冠心病患者外周血細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子表達(dá)量與斑塊特征相關(guān)性分析

郇雷，亓維東，張?jiān)鎏?，亓華新，陳丹飛

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦桥R床中常見的心血管疾病之一，其主要病理基礎(chǔ)是血管內(nèi)膜細(xì)胞外基質(zhì)遭到破壞、重構(gòu)，導(dǎo)致血管粥樣斑塊形成、管腔狹窄，甚至閉塞引起心肌細(xì)胞缺血、缺氧[1]。穩(wěn)定型心絞痛（SAP）和急性冠脈綜合征（ACS）是最常見的冠心病類型。SAP的病變處血管斑塊較穩(wěn)定，臨床癥狀較輕[2]，而ACS的血管斑塊穩(wěn)定性差，斑塊易破裂、血栓易形成[3]，嚴(yán)重威脅患者的生命安全，因此，早期識(shí)別不穩(wěn)定斑塊對(duì)于改善患者預(yù)后至關(guān)重要。目前，影響冠狀動(dòng)脈（冠脈）粥樣斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制尚不清楚，細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（EMMPRIN）是近年來研究熱點(diǎn)，它是免疫球蛋白超家族成員之一，有研究顯示[4]，其不僅可以誘導(dǎo)單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生大量的細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)粥樣斑塊的形成，還可與糖蛋白Ⅳ結(jié)合促進(jìn)血小板遷移及黏附，進(jìn)而誘導(dǎo)血栓、新生血管形成，影響粥樣斑塊的穩(wěn)定性，提示EMMPRIN在冠脈粥樣斑塊的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。但是EMMPRIN表達(dá)水平與冠脈粥樣斑塊具體量化關(guān)系尚不清楚，因此，本研究通過分析冠心病患者外周血EMMPRIN表達(dá)水平與斑塊特征的相關(guān)性，以期為早期識(shí)別不穩(wěn)定粥樣斑塊及有效干預(yù)提供充分的證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2017年6月至2019年6月于山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬濟(jì)南人民醫(yī)院心內(nèi)科就診的急性冠脈綜合征患者（ACS組）82例和穩(wěn)定型心絞痛患者（SAP組）57例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①ACS和SAP的診斷符合相關(guān)指南標(biāo)準(zhǔn)（典型的臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查，冠脈造影提示≥1支主要冠脈直徑狹窄率超過50%）[5,6]；②同意行冠脈CT及光學(xué)相關(guān)斷層掃描（OCT）檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肥厚性及擴(kuò)張性心肌??；②病毒性心肌炎、風(fēng)濕性心肌炎；③既往行冠脈支架植入手術(shù)；④嚴(yán)重的心肺腎等重要器官功能障礙；⑤惡性腫瘤。另選取同期體檢的健康體檢者60例作為對(duì)照組（CON組）。所有入組對(duì)象均簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批同意。

1.2 研究方法①記錄入組對(duì)象的基本臨床資料，包括年齡、性別、吸煙史、飲酒史、高血壓、糖尿病及冠心病病史等；②于次日清晨抽取空腹靜脈血5 ml（2份），1份血樣以3000轉(zhuǎn)/min離心20 min（離心半徑15 cm），取上清置于-80 ℃冰箱中備用。由山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬濟(jì)南人民醫(yī)院檢驗(yàn)科醫(yī)師使用JY-870全自動(dòng)生化檢測(cè)儀（青島駿源環(huán)保設(shè)備有限公司）檢測(cè)生化指標(biāo)：超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、低密度脂蛋白（LDL）等。另1份血樣加入枸櫞酸鈉抗凝，再加入淋巴細(xì)胞分離液，后經(jīng)密度梯度離心分離出外周血單核細(xì)胞，使用流式細(xì)胞檢測(cè)液重懸細(xì)胞，后給予PE標(biāo)記的CD14熒光抗體（碧迪公司，美國）和FITC標(biāo)記的EMMPRIN抗體（昂飛公司，美國），經(jīng)洗滌、離心后在流式細(xì)胞儀（貝克曼庫爾特公司，美國）上測(cè)定EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度（MFI）。③使用64層螺旋掃描CT機(jī)（三英精密儀器股份有限公司，天津）對(duì)患者進(jìn)行冠狀動(dòng)脈成像檢查并進(jìn)行病變血管三維圖像重建，后測(cè)量主要病變處冠脈粥樣硬化斑塊的CT值并進(jìn)行斑塊穩(wěn)定程度分級(jí)，結(jié)果判讀：CT值小于60 HU為軟斑塊（不穩(wěn)定），CT值介于60～129 HU之間為纖維斑塊（居中），CT值等于及超過130 HU為鈣化斑塊（穩(wěn)定）。④采用C7-XR DragonflyTM光學(xué)相干斷層成像儀（美國，圣猶達(dá)醫(yī)療用品有限公司）對(duì)患者主要病變冠脈進(jìn)行斑塊參數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)內(nèi)容包括斑塊纖維帽厚度、脂質(zhì)弧度、狹窄率、斑塊破裂、血栓形成、血管鈣化、及斑塊侵蝕等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 23.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，二組間比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間的比較使用單因素方差分析（事后比較采用LSD-t）；計(jì)數(shù)資料使用例數(shù)（構(gòu)成比）表示，組間比較使用χ2檢驗(yàn)。使用使用Pearson或Spearman相關(guān)分析外周血EMMPRIN表達(dá)水平與斑塊特征的相關(guān)性。所有P值均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組對(duì)象外周血EMMPRIN表達(dá)水平及一般資料的比較三組對(duì)象在年齡、性別、吸煙史、飲酒史及糖尿病史等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。ACS組和SAP組患者外周血EMMPRIN表達(dá)水平明顯高于CON組，且ACS組明顯高于SAP組（P均＜0.05）；ACS組和SAP組患者血清LDL、hs-CRP水平及高血壓、冠心病家族史比例明顯高于CON組，且ACS組患者血清hs-CRP水平明顯高于SAP組組（P均＜0.05），表1。

