正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選醋南五味子的工藝研究

種 振，高 波，羅 川，胡 雨

(1 安徽華潤(rùn)金蟾藥業(yè)股份有限公司，安徽 淮北 235000；2 華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東 深圳 518000)

南五味子為木蘭科植物華中五味子的干燥成熟果實(shí)。加工方法為采摘，曬干，除去果梗和雜質(zhì)[1]。其主要化學(xué)成分有木脂素及揮發(fā)油等[2]。臨床上多用于久嗽虛喘，夢(mèng)遺滑精，自汗盜汗，津傷口渴，心悸失眠[1]。其中，五味子酯甲是五味子木脂素的主要成分之一，具有較強(qiáng)的抗氧化活性[3-4]。南五味子醋炙以后，溫補(bǔ)功效增強(qiáng)，常采用加入米醋拌勻潤(rùn)透后蒸制加工而成[5]?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2015版對(duì)南五味子醋制加工炮制工藝收載比較籠統(tǒng)，概括性較強(qiáng)，沒(méi)有確切的執(zhí)行參數(shù)。目前，關(guān)于醋南五味子工藝研究的文獻(xiàn)[6-7]，沒(méi)有對(duì)南五味子醋制加工后成品的性狀評(píng)價(jià)。而本研究以南五味子醋制成品的性狀和五味子酯甲為雙指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)選南五味子醋制加工工藝，以期為南五味子醋制加工的產(chǎn)量化及規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)支持[8]。

1 儀器和試劑

1.1 儀 器

高效液相Ultimate 3000色譜系統(tǒng)，包括自動(dòng)進(jìn)樣器、色譜柱溫箱、紫外檢測(cè)器、色譜管理系統(tǒng)；C18色譜柱、超聲清洗儀、中藥粉碎機(jī)、XP26型百萬(wàn)分之一電子天平。

1.2 試 劑

五味子酯甲對(duì)照品、色譜乙腈、水為娃哈哈純凈水、南五味子飲片(批號(hào)：18042511)；本研究用的南五味子飲片購(gòu)自亳州市某飲片廠，經(jīng)鑒定是：木蘭科植物華中五味子的干燥成熟果實(shí)[1,8]。

2 方 法

2.1 指標(biāo)性成分含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性

C18色譜柱，流動(dòng)相：四氫呋喃-水(38:62)，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流速為 1.0 mL/min，柱溫：25 ℃。理論板數(shù)按五味子酯甲峰計(jì)算應(yīng)≥3000，色譜峰對(duì)稱(chēng)性良好[1,8]。見(jiàn)圖1。

圖1 南五味子HPLCFig.1 HPLC of vinegar prepared South Wuweizi

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

取對(duì)照品五味子酯甲適量，參照《中國(guó)藥典》(2015版)南五味子藥材標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)對(duì)照品溶液的制備方法制備對(duì)照品溶液，即得[1,8]。

2.1.3 供試品溶液的制備

參照《中國(guó)藥典》(2015版)南五味子藥材標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，即可[1,9]。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)

2.2.1 醋南五味子炮制工藝的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

基于南五味子醋制加工文獻(xiàn)檢索綜述[5-10]及單因素實(shí)驗(yàn)考察，采用L9(34) 正交實(shí)驗(yàn)，考察醋的用量(A)、蒸制加工時(shí)間(B)、悶潤(rùn)透心時(shí)間(C) 等因素，以南五味子醋制品性狀和及南五味子有效成分五味子酯甲為雙評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選南五味子醋制加工的炮制工藝。因素水平見(jiàn)表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 Table of factors and levels of orthogonal test

2.2.2 飲片性狀的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》(2005版)及《中華人民共和國(guó)藥典》(2015版)關(guān)于南五味子醋制加工品的性狀收載為：南五味子醋制品表面棕黑色，油潤(rùn)。微有醋香氣[1,11-12]。本實(shí)驗(yàn)按照正交實(shí)驗(yàn)加工制備南五味子醋制品，參照藥典及炮制規(guī)范對(duì)南五味子醋制品進(jìn)行性狀評(píng)分，南五味子醋制加工品具體性狀及評(píng)分詳見(jiàn)表2[8]。

