位點(diǎn)磷酸化和c-Jun(Ser63)位點(diǎn)磷酸化單克隆抗體為美國CST公司(貨號(hào)：#12640，#9145，#91952)。

1.1.4儀器 雙目倒置相差顯微鏡，日本Olympus，CKX41型；二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱，美國Thermo Fisher，F(xiàn)orma Serises 3 Water Jacketed型；雙目倒置熒光顯微鏡，日本Olympus；酶標(biāo)儀(iMark型號(hào))，美國Biorad有限公司；6～10 MeV，雙光子射線，Varian Clinac 2100 C/D醫(yī)用直線加速器為美國Varian公司產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1MTT比色法 取對(duì)數(shù)生長期HNE1和HNE1-IR細(xì)胞，以每孔約1000個(gè)HNE1-IR細(xì)胞/180 μL接種于96孔培養(yǎng)板中，分別加入20 μL沒食子酸工作液(母液濃度為40 mmol·L-1)，使其終濃度分別為5.0，10.0，25.0，50.0，100.0，200.0 μmol·L-1，溶媒對(duì)照組每孔加入20 μL PBS溶液的完全培養(yǎng)基，采用順鉑(DDP)作為陽性對(duì)照組(終濃度為10.0 μmol·L-1)；每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，分別培養(yǎng)48和72 h。終濃度2.5 μmol·L-1沒食子酸給藥預(yù)處理HNE1和HNE1-IR細(xì)胞24 h后，聯(lián)合分割放療(DT：4Gy，2Gy/F，1F/d×2)后繼續(xù)培養(yǎng)24和48 h，每孔加入5 mg·mL-1的MTT液20 μL，測(cè)定細(xì)胞抑制率并擬合曲線獲得半數(shù)抑制濃度(IC50)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2Hoechst染色凋亡檢測(cè)法 取對(duì)數(shù)生長期HNE1和HNE1-IR細(xì)胞，以每孔約10 000個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，完全培養(yǎng)基細(xì)胞接種過夜后，次日開始給予單劑量的2.5 μmol·L-1沒食子酸聯(lián)合分割放療(DT：6 Gy，1.2 Gy/F，1F/d×5)處理細(xì)胞，對(duì)照組細(xì)胞給予假照射處理，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集貼壁細(xì)胞，多聚甲醛冰上固定30 min，5 μg·mL-1Hoechst 33258溶液重懸細(xì)胞避光孵育10 min，離心洗滌后，再重懸細(xì)胞制備細(xì)胞涂片，熒光顯微鏡下觀察典型的凋亡細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上可出現(xiàn)染色質(zhì)固縮，核碎裂以及核發(fā)泡等改變。凋亡細(xì)胞百分比計(jì)算方法為：在6個(gè)隨機(jī)顯微鏡視野下選取細(xì)胞400個(gè)計(jì)算其中的凋亡細(xì)胞數(shù)目，重復(fù)3次。

1.2.3流式細(xì)胞術(shù)7-AAD/Annexin V-FITC雙染色凋亡檢測(cè)法 取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，以每孔約10 000個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，完全培養(yǎng)基細(xì)胞接種過夜后，次日開始給予單劑量的2.5 μmol·L-1沒食子酸聯(lián)合分割放療(DT：6 Gy，1.2 Gy/F，1F/d×5)處理細(xì)胞，對(duì)照組細(xì)胞給予假照射處理，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集貼壁細(xì)胞，按Annexin V-FITC/7-AAD雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒操作說明如下：加入Annexin V-FITC染色液5 μL，避光孵育15 min，隨后加入7-AAD染色液5 μL后輕輕混勻于2～8 ℃避光條件下孵育5 min，上機(jī)采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4放射克隆存活實(shí)驗(yàn) 常規(guī)6孔培養(yǎng)板按3種細(xì)胞密度接種(每孔500，1000，2000個(gè))，待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)板上層覆蓋補(bǔ)償膠1.0 cm，皮源距100 cm，等中心照射，劑量深度2.5 cm，劑量建成區(qū)野與6孔板細(xì)胞的投影面積重合，吸收率為200 cGy·min-1，分別暴露于0(燈光野假照射)，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 Gy的梯度劑量的X-射線下(6 MeV，X-射線，Varian Clinac 2100直線加速器)，照射后靜置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)14～18 d，0.5%結(jié)晶紫染色，細(xì)胞50個(gè)以上克隆計(jì)數(shù)。按公式計(jì)算：克隆效率=存活克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)，生存分?jǐn)?shù)=克隆效率處理組/克隆效率對(duì)照組，其中0 Gy射線暴露為對(duì)照組。采用GraphPad Prism 5.0版軟件，按照線性二次方程模型S=e-αD-βD2擬合劑量反應(yīng)曲線，其中S為生存分?jǐn)?shù)，α和β為常數(shù)，D為劑量，計(jì)算存活曲線下面積(area under the curve，AUC)和放射保護(hù)因子(radiation protection factor，RPF)，重復(fù)3次。

