復發(fā)性流產與免疫功能狀態(tài)的關系

陳方耿，莫志平

(東莞市東坑醫(yī)院婦產科，廣東 東莞 523451)

復發(fā)性流產與免疫功能狀態(tài)的關系

陳方耿，莫志平

(東莞市東坑醫(yī)院婦產科，廣東 東莞 523451)

目的 探討復發(fā)性流產與免疫功能狀態(tài)的關系。方法 選擇復發(fā)性流產產婦152例作為流產組，依據流產類型分為復發(fā)組(復發(fā)性流產，61例)和原發(fā)組(原發(fā)性流產，91例)；選取同期正常分娩的產婦50例作為正常組。采用流式細胞儀進行免疫功能(血清CD3、CD4、CD8水平)的檢測，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清抗精子抗體(AsAb)，比較各組產婦血清免疫功能，分析血清AsAb與免疫功能狀態(tài)的關系。結果 在血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平方面，流產組明顯高于正常組，復發(fā)組明顯高于原發(fā)組(均P<0.05)；血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8呈正相關關系(r1=0.572，P<0.05；r2=0.513，P<0.05；r3=0.647，P<0.05)。結論 復發(fā)性流產與患者的免疫功能狀態(tài)有關，檢測患者免疫因子水平有利于評估患者的病情，提示醫(yī)師應重點關注免疫功能狀態(tài)紊亂的產婦。

復發(fā)性流產； 免疫功能； 抗精子抗體

復發(fā)性流產是臨床上常見的產科疾病之一，是指連續(xù)發(fā)生3次或3次以上的自然流產，流產時可導致停經后陰道出血、腹痛等癥狀，嚴重影響患者的身心健康[1]。目前，復發(fā)性流產的病因較為復雜，與母體生殖道異常、內分泌異常、免疫功能異常、生殖道感染等有關，但多數患者于臨床上找不到明確病因，故尋找其病因對指導患者的臨床治療具有重要的臨床意義[2]。有研究[3]表明，復發(fā)性流產多與患者免疫功能狀態(tài)有關，機體免疫系統(tǒng)調節(jié)紊亂者具有更高的流產風險。本研究通過回顧性分析患者及正常產婦的免疫功能狀態(tài)，探討復發(fā)性流產與免疫功能的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2012年9月至2015年12月東莞市東坑醫(yī)院收治的復發(fā)性流產產婦152例作為流產組，年齡23～41歲，平均(30.47±5.94)歲，流產次數1～6次，平均流產次數(3.62±0.71)次，依據流產類型分為復發(fā)組(復發(fā)性流產，61例)和原發(fā)組(原發(fā)性流產，91例)。復發(fā)組：年齡23～40歲，平均年齡(30.02±5.72)歲，流產次數3～6次，平均流產次數(4.79±0.81)次；原發(fā)組：年齡24～41歲，平均年齡(30.481±5.99)歲，流產次數1～3次，平均流產次數(1.24±0.24)次。選取同期正常分娩的產婦50例作為正常組，年齡21～40歲，平均年齡(30.96±6.31)歲。本研究經本院倫理委員會審批且通過，3組患者年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入和排除標準

納入標準：1)復發(fā)組經病史證實有連續(xù)發(fā)生3次或以上自然流產[4]；2)丈夫精液常規(guī)無異常、無不育等疾病；3)患者或其家屬簽署知情同意書。排除標準：1)伴有心、肝、腎等重要器官嚴重性疾??；2)有血液系統(tǒng)嚴重性疾?。?)檢測前3個月內有免疫類藥物治療史。

1.3 免疫功能檢測

研究對象于早晨空腹抽取左上臂靜脈血4 mL置入無菌且裝有0.2 mL(109mmol·L-1)枸櫞酸鈉(湖南爾康制藥股份有限公司)的抗凝試管中充分混勻，分別加入20 μL CD3-PC5、CD4-FITC、CD8-PE單抗，以小鼠抗人FITC為對照，混勻后室溫避光孵育30 min，加入2 mL紅細胞裂解液混勻后室溫避光孵育10 min，1200 r·min-1離心5 min，棄上清，加入2 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻后再離心洗劑1次，加入500 μL PBS重懸后，通過美國Beckman Coulte公司提供的Coulter Epics-XL型流式細胞儀進行CD3、CD4、CD8水平的檢測，并計算CD4/CD8。以上單抗和紅細胞裂解液均為美國Beckman Coulte公司產品，購自北京友華志科公司，所有操作均嚴格依據說明書相關規(guī)定進行。

1.4 血清抗精子抗體(AsAb)檢測

研究對象血液樣本采集同免疫功能檢測，完畢后3000 r·min-1離心10 min，取適量上清液置入無菌試管中，滴入AsAb試劑[試劑盒由南京基蛋生物科技有限公司提供，蘇食藥監(jiān)械(準)字2013第2400088號，50人份·盒-1]，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清AsAb，用酶標儀測定吸光度繪制標準曲線，并通過標準曲線來計算上述因子的表達水平，所有操作均嚴格依據說明書相關規(guī)定進行。AsAb的正常值范圍為0～70 mU。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用SPSS20.0統(tǒng)計軟件處理數據，計數資料比較采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，血清AsAb與免疫功能狀態(tài)的關系采用Pearson分析法分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 流產組與正常組血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平比較

