熒光免疫層析法檢測(cè)2019-nCoV特異性抗體用于新冠病毒感染篩查價(jià)值探討

李齊光，徐令清，鐘國(guó)權(quán)

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院/清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 清遠(yuǎn) 511518）

2019年12 月，我國(guó)武漢開(kāi)始爆發(fā)一種新型肺炎，導(dǎo)致這種肺炎的病毒被世衛(wèi)組織正式命名為2019 新型冠狀病毒（2019-nCoV）[1]。我國(guó)是疫情爆發(fā)的第一個(gè)重災(zāi)區(qū)，但目前在我國(guó)疫情已得到初步有效控制，我國(guó)已進(jìn)入復(fù)工、復(fù)產(chǎn)、復(fù)學(xué)階段，然而在全球范圍內(nèi)新型冠狀病毒感染患者數(shù)量仍在劇增。鑒于目前嚴(yán)峻的國(guó)際疫情形勢(shì)，疑似病毒感染病例的確診為疫情防控的重要環(huán)節(jié)。

在疫情初期，我國(guó)科學(xué)家們迅速利用已有的科學(xué)方法檢測(cè)出了這一新型冠狀病毒的核酸序列。核酸檢測(cè)也成為確診病毒感染的關(guān)鍵證據(jù)，然而，核酸檢測(cè)存在對(duì)檢測(cè)要求較高、漏診率高，靈敏度低等不足。而目前檢驗(yàn)科常規(guī)采用的方法是熒光定量PCR 檢測(cè)2019-nCoV 核酸，此方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件、設(shè)施、人員要求高，并且影響因素多、操作步驟多、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，檢出率低，在許多醫(yī)院并不具有進(jìn)行核酸檢測(cè)的條件。隨著對(duì)疾病認(rèn)識(shí)的深入和診療經(jīng)驗(yàn)的積累，為進(jìn)一步加強(qiáng)早診早治，中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的最新版《新型冠狀病毒肺炎診療方案（第七版）》已明確將2019-nCoV 特異性抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)、病毒基因測(cè)序共同列為疑似病例確診的病原學(xué)證據(jù)之一[3]。熒光免疫層析法是特異性抗體檢測(cè)方法的重要組成部分，本研究基于2 322 例利用免疫熒光層析法進(jìn)行特異性抗體檢測(cè)的檢測(cè)結(jié)果分析，探討熒光免疫層析法檢測(cè)2019-nCoV特異性抗體IgM和IgG用于新冠肺炎篩查價(jià)值，為新型冠狀肺炎的抗體診斷提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年2月至2020年10月某醫(yī)院2 322例診療患者利用免疫熒光層析法進(jìn)行2019-nCoV 特異性抗體IgM和IgG檢測(cè)的臨床資料。

1.2 方法 所有研究對(duì)象均采集空腹靜脈血3 mL（EDTA 抗凝血），將血漿分離后進(jìn)行2019-nCoV特異性抗體IgM和IgG檢測(cè)。熒光層析法試劑盒由廣州萬(wàn)孚生物科技有限公司提供，檢測(cè)儀器為配套的FS-301干式熒光免疫分析儀，檢測(cè)結(jié)果以測(cè)試熒光值與內(nèi)置質(zhì)控?zé)晒庵档谋戎祦?lái)表示（即測(cè)試熒光值/內(nèi)置質(zhì)控?zé)晒庵?，cutoffindex，COI），樣本中的2019-nCoV IgM或IgG抗體的量與熒光強(qiáng)度成正相關(guān)，COI為1.0～1.1時(shí)記為疑似陽(yáng)性，＞1.1記為陽(yáng)性，＜1.0記為陰性。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄光免疫層析法2019-nCoV抗體檢測(cè)結(jié)果，包括陽(yáng)性率、疑似陽(yáng)性率。觀察2019-nCov 特異性抗體IgG檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡分布情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.00統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示。

