頂空氣相色譜法測(cè)定香菊感冒顆粒中麝香草酚和百秋李醇的含量

許 奇，張華鋒，顧 倩

(蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心，蘇州 215104)

香菊感冒顆粒由廣藿香、香薷、野菊花和青蒿組成，具有疏風(fēng)解表、芳香化濕和清暑解熱的作用，主治四時(shí)感冒，尤其對(duì)夏季感冒發(fā)熱、頭痛和胸悶無(wú)汗等更為適宜[1]。研究表明，揮發(fā)油為其主要的功效成分[1]。據(jù)報(bào)道，廣藿香和香薷揮發(fā)油在心腦血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和胃腸道等方面有治療作用，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗病毒及促進(jìn)藥物吸收等作用[2-5]。香菊感冒顆粒的標(biāo)準(zhǔn)中僅有3個(gè)鑒別方法，無(wú)含量測(cè)定方法，無(wú)法對(duì)揮發(fā)油的質(zhì)量進(jìn)行控制。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立頂空氣相色譜法測(cè)定其揮發(fā)油[6-15]中的百秋李醇和麝香草酚的方法，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 7890A氣相色譜儀，Agilent 7697A頂空進(jìn)樣器，Openlab色譜工作站(美國(guó)Agilent公司)；XS105DC電子天平(美國(guó)梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥 環(huán)己烷(Fisher公司，色譜純)；純化水；百秋李醇對(duì)照品(批號(hào)100508-200902，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.1%)，麝香草酚對(duì)照品(批號(hào)110772-201206，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%)，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；香菊感冒顆粒(雷允上藥業(yè)(蘇州)有限公司，批號(hào)：NC12003，NC12005，NC12009)；野菊花和青蒿，雷允上藥業(yè)(蘇州)有限公司，打粉備用。

2 方法和結(jié)果

2.1色譜條件 毛細(xì)管柱[16-19]：Agilent HP-5(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；分流比5∶1；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；載氣：N2；流速：2 mL·min-1；程序升溫：在40 ℃下保持5 min，以5 ℃·min-1的速率升至150 ℃，再以10 ℃·min-1的速率升至200 ℃，保持3 min；檢測(cè)器：FID(H2：30 mL·min-1，空氣：400 mL·min-1)；檢測(cè)器溫度：300 ℃；頂空進(jìn)樣器爐溫：85 ℃；平衡時(shí)間：10 min；定量環(huán)溫度：90 ℃；傳輸線溫度：95 ℃；進(jìn)樣體積：1 mL。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液 精密稱取麝香草酚和百秋李醇對(duì)照品適量，用環(huán)己烷溶解制成質(zhì)量濃度分別為2.977和3.141 mg·mL-1的麝香草酚和百秋李醇對(duì)照品母液。分別精密吸取上述對(duì)照品母液1.0和0.5 mL，置于同一100 mL量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液100 μL，置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL頂空瓶中，密封，即得。

2.2.2供試品溶液 將香菊感冒顆粒研細(xì)，精密稱取細(xì)粉2.5 g，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，加入純化水10 mL和環(huán)己烷100 μL，密封，即得。

2.2.3陰性對(duì)照溶液 將野菊花和青蒿2味藥材按照處方制法縮小1/8制成陰性樣品。再按照2.2.2項(xiàng)下方法配制成陰性對(duì)照溶液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1系統(tǒng)適用性考察 取2.2項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液測(cè)定，麝香草酚與百秋李醇的保留時(shí)間分別為20.9和29.3 min。供試品溶液色譜圖中存在與對(duì)照品溶液色譜圖中主峰保留時(shí)間一致的色譜峰，且供試品溶液中麝香草酚和百秋李醇的色譜峰與相鄰的峰分離度大于1.5。陰性樣品色譜圖中未出現(xiàn)百秋李醇色譜峰，在麝香草酚相應(yīng)的保留時(shí)間處有峰。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取麝香草酚對(duì)照品母液0.2，0.5，1.0，2.0和10.0 mL以及百秋李醇對(duì)照品母液0.1，0.25，0.5，1.0和5.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液100 μL，分別置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL頂空瓶中，密封測(cè)定，以麝香草酚與百秋李醇的峰面積與其對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度(μg·mL-1)進(jìn)行線性回歸。得回歸方程：麝香草酚y=1 063.7x+1 658 (r=0.999 5)；百秋李醇y=1 207.4x-120.35(r=0.999 6)。結(jié)果表明，麝香草酚和百秋李醇的質(zhì)量濃度在11.908～595.404 和6.283～314.147 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖1GC圖

A.混合對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照樣品；1.麝香草酚；2.百秋李醇。

Fig.1 GC chromatograms

A.mixed reference substances；B.samples；C.negative control samples；1.thymol；2.patchouli alcohol.