1.2.5免疫印跡法 處理細(xì)胞加蛋白酶和磷酸化酶抑制劑的RIPA細(xì)胞裂解液，于冰上裂解30 min，4 ℃，10 000×g離心20 min，吸取上清液，BCA 法蛋白定量，常規(guī)煮沸變性5 min，樣品蛋白上樣量為每泳道30 μg，10% SDS-PAGE 變性凝膠電泳，電泳條件：積層膠50 V，分離膠120 V恒定電壓電泳分離，電轉(zhuǎn)移條件：采用恒定電流(100 mA，1.5 h)至厚度0.22 μm PVDF 膜上。5%脫脂牛奶在室溫下封閉1～2 h，孵一抗4 ℃過夜，β-actin抗體濃度為1：5 000，PD-L1抗體濃度為1：500，STAT3和磷酸化STAT3抗體及磷酸化c-Jun濃度均為1：1 000，室溫下孵二抗(1：5 000)1.5 h，加發(fā)光劑后壓片(3～15 min)，顯影定影(3～5 min)，采用Alpha Image圖像分析系統(tǒng)對(duì)膠片掃描分析。

2 結(jié)果

2.1放療抵抗的鼻咽癌細(xì)胞株篩選及鑒定 放射克隆存活實(shí)驗(yàn)分析鼻咽癌細(xì)胞放療敏感性結(jié)果顯示，與放療敏感HNE1細(xì)胞株比較，HNE1-IR細(xì)胞株放療敏感性顯著降低[AUC(HNE1-IR)2.119vs.AUC(HNE1)1.491，P<0.05；放射保護(hù)因子=1.421](圖1)。

2.2沒食子酸對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放療敏感性的影響 沒食子酸對(duì)鼻咽癌HNE1-IR和HNE1細(xì)胞株的增殖具有抑制作用，其IC50值分別為12.58和11.17 μmol·L-1。單純放療對(duì)HNE1-IR和HNE1細(xì)胞株抑制率分別為：(66.2±8.4)%，(79.3±8.4)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖2 B)；而2.5 μmol·L-1沒食子酸同期聯(lián)合放療對(duì)HNE1-IR和HNE1細(xì)胞株抑制率分別為：(87.3±5.1)%，(91.3±6.4)%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。放射克隆存活實(shí)驗(yàn)線性二次方程靶模型結(jié)果顯示，與對(duì)照組HNE1細(xì)胞比較，沒食子酸聯(lián)合放療處理HNE1-IR細(xì)胞線性二次方程擬合克隆存活曲線下面積差異值顯著增加[AUC(HNE1-IR+GA)1.726vs.AUC(HNE1+GA)1.341，ΔAUC(HNE1-IR+GA)0.393vs.AUC(HNE1+GA)0.150，t=2.714，P<0.05](圖2A)。上述結(jié)果提示，小劑量沒食子酸可能具有非依賴細(xì)胞毒的鼻咽癌體外放療增敏作用。

A.線性二次模型擬合放射存活曲線及曲線下面積差值比較沒食子酸對(duì)放療增敏作用的影響；B.平皿培養(yǎng)18 d沒食子酸聯(lián)合放療4 Gy處理對(duì)不同放療敏感性的鼻咽癌細(xì)胞存活克隆染色數(shù)量和大小比較。

2.3沒食子酸聯(lián)合放療處理對(duì)鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響 為了進(jìn)一步分析單純放療或同期聯(lián)合沒食子酸對(duì)鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響，本研究采用Hoechst染色凋亡檢測(cè)法分析細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變，結(jié)果證實(shí)，與對(duì)照組比較，2.5 μmol·L-1沒食子酸同期聯(lián)合放療處理HNE1-IR細(xì)胞凋亡率的差值顯著增加[Δ凋亡率(HNE1-IR+GA+RT)-(HNE1-IR+GA)=14.2%vs.Δ凋亡率(HNE1+GA+RT)-(HNE1+GA)=6.1%，t=4.799，P<0.05](圖3C)。相似地，流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)法分析結(jié)果證實(shí)，與對(duì)照組HNE1細(xì)胞株比較，2.5 μmol·L-1沒食子酸同期聯(lián)合放療處理HNE1-IR細(xì)胞凋亡率的差值顯著增加[Δ凋亡率(HNE1-IR+GA+RT)-(HNE1-IR+GA)=13.7%vs.Δ凋亡率(HNE1+GA+RT)-(HNE1+GA)=10.3%，t=2.231，P<0.05](圖3D)。上述結(jié)果提示，沒食子酸通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，增加鼻咽癌細(xì)胞株的放療敏感性。