2.2 ACS組和SAP組斑塊特征的比較冠脈CT成像檢查顯示：ACS組患者病變血管處軟斑塊最多（56.10%），纖維斑塊（25.61%）和硬化斑塊（18.29%）較少，SAP組患者病變血管處鈣化斑塊最多（52.63%），軟斑塊（17.54%）和纖維斑塊（29.82%）較少，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。OCT結(jié)果顯示：ACS組斑塊破裂（P=0.008）、血栓（P=0.007）及脂質(zhì)弧（P＜0.001）明顯高于SAP組，而斑塊纖維帽厚度（P＜0.001）明顯低于SAP組，表2。

2.3 不同斑塊類型患者外周血EMMPRIN表達(dá)水平的比較軟斑塊患者外周血EMMPRIN表達(dá)水平明顯高于纖維斑塊和鈣化斑塊患者，且纖維斑塊患者高于鈣化斑塊患者（P均＜0.05），表3。

2.4 外周血EMMPRIN表達(dá)水平與斑塊特征的相關(guān)性外周血EMMPRIN表達(dá)水平與斑塊穩(wěn)定性（rs=-0.898，P＜0.001）及斑塊纖維帽厚度（r=-0.546，P＜0.001）呈明顯的負(fù)相關(guān)，與斑塊脂質(zhì)弧（r=0.689，P＜0.001）呈明顯的正相關(guān)（圖1）。

3 討論

急性冠心病事件發(fā)生的主要原因是冠脈粥樣斑塊穩(wěn)定性下降，易損斑塊的纖維帽破裂、血栓形成。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，超過70%的急性心肌梗死并發(fā)于管腔狹窄＜50%的冠脈病變處斑塊破裂，約20%的急性心肌梗死并發(fā)于管腔狹窄＞70%的冠脈病變處斑塊破裂[4]，提示粥樣斑塊的不穩(wěn)定性相較于冠脈狹窄程度及波及范圍，對(duì)患者的危害更大，因此，臨床中的重中之重是對(duì)不穩(wěn)定斑塊的及早識(shí)別及有效干預(yù)。冠脈CT三維成像可有效評(píng)估粥樣斑塊的性質(zhì)，其評(píng)定的鈣化斑塊為穩(wěn)定斑塊，軟斑塊為不穩(wěn)定斑塊，纖維斑塊介于二者之間[7]。光學(xué)相關(guān)斷層掃描（OCT）是一種高分辨率的腔內(nèi)影像學(xué)技術(shù)，測(cè)量的斑塊纖維帽厚度越小、脂質(zhì)弧越高，斑塊愈不穩(wěn)定，是目前判斷活體斑塊穩(wěn)定性的“金標(biāo)準(zhǔn)”[8]。本研究通過對(duì)患者進(jìn)行冠脈CT三維成像及OTC檢查，結(jié)果顯示，ACS患者斑塊多為不穩(wěn)定的軟斑塊，SAP患者多為穩(wěn)定的鈣化斑塊，且ACS患者斑塊的脂質(zhì)弧、斑塊破裂及血栓明顯高于SAP組，斑塊纖維帽厚度明顯低于SAP組。結(jié)果提示，ACS患者相較于SAP，病變血管處粥樣斑塊極不穩(wěn)定，斑塊纖維帽較薄易破裂形成血栓，這也與既往的文獻(xiàn)報(bào)道是一致的。

