南瓜子氨酸對(duì)昆明小鼠的急性毒性試驗(yàn)

郎平，趙愛云，羅慧麗，徐春艷，王甜

（塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院/新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 843300）

南瓜子是一種常見的中藥，含多種氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、甾醇、脂肪酸及多糖等成份，具有抗氧化、抗菌作用和抗癌等作用，臨床可用于治療前列腺疾病、糖尿病和腸道寄生蟲病等疾病[1,2]。 南瓜子作為驅(qū)蟲藥，歷來受到人們青睞，其活性成份主要為南瓜子氨酸，可使宿主體內(nèi)寄生蟲蟲體進(jìn)入麻痹狀態(tài)，能抑制血吸蟲成蟲生長發(fā)育，驅(qū)除畜禽腸道寄生蛔蟲和絳蟲等蟲體，特別是南瓜子和檳榔聯(lián)合用藥可有效驅(qū)除人體腸道寄生的絳蟲[3]。本試驗(yàn)以昆明小鼠為動(dòng)物模型， 通過灌胃給藥進(jìn)行南瓜子氨酸的急性經(jīng)口毒性評(píng)價(jià)， 以期為南瓜子氨酸在動(dòng)物用藥的臨床應(yīng)用方面提基礎(chǔ)資料。

1 材料和方法

1.1 藥品來源

南瓜子氨酸購于武漢東康源科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)

SPF 級(jí)昆明小鼠購于新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，6～8 周齡，體重20～25g。 動(dòng)物飼養(yǎng)于塔里木大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，光線晝夜節(jié)律12h，室溫18℃～25℃、濕度40%～70%，噪音小于60dB。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和給藥方案

40 只雌性昆明小鼠根據(jù)體重隨機(jī)分為4 組，每組10 只。空白對(duì)照組灌服相同體積的生理鹽水，低劑量組（0.4g 南瓜子氨酸/mL）、中劑量組（0.8g 南瓜子氨酸/mL）和高劑量組（1.6g 南瓜子氨酸/mL），以0.2mL/10g 體積經(jīng)口灌服南瓜子氨酸。

1.4 臨床癥狀和病理變化觀察

給藥后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、14d， 觀察并記錄每只小鼠飲食、飲水和被毛等狀況。 每天記錄小鼠體重變化情況。 給藥14d 觀察期結(jié)束后，解剖所有小鼠，摘取心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟，肉眼觀察臟器變化情況，分別記錄臟器重量，計(jì)算平均臟器指數(shù)。

1.5 血常規(guī)指標(biāo)測定

觀察期結(jié)束后，摘除小鼠眼球，收集1mL 抗凝血，用全自動(dòng)獸用血液分析儀（Exigo，瑞士）測定血液中：白細(xì)胞值（WBC）、單核細(xì)胞占比 （Mon%）、 紅細(xì)胞分布寬度數(shù) （RDWa）、 血小板值（PLT）、淋巴細(xì)胞數(shù)（Lym）、淋巴細(xì)胞占比（Lym%）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、紅細(xì)胞壓積（HCT%）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均細(xì)胞血紅蛋白（MCH）、平均紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW%）、平均血小板體積（MPV）等指標(biāo)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有計(jì)數(shù)資料均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，采用SPSS 21.0軟件方差分析（one-way ANOVA）中LSD 法檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 南瓜子氨酸對(duì)昆明小鼠體重的影響

整個(gè)試驗(yàn)過程中，不同組別昆明小鼠均未出現(xiàn)死亡，各組昆明小鼠活動(dòng)未見明顯異常、飲食飲水正常、排便正常，皮膚和被毛無明顯變化。 給藥后第0d 到第14d 各組昆明小鼠體重均呈現(xiàn)遞增趨勢， 不同劑量南瓜子氨酸給藥組與空白對(duì)照組昆明小鼠的體重之間，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異意義（P＜0.05），見圖1。