A.典型的Hoechst染色熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變，白色箭頭顯示典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變高染色的核固縮、核碎裂、核邊集等改變；B.流式細(xì)胞術(shù)雙熒光染色分析鼻咽癌細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；C.Hoechst染色熒光顯微鏡觀察比較各組細(xì)胞凋亡率差異；D.流式細(xì)胞術(shù)雙熒光染色比較各組細(xì)胞凋亡率差異。①與HNE1比較，P<0.01；②與對(duì)照組比較，P<0.01。

2.4沒食子酸聯(lián)合放療處理對(duì)鼻咽癌細(xì)胞STAT3和c-Jun信號(hào)活化及PD-L1蛋白表達(dá)水平的影響 為分析低濃度沒食子酸增加鼻咽癌細(xì)胞株放療敏感性的分子機(jī)制，本研究采用免疫印跡法分析了沒食子酸對(duì)放療誘導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和免疫檢查點(diǎn)抑制分子的影響，結(jié)果證實(shí)，與對(duì)照組比較，低濃度沒食子酸聯(lián)合放療處理顯著下調(diào)HNE1-IR細(xì)胞株STAT3和c-Jun磷酸化水平，但并不能完全逆轉(zhuǎn)放射線誘導(dǎo)的HNE1-IR細(xì)胞PD-L1蛋白表達(dá)上調(diào)。結(jié)合上述結(jié)果提示，沒食子酸聯(lián)合放療處理可能部分抑制鼻咽癌細(xì)胞STAT3和c-Jun信號(hào)活化，但不影響放療誘導(dǎo)的腫瘤免疫檢查點(diǎn)負(fù)調(diào)控PD-L1蛋白水平的表達(dá)，見圖4。

A.典型的免疫印跡圖片比較鼻咽癌細(xì)胞STAT3和c-Jun信號(hào)磷酸化和PD-L1表達(dá)水平；B.半定量分析鼻咽癌細(xì)胞STAT3，c-Jun活化水平和PD-L1表達(dá)水平；①與HNE1-IR/RT+vehicle比較，P<0.01。

3 討論

放射治療(radiotherapy，RT)是包括鼻咽癌在內(nèi)的頭頸部腫瘤的首選和基礎(chǔ)性的治療措施[5]。鼻咽癌放療后病灶中殘留生存的腫瘤細(xì)胞可復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致治療失敗，已成為制約鼻咽癌療效改善的瓶頸[6]。目前暫無作為A類證據(jù)用于鼻咽癌臨床治療的非細(xì)胞毒放療增敏劑，且少數(shù)幾種其他腫瘤放療增敏的候選藥物也處于臨床前評(píng)估階段[7]。因此，定向測(cè)試放療增敏的候選化學(xué)實(shí)體，篩選高效低毒的放療增敏候選藥物，特別是低細(xì)胞毒藥物可與目前放療和(或)免疫治療藥物聯(lián)用，對(duì)克服腫瘤放療抵抗和改善鼻咽癌療效具有臨床價(jià)值[8]。本研究通過定向篩選策略和放療體外模型初步證實(shí)，沒食子酸具有鼻咽癌體外放療增敏作用，放療增敏的分子機(jī)制可能是通過抑制STAT3和c-Jun信號(hào)活化而并不阻斷PD-L1蛋白水平表達(dá)，增加放射性誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，上述結(jié)果為進(jìn)一步篩選并鑒定潛在放療增敏劑的研究提供依據(jù)。

本研究成功構(gòu)建放射敏感性差異的2株鼻咽癌細(xì)胞模型。常規(guī)分割放療或亞致死性分割放療，可通過健存腫瘤細(xì)胞加速再群化(repopulation)在放療間期使部分腫瘤細(xì)胞亞群呈現(xiàn)快速增殖狀態(tài)，從而誘導(dǎo)出放療抗拒的亞克隆，最終使腫瘤產(chǎn)生獲得性放療抵抗[9]。因此，放射生物學(xué)基礎(chǔ)研究通常模擬臨床的分割放療模式，采用多輪亞致死放療暴露法篩選出放療抵抗的腫瘤細(xì)胞株，進(jìn)而構(gòu)建放療抵抗細(xì)胞模型。本研究也采用此類模型并通過隨后實(shí)驗(yàn)證實(shí)，低濃度沒食子酸(2.5 μmol·L-1)對(duì)2株放療反應(yīng)性不同的鼻咽癌細(xì)胞具有相似的細(xì)胞毒作用，沒食子酸對(duì)放療抵抗HNE1-IR細(xì)胞的增敏效應(yīng)高于放療敏感細(xì)胞株HNE1；沒食子酸增加放療誘導(dǎo)的凋亡效應(yīng)也高于放療敏感細(xì)胞株HNE1。上述結(jié)果提示，低濃度沒食子酸可能具有非依賴細(xì)胞毒的放療增敏作用。研究提示，黃酮和多酚類的放療增敏[10]可能與細(xì)胞毒非依賴性作用相關(guān)。本研究所報(bào)道的小劑量沒食子酸具有鼻咽癌細(xì)胞體外放療增敏作用與上述報(bào)道類似。