流產組患者血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平明顯高于正常組(均P<0.05)，2組患者血清CD8水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

組別nCD3/%CD4/%CD8/%CD4/CD8AsAb/mU流產組15274.23±8.2438.94±4.7128.49±3.671.47±0.33184.23±54.21正常組5062.43±5.2131.29±4.0429.01±3.751.04±0.2420.57±6.76t9.51110.3020.8648.49821.258P<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05

2.2 復發(fā)組與原發(fā)組血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平比較

復發(fā)組患者血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平明顯高于原發(fā)組(均P<0.05)，2組患者血清CD8水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

組別nCD3/%CD4/%CD8/%CD4/CD8AsAb/mU復發(fā)組6176.46±10.2842.13±6.7228.43±3.591.62±0.54224.59±56.79原發(fā)組9167.25±5.8934.27±5.7929.02±3.421.12±0.4646.57±10.76t6.0127.4121.0206.37822.001P<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05

2.3 血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8的相關性分析

血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8呈正相關關系(r1=0.572，P<0.05；r2=0.513，P<0.05；r3=0.647，P<0.05)，見圖1—3。

3 討論

復發(fā)性流產又稱習慣性流產，針對其不同病因，選擇不同治療方法，方可有效緩解患者的臨床癥狀及確?；颊叩呐R床療效[5]。近年來，隨著人們生活、飲食等及環(huán)境的改變，復發(fā)性流產的發(fā)病呈逐年上升的趨勢，其治療也逐漸受到人們的關注，但僅有少數患者可明確其病因并予以針對性的治療，故如何明確其病因對治療該疾病具有重要的臨床價值[6-7]。

有研究[8-9]顯示，復發(fā)性流產患者多出現(xiàn)免疫功能異常，由機體功能或組織損傷所致，提示復發(fā)性流產的發(fā)生與免疫功能狀態(tài)紊亂有關。龍馭云等[10-11]研究表明，AsAb是一個復雜的病理產物，可直接干擾生殖過程，在復發(fā)性流產患者中呈現(xiàn)出高表達狀態(tài)，提示其高表達可能是造成流產的重要原因之一。本研究發(fā)現(xiàn)，在血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平方面，流產組>正常組，復發(fā)組>原發(fā)組，Pearson分析法結果顯示血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8呈正相關關系，表明復發(fā)性流產與患者的免疫功能狀態(tài)有關，檢測患者免疫因子水平有利于評估患者的病情。在復發(fā)性流產發(fā)生過程中可能由于病原體感染(如沙眼衣原體、霉菌、滴蟲等)生殖道，引起機體免疫系統(tǒng)一系列的免疫反應，激活體內多種免疫細胞(如CD3、CD4等)，而此類免疫細胞具有重要的免疫調節(jié)作用，可合成和分泌大量的免疫因子(如白介素2、白介素4、白介素5等)，這些免疫因子可促進T淋巴細胞增殖，增強機體的免疫應答反應，同時還可刺激母體免疫系統(tǒng)產生循環(huán)或生殖道局部的AsAb；AsAb作為一種抗生殖免疫抗體，其在機體中的高表達狀態(tài)則可降低精子活力及精子穿透宮頸黏液和透明帶的能力，影響胚胎的正常發(fā)育，引起復發(fā)性流產的發(fā)生[12-13]。同時妊娠是一個極其復雜的生理過程，胚胎所攜帶的基因有一半來自父方，其表達的抗原對于母體來說是外來抗原，正常情況下由于母體免疫系統(tǒng)對胚胎父系抗原識別所產生的反應是免疫營養(yǎng)和免疫防護，使其于母體中可獲得“免疫逃逸”，但上述免疫系統(tǒng)的改變可能使母體免疫系統(tǒng)對胚胎父系抗原識別產生變化，使其喪失“免疫逃逸”，打破孕期母體內存在的復雜免疫調節(jié)狀態(tài)(即免疫耐受或抑制增強，而免疫排斥反應減弱)，轉變?yōu)槊庖吖簦瑢е聶C體免疫功能失衡，進而導致母體免疫系統(tǒng)對胎盤乃至胚胎產生免疫排斥，從而干擾母體的正常生殖過程，最終影響胚胎的正常發(fā)育，導致復發(fā)性流產的發(fā)生，是復發(fā)性流產的重要病因之一，醫(yī)師應重點關注免疫功能狀態(tài)紊亂的產婦，及時作出相應的干預治療，以避免不良妊娠結局的發(fā)生[14-15]。

綜上所述，復發(fā)性流產與患者的免疫功能狀態(tài)有關，檢測患者免疫因子水平有利于評估患者的病情，提示醫(yī)師應重點關注免疫功能狀態(tài)紊亂的產婦。

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(責任編輯：鐘榮梅)

2016-08-14

R714.21

A

1009-8194(2017)01-0045-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.01.018