2 結(jié)果

2.1 在2019-nCoV 特異性抗體IgM 和IgG 檢測(cè)中免疫熒光層析法的檢測(cè)結(jié)果 2 322 例樣本中，采用萬(wàn)孚熒光免疫層析法試劑盒檢測(cè)出IgM 或IgG 抗體陽(yáng)性28 例，陽(yáng)性率為1.21%；2019-nCoV 特異性抗體 IgG 檢測(cè)陽(yáng)性 9 例，陽(yáng)性率為0.78%，疑似陽(yáng)性4 例，疑似陽(yáng)性率為0.17%；在特異性抗體IgM 檢測(cè)陽(yáng)性共19 例，陽(yáng)性率為1.18%，疑似陽(yáng)性共 6 例，疑似陽(yáng)性率為0.26%

2.2 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本年齡分布統(tǒng)計(jì)2019-nCov 特異性抗體IgG 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡＞45 歲的比例為61.54%（1 429/2 322）；2019-nCov 特異性抗體IgM 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡＞45歲的比例為72.00%（1 672/2 322）。

3 討論

與武漢肺炎相關(guān)的病毒經(jīng)過(guò)中國(guó)武漢病毒研究所的對(duì)該病毒的全基因組序列進(jìn)行研究之后證實(shí)這是一種全新冠狀病毒[4]?；蛐蛄刑卣髋cSARS-CoV 和MERS-CoV 相似，但也具有顯著不同。新型冠狀病毒的外膜具有突起，形似皇冠，主要通過(guò)飛沫經(jīng)呼吸道傳播，但也可經(jīng)接觸傳播，已有研究證實(shí)甚至可以通過(guò)糞便等排泄物傳播。其臨床表現(xiàn)與肺炎癥狀相似，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、無(wú)力、呼吸困難等癥狀，部分患者可能伴有胃腸道癥狀，嚴(yán)重者甚至可能導(dǎo)致急性呼吸窘迫綜合征，最終死亡[5]。此外，新型冠狀病毒感染具有傳播迅速，傳染力強(qiáng)的特點(diǎn)，雖然目前根據(jù)病毒結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)并篩選可能藥物，部分化學(xué)藥物已進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)并得到抗新冠病毒效果，但其在體內(nèi)是否具有相當(dāng)?shù)幕钚匀孕柩芯?。同時(shí)，對(duì)已有的中醫(yī)方劑進(jìn)行篩選，著重考察前期治療中效果明顯的方案，對(duì)患者進(jìn)行中西醫(yī)結(jié)合治療，盡可能提高救治率。此外，進(jìn)一步深入開(kāi)展病毒結(jié)構(gòu)和各蛋白功能及位點(diǎn)的研究，以期盡快研制出特異性高的抗體及疫苗。因此，在戰(zhàn)勝新型冠狀肺炎病毒的過(guò)程中，對(duì)于疑似患者的確診以及普通人群的檢測(cè)是疫情防控的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)室檢查手段以病原學(xué)檢測(cè)為主，包括核酸檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)、CT診斷。

新型冠狀病毒的遺傳物質(zhì)為RNA，屬于RNA 病毒，針對(duì)RNA 病毒的診斷，核酸檢測(cè)是主要的病原學(xué)檢測(cè)手段，且常常被作為“金標(biāo)準(zhǔn)”。其中較成熟的核酸檢測(cè)手段有實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、依賴核酸序列擴(kuò)增（NASBA）、重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA）和基因芯片等[6]。核酸檢測(cè)具有高通量、特異性較強(qiáng)、取材少等優(yōu)點(diǎn)，但核酸檢測(cè)結(jié)果除了患者樣品自身因素外，還受許多因素的影響，例如保溫時(shí)間、操作環(huán)境、樣品保存等，靈敏度較弱，對(duì)于操作條件要求較高，成本高，并不是大多數(shù)醫(yī)院都具有條件進(jìn)行核酸檢測(cè)，還可能存在一定的感染風(fēng)險(xiǎn)。目前還在臨床上發(fā)現(xiàn)，用核酸檢測(cè)也存在一定的漏檢率。因此，僅憑借核酸檢測(cè)結(jié)果并不能滿足新型冠狀肺炎病毒感染診斷的需求。