2.2.3 綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

為了更客觀地評(píng)價(jià)南五味子醋制品的質(zhì)量，本研究以南五味子醋制品外觀性狀和五味子酯甲為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用綜合評(píng)分法來(lái)評(píng)定實(shí)驗(yàn)[12-13]。五味子酯甲是《中華人民共和國(guó)藥典》(2015版)規(guī)定的指標(biāo)性成分，故擬定該指標(biāo)權(quán)重系數(shù)為0.7；飲片外觀性狀是中藥飲片的傳統(tǒng)質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，是評(píng)價(jià)飲片質(zhì)量?jī)?yōu)劣的關(guān)鍵性因素之一[13-14]，故將其作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，并擬定其權(quán)重系數(shù)為0.3。綜合的評(píng)分=飲片的性狀評(píng)分+五味子酯甲含量評(píng)分[8,12-13]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及直觀分析結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 南五味子醋制工藝的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Table 2 The results of orthogonal test of vinegar prepared South Wuweizi(n=3)

由直觀分析的結(jié)果可知，各個(gè)因素對(duì)南五味子醋制加工工藝的影響順序?yàn)?B>C>A。由方差分析可知蒸制加工時(shí)間(B因素)對(duì)南五味子醋制加工工藝有顯著性影響[7]，醋的用量及悶潤(rùn)透心時(shí)間(A及C 因素)則對(duì)南五味子醋制加工工藝無(wú)顯著性影響。故綜合分析可知南五味子醋制的最佳炮制工藝為 A1B1C2，即取凈南五味子適量，加入南五味子量20%的米醋拌勻，悶潤(rùn)1 h至透心，放入蒸藥鍋中蒸制加工7 h，取出，在60 ℃條件下干燥[7-8]。

表3 綜合評(píng)分方差分析Table 3 Variance analysis of comprehensive score

2.3 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)

取凈南五味子樣品適量，依照優(yōu)化出的最佳工藝平行制備3 份樣品，觀察南五味子醋制品性狀及測(cè)定成品中五味子酯甲含量，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 驗(yàn)證結(jié)果Table 4 The results of verification test

結(jié)果表明，采用該優(yōu)選工藝炮制的樣品性狀及五味子酯甲含量均較穩(wěn)定，表明該加工工藝較穩(wěn)定。即南五味子醋制最佳工藝為：取凈南五味子適量，加入南五味子量20%的米醋拌勻，悶潤(rùn)1 h至透心，放入蒸藥鍋中蒸制加工7 h，取出，在60 ℃條件下干燥[8]。

3 討 論

南五味子醋制加工品蒸至外表面呈棕黑色，稍有光澤，油潤(rùn)，微有醋香氣時(shí)，成品質(zhì)量較優(yōu)，這也與南五味子醋制加工成品傳統(tǒng)外觀性狀及現(xiàn)行版藥典描述相一致[8]。表明外觀性狀是中藥飲片的關(guān)鍵評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，是傳統(tǒng)意義上飲片內(nèi)在化學(xué)成分及化學(xué)成分集群不能替代的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[14]。

南五味子醋制加工文獻(xiàn)[5-7]優(yōu)選的工藝各不相同，本文以多指標(biāo)代替單一指標(biāo)來(lái)考察醋南五味子的炮制工藝，其結(jié)果更具科學(xué)性和客觀性。本實(shí)驗(yàn)以外觀性狀及五味子酯甲為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選出的醋南五味子的加工炮制工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性良好，可為醋南五味子的工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的數(shù)據(jù)支持。將來(lái)，還應(yīng)把化學(xué)成分與藥效學(xué)結(jié)合一起優(yōu)選加工炮制工藝，以期所優(yōu)選工藝更客觀實(shí)用。