2.3.3精密度 精密吸取對(duì)照品溶液100 μL，6份，置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL頂空瓶中，密封測(cè)定，結(jié)果麝香草酚峰面積的RSD值為1.7%(n=6)、百秋李醇峰面積的RSD值為2.0%(n=6)。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.3.4重復(fù)性 取同一批(批號(hào)CN12005)香菊感冒顆粒樣品，分別制成6份供試品溶液，測(cè)定。測(cè)得麝香草酚平均含量為2.438 4 μg·g-1，RSD值為1.5%(n=6)；百秋李醇平均含量為0.499 6 μg·g-1，RSD值為1.7%(n=6)。結(jié)果表明，重復(fù)性良好。

2.3.5穩(wěn)定性 另取香菊感冒顆粒樣品(批號(hào)CN12005)制備供試品溶液。分別在0，2，4，6和8 h時(shí)測(cè)定，測(cè)得麝香草酚含量的RSD值為2.0%(n=5)；百秋李醇含量的RSD值為2.0%(n=5)。結(jié)果表明，溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6加樣回收率 精密吸取2.2.1項(xiàng)下制備的麝香草酚和百秋李醇對(duì)照品儲(chǔ)備液各1 mL，置于同一100 mL量瓶中，加環(huán)己烷稀釋至刻度，作為對(duì)照品加入溶液。取與重復(fù)性實(shí)驗(yàn)同一批號(hào)的香菊感冒顆粒細(xì)粉6份，每份1.3 g，精密稱定，置于20 mL頂空瓶中，加入1.07 g的蔗糖和10 mL的純化水，再精密吸取100 μL對(duì)照品加入溶液，置于頂空瓶中，密封，作為回收率供試品溶液，測(cè)定，按照外標(biāo)法分別計(jì)算麝香草酚和百秋李醇的加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1和表2，麝香草酚的平均回收率為97.0%，RSD值為2.0%(n=6)；百秋李醇的平均回收率為99.3%，RSD值為1.5%(n=6)。

2.4樣品測(cè)定 按照2.2.2項(xiàng)下方法，分別測(cè)定3批香菊感冒顆粒的含量。測(cè)得麝香草酚的平均含量分別為0.99，2.44和1.31 μg·g-1，百秋李醇的平均含量為0.80，2.54和1.14 μg·g-1。

表1麝香草酚回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 The results of recovery test of thymol

(n=6)

表2百秋李醇回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.2 The results of recovery test of patchouli alcohol

(n=6)

3 討論

香菊感冒顆粒由處方中的4味藥用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，藥渣加水煎煮濃縮成清膏，與蔗糖按照1∶6的比例混勻，干燥，制粒，再加入揮發(fā)油及薄荷油，混勻，即得。由此可知，可以通過(guò)萃取方法得揮發(fā)油后直接進(jìn)樣。但通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)萃取法使得揮發(fā)油質(zhì)量濃度低，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的靈敏度過(guò)低、準(zhǔn)確度低。后選用頂空進(jìn)樣法后，能使得測(cè)定的成分滿足要求，故采用頂空進(jìn)樣的方法。參考文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)后，確定采取程序升溫能很好地滿足色譜峰的分離要求。采用頂空法后考察了不同的頂空平衡溫度(75，80，85和90 ℃)和不同的平衡時(shí)間(5，10，15，20，25，30，35，40和45 min)后，最終確定了2.1項(xiàng)下色譜條件。

查文獻(xiàn)時(shí)未發(fā)現(xiàn)野菊花和青蒿揮發(fā)油中有麝香草酚和百秋李醇，故只用青蒿和野菊花制成陰性對(duì)照。但實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)陰性結(jié)果中卻有麝香草酚，后用GC-MS法確認(rèn)，4種藥材中均有麝香草酚，故該陰性溶液只為確認(rèn)百秋李醇。

本實(shí)驗(yàn)采取頂空氣相色譜法測(cè)定香菊感冒顆粒中的麝香草酚和百秋李醇，前處理方法簡(jiǎn)單，且結(jié)果相對(duì)精確，可作為提高香菊感冒顆粒標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。