血清學(xué)檢測(cè)也是病毒感染檢測(cè)的重要實(shí)驗(yàn)方法之一，對(duì)于核酸檢測(cè)之后的結(jié)果具有很好的輔助檢測(cè)功能。一旦發(fā)生病毒感染，機(jī)體的免疫系統(tǒng)會(huì)迅速啟動(dòng)免疫防御功能。針對(duì)進(jìn)入機(jī)體的病原體所產(chǎn)生的抗原，主要由T淋巴細(xì)胞發(fā)揮作用。血清學(xué)檢測(cè)的原理是抗原抗體的特異性結(jié)合免疫反應(yīng)。在病毒感染早期，機(jī)體內(nèi)的特異性抗體以IgM 為主，提示病毒現(xiàn)行感染或新近感染；機(jī)體進(jìn)行再次免疫應(yīng)答時(shí)產(chǎn)生的主要抗體是IgG，提示病情進(jìn)入恢復(fù)期或存在既往感染[7]。關(guān)于特異性抗體檢測(cè)在新型冠狀病毒感染的應(yīng)用價(jià)值分析，目前已有相當(dāng)多的學(xué)者進(jìn)行了大量分析，說(shuō)明了其雖不能單獨(dú)作為診斷依據(jù)，但能作為核酸檢測(cè)重要輔助檢測(cè)方式的應(yīng)用價(jià)值。血清學(xué)檢測(cè)作為重要的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段，所需的材料簡(jiǎn)單易選材，保存和運(yùn)輸、操作條件要求不高，因此，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求低，并且抗體穩(wěn)定性較高沒(méi)有器官組織特異性，在一定程度上可以彌補(bǔ)核酸檢測(cè)的漏檢率[8]。

本研究中，通過(guò)對(duì)2 322 例患者進(jìn)行熒光免疫層析法檢測(cè)，對(duì)2019-nCoV特異性抗體IgM和IgG的數(shù)據(jù)記錄，可以發(fā)現(xiàn)在這2322 例樣本中，特異性抗體總陽(yáng)性率為1.21%，其中2019-nCoV 特異性抗體IgG 檢測(cè)中，陽(yáng)性率為0.78%；在特異性抗體IgM 中，陽(yáng)性率為1.18%；疑似陽(yáng)性檢出率分別為0.17%和0.26%。IgM 和IgG 的陽(yáng)性檢測(cè)率和疑似陽(yáng)性檢出率差別不大，且檢出率均不高。此外針對(duì)陽(yáng)性檢出的個(gè)體資料進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)2019-nCov 特異性抗體IgG 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡＞45歲的比例為61.54%；2019-nCov 特異性抗體IgM 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡＞45歲的比例為72.00%。即說(shuō)明特異性抗體檢測(cè)陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的人群中，中老年人的比例稍高。原因可能在于中老年人的機(jī)體免疫能力較弱，血液中可能存在較多某些可能使紅細(xì)胞發(fā)生溶血的物質(zhì)，造成假陽(yáng)性。此外，老年人大多存在一些基礎(chǔ)疾病，可能服用某些藥物，導(dǎo)致體內(nèi)血液中存在一些異常蛋白抗體或特殊物質(zhì)，從而影響抗體檢測(cè)，造成假陽(yáng)性[9-10]。

綜上所述，在新型冠狀病毒的檢測(cè)中，核酸檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)均具有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，兩者結(jié)合能夠提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和效率，降低漏檢率和假陽(yáng)性，有利于新型冠狀病毒感染的早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療，有效控制疫情。熒光免疫層析法這一技術(shù)用于一般人群抗體檢測(cè)特異性高，假陽(yáng)性率低。因此，熒光免疫層析技術(shù)檢測(cè)新型冠狀病毒抗體水平可作為核酸補(bǔ)充手段用于一般人群篩查。