一般而言，放射線及其誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧物質(zhì)(reactive oxygen species，ROS)損傷DNA等生物大分子，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，發(fā)揮放射治療作用[11]。亞致死劑量放射線在誘導(dǎo)分割放療獲得性的腫瘤放療抵抗相關(guān)[12]，通過激活健存腫瘤細(xì)胞自身防御功能和細(xì)胞生存信號(hào)通路包括NF-κB信號(hào)通路、STAT3信號(hào)通路和PI3K/AKT信號(hào)通路，進(jìn)而誘導(dǎo)DNA損傷修復(fù)能力增強(qiáng)而對(duì)抗放射線殺傷。本研究分析單純放療或同期聯(lián)合沒食子酸處理對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、存活、免疫檢查點(diǎn)信號(hào)分子表達(dá)的影響，結(jié)果證實(shí)，低濃度沒食子酸可顯著阻斷放療抵抗鼻咽癌細(xì)胞STAT3信號(hào)活化。提示，沒食子酸可能通過抑制STAT3信號(hào)活化，調(diào)控亞致死劑量放射誘導(dǎo)的細(xì)胞生存信號(hào)，發(fā)揮非細(xì)胞毒放療增敏效應(yīng)。此結(jié)果與大量的關(guān)于STAT3信號(hào)通路活化參與頭頸部鱗癌和鼻咽癌獲得性放化療抵抗研究一致，而STAT3也可能是沒食子酸放療增敏作用的潛在分子靶點(diǎn)。同樣的，根據(jù)鼻咽癌組織和正常鼻咽上皮表達(dá)譜芯片在公共數(shù)據(jù)庫的表達(dá)差異分析研究的線索[13]，促生存和抑制凋亡的信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)分子c-Jun可能作為腫瘤的生物標(biāo)志物。本研究證實(shí)，沒食子酸聯(lián)合放療處理下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞磷酸化c-Jun信號(hào)。國內(nèi)其他研究組采用裸鼠人鼻咽癌細(xì)胞移植瘤模型結(jié)果[14]與本研究的結(jié)果一致，抑制c-Jun表達(dá)或采用基因沉默方式敲低c-Jun表達(dá)可抑制放射抵抗鼻咽癌移植瘤的生長及血管生成。因此，c-Jun作為多種轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)路系統(tǒng)節(jié)點(diǎn)分子可能參與沒食子酸對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放療增敏過程。腫瘤免疫治療被認(rèn)為是克服放療抵抗的一種有效策略，腫瘤組織高表達(dá)PD-L1是免疫治療療效預(yù)測(cè)的重要標(biāo)志物[15]。普通分割放療和免疫治療聯(lián)用的臨床前數(shù)據(jù)和早期披露的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)存在分歧，一方面，亞致死劑量放療可促進(jìn)暴露的腫瘤組織釋放新抗原，甚至可觀察到腫瘤免疫激活和放療遠(yuǎn)隔效應(yīng)(abscopal effect)[16]，發(fā)揮免疫治療增效作用；另一方面，亞致死劑量放療誘導(dǎo)細(xì)胞STAT3信號(hào)活化，誘導(dǎo)PD-L1表達(dá)上調(diào)[17]，抑制效應(yīng)T淋巴細(xì)胞免疫殺傷作用，促進(jìn)腫瘤發(fā)生免疫逃逸。本研究結(jié)果初步證實(shí)，低濃度沒食子酸并不抑制亞致死劑量放療誘導(dǎo)的PD-L1蛋白表達(dá)水平上調(diào)。然而，沒食子酸是否協(xié)同免疫治療增效作用以及是否協(xié)同效應(yīng)T細(xì)胞腫瘤的免疫殺傷作用，仍需要采用免疫治療和放療體內(nèi)外模型進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，本研究初步證實(shí)小劑量沒食子酸可能抑制鼻咽癌細(xì)胞STAT3和c-Jun信號(hào)活化，增加放射線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，發(fā)揮細(xì)胞毒非依賴性的放療增敏作用。沒食子酸抑制STAT3活化但并不阻斷PD-L1蛋白水平，可與鼻咽癌綜合治療策略聯(lián)合，發(fā)揮協(xié)同增效作用的潛力。