表1 三組對(duì)象外周血EMMPRIN表達(dá)水平及一般資料的比較

表2 ACS組和SAP組斑塊特征的比較

表3 不同斑塊類型患者外周血EMMPRIN表達(dá)水平的比較

圖1 外周血EMMPRIN表達(dá)水平與斑塊特征的相關(guān)性

粥樣斑塊穩(wěn)定性的下降是冠心病發(fā)生發(fā)展的重要因素，因此尋找影響斑塊穩(wěn)定性的因素迫在眉睫。有研究[9]顯示，細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（EMMPRIN）可促進(jìn)一系列基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）的活化，而活化的MMP可降解斑塊基質(zhì)成分，引起斑塊纖維帽變薄、易破損。趙玉軍等[10]研究也顯示，冠心病患者外周血EMMPRIN表達(dá)水平的上升與粥樣斑塊性質(zhì)不穩(wěn)定密切相關(guān)，這些結(jié)果都提示，EMMPRIN是影響粥樣斑塊穩(wěn)定性的重要因素。EMMPRIN是一種廣泛分布于細(xì)胞膜表面的糖蛋白，其基因定位于人19號(hào)染色體19p13.3，其廣泛表達(dá)于機(jī)體造血及非造血細(xì)胞中，參與胚胎發(fā)育、傷口愈合、炎癥和心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程[11]。近年來，很多研究顯示，EMMPRIN與粥樣斑塊的穩(wěn)定性下降密切相關(guān)。楊麗霞等[4]研究顯示，ACS患者血小板表面的EMMPRIN、GPIV水平明顯升高，且二者與斑塊的穩(wěn)定性下降顯著相關(guān)；曾文珺[12]研究顯示，EMMPRIN在動(dòng)脈粥樣硬化患者的血小板中高表達(dá)，其可促進(jìn)機(jī)體單核細(xì)胞分泌MMP-9、腫瘤壞死因子等，通過炎癥機(jī)制及MMP促進(jìn)斑塊的形成及破裂。還有研究顯示[13]，EMMPRIN在動(dòng)脈粥樣硬化患者的血管平滑肌細(xì)胞中也高表達(dá)，其可促進(jìn)平滑肌細(xì)胞分泌MMP-2，MMP-2，不僅分解斑塊基質(zhì)成分導(dǎo)致其穩(wěn)定性下降，還可以促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增生和遷移。巨噬細(xì)胞也是冠脈粥樣斑塊發(fā)生發(fā)展的重要炎性細(xì)胞，有多項(xiàng)研究[14,15]顯示，EMMPRIN在巨噬細(xì)胞中高表達(dá)，其主要通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌MMP-2、MMP-9、MMP-14等增加，進(jìn)而促進(jìn)斑塊的發(fā)生發(fā)展、不穩(wěn)定及破裂。

本研究結(jié)果顯示，冠心病患者的外周血EMMPRIN水平明顯高于健康人，且ACS患者的外周血EMMPRIN水平明顯高于SAP患者；軟斑塊患者的外周血EMMPRIN水平明顯高于纖維斑塊和鈣化斑塊患者，且纖維斑塊患者高于鈣化斑塊患者。相關(guān)性分析顯示，外周血EMMPRIN水平與斑塊穩(wěn)定性及斑塊纖維帽厚度呈明顯的負(fù)相關(guān)，與斑塊脂質(zhì)弧呈明顯的正相關(guān)。提示冠心病患者外周血EMMPRIN水平明顯升高，患者病情越重；斑塊性質(zhì)越不穩(wěn)定，其表達(dá)水平亦愈高，且外周血EMMPRIN水平與斑塊不穩(wěn)定性呈現(xiàn)了較好的量化關(guān)系，可能的原因是冠心病患者外周血EMMPRIN水平升高，通過刺激機(jī)體血小板、血管平滑肌細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌大量的MMP，通過MMP降解斑塊基質(zhì)成分、引起斑塊穩(wěn)定性下降、易破損及血栓形成[4,12-15]。

綜上所述，冠心病患者外周血EMMPRIN表達(dá)水平明顯升高，且與斑塊穩(wěn)定性下降顯著相關(guān)，臨床中積極監(jiān)測(cè)EMMPRIN表達(dá)水平有助于冠心病的早期診斷及預(yù)防。