圖1 不同試驗(yàn)組昆明小鼠體重變化情況

2.2 南瓜子氨酸對(duì)小鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

與空白對(duì)照組比較，南瓜子氨酸低、中、高劑量組昆明小鼠的血常規(guī)指標(biāo)中Lym、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW、MPV 的值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＞0.05）；WBC、Lym 和Mon的值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P≤0.05）， 但各指標(biāo)值均在正常范圍值內(nèi)。 在高劑量組，與空白對(duì)照組昆明小鼠RDWa、PLT 的值相比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P≤0.05）。

隨給藥劑量增加，昆明小鼠WBC 呈減少趨勢，高劑量組與對(duì)照組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）；Mon%呈降低趨勢，中劑量和高劑量組與空白對(duì)照組之間均統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著 （P＜0.05）；RDWa 呈增加趨勢， 高劑組與空白對(duì)照組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）；PLT 呈增加趨勢，高劑量組與空白對(duì)照組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）。

表1 不同試驗(yàn)組昆明小鼠血常規(guī)指標(biāo)

2.3 南瓜子氨酸對(duì)昆明小鼠臟器的影響

給藥14d 后解剖所有昆明小鼠，摘取臟器稱重，與空白對(duì)照組相比較，南瓜子氨酸低、中、高劑量組昆明小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟的重量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；然而，隨著用藥劑量增大，肝臟重量呈逐漸下降趨勢，見圖2。

圖2 不同試驗(yàn)組昆明小鼠的臟器重量

3 討論

南瓜子廣泛應(yīng)用于中藥治療和食療保健等， 具有較好的大眾基礎(chǔ)。 本研究顯示， 經(jīng)口灌服昆明小鼠不同劑量南瓜子氨酸后，均未出現(xiàn)中毒或死亡現(xiàn)象，其臟器未見明顯異常。 血常規(guī)中的6 項(xiàng)指標(biāo)（RBC、HCT、MCV、MCH、RDW 和RDWa）雖有波動(dòng)變化， 但均在正常范圍值之內(nèi)；4 項(xiàng)指標(biāo) （WBC、Lym、Lym%、Mon%）隨給藥劑量增加呈現(xiàn)逐漸上升或下降趨勢，但均在正常范圍值之內(nèi)。 淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞比值（LMR）可用來評(píng)估機(jī)體免疫功能系統(tǒng)[4]，本研究結(jié)果顯示白細(xì)胞中淋巴細(xì)胞比例下調(diào)，單核細(xì)胞比例上調(diào)，提示LMR 的值可能會(huì)出現(xiàn)偏離，南瓜子氨酸可能會(huì)引起小鼠機(jī)體免疫功能異常； 血小板的兩項(xiàng)指標(biāo)中，MPV 無明顯變化，但PLT 值隨給藥劑量的增加而增加，提示南瓜子氨酸可能引起骨髓活動(dòng)增強(qiáng)，從而引起血小板數(shù)增加，有利于促進(jìn)機(jī)體生理性止血和血管上皮細(xì)胞恢復(fù)。

前期研究發(fā)現(xiàn)，南瓜子與其他中藥提取物聯(lián)合應(yīng)用，具有一定的抗弓形蟲效果[5]。 李蘊(yùn)玉等[6]研究發(fā)現(xiàn)，0.1g/mL 南瓜子水提液與柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）卵囊共培養(yǎng)4d，能顯著抑制卵囊孢子化。 也有研究發(fā)現(xiàn)，每天早晨飼喂南瓜瓤給空腹的羊，連續(xù)2～3d，與南瓜子驅(qū)除羊體內(nèi)絳蟲具有同樣功效，分析其有效成分均為南瓜子氨酸[7]。 以上研究均表明，南瓜子氨酸無明顯毒性作用，食療和藥用均安全可靠，臨床上可作為常規(guī)添加劑，用于動(dòng)物的驅(qū)蟲和保健。