三種檢測(cè)方法檢測(cè)抗dsDNA 抗體的臨床意義

萬(wàn)輝 樂(lè)玉霞

抗雙鏈DNA 抗體主要發(fā)生于系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中［1］,這也是目前臨床上公認(rèn)的紅斑狼瘡高度特異性抗體,在臨床上被列為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的一個(gè)重要診斷標(biāo)準(zhǔn),目前市場(chǎng)上已經(jīng)有諸多產(chǎn)品能夠?qū)ο到y(tǒng)性紅斑狼瘡的抗雙鏈DNA 抗體進(jìn)行測(cè)定［2］,常見(jiàn)的包含綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法、歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法以及膠體金快速斑點(diǎn)法。但在進(jìn)行檢測(cè)時(shí),不同的檢測(cè)方式應(yīng)用于患者檢測(cè)中產(chǎn)生的診斷結(jié)果也有所不同,并且臨床應(yīng)用也各有利弊,而醫(yī)務(wù)人員在對(duì)患者進(jìn)行檢查時(shí),認(rèn)為需要根據(jù)患者的病情狀況作出相應(yīng)的調(diào)整,這樣才能有助于提高患者的診斷準(zhǔn)確度［3］。本文中將2018 年1 月～2020 年3 月本院數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)資料登記有效的120 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者作為研究對(duì)象,將綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法、歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法以及膠體金快速斑點(diǎn)法三種方式,分別應(yīng)用于抗雙鏈DNA 抗體的診斷中,分析對(duì)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷準(zhǔn)確度,探討其臨床應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)將診斷結(jié)果與方法總結(jié)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018 年1 月～2020 年3 月本院數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)資料登記有效的120 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者作為研究對(duì)象,根據(jù)病情不同分為疾病活動(dòng)組及疾病穩(wěn)定組,每組60 例；同時(shí)選取本院中數(shù)據(jù)登記有效的60 例健康體檢者作為對(duì)照組。紅斑狼瘡患者男女比例為72∶48；年齡21～46 歲,平均年齡(31.5±4.8)歲。對(duì)照組男女比例為36∶24；年齡20～45 歲,平均年齡(32.1±5.6)歲。

1.2 方法 三組分別采用綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法、歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法以及膠體金快速斑點(diǎn)法對(duì)抗雙鏈DNA 抗體進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.1 綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法 在獲得血清標(biāo)本后,按照1∶10 進(jìn)行稀釋,試劑均選擇同一批次,在進(jìn)行檢查時(shí),如果發(fā)現(xiàn)抗雙鏈DNA 抗體呈現(xiàn)陽(yáng)性,則繼續(xù)進(jìn)行血清倍比稀釋,測(cè)定最終稀釋度,醫(yī)務(wù)人員在對(duì)其進(jìn)行處理時(shí),嚴(yán)格按照各項(xiàng)說(shuō)明書(shū)操作。在檢查結(jié)果中發(fā)現(xiàn)動(dòng)基體顯示均勻熒光或者邊緣有明顯增強(qiáng)熒光則將結(jié)果記錄為陽(yáng)性,而細(xì)胞核或者鞭毛機(jī)體出現(xiàn)熒光則記錄為陰性。

1.2.2 歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法 在進(jìn)行記錄時(shí)獲得血清標(biāo)本,并且按照1∶100 進(jìn)行稀釋,按照要求進(jìn)行操作。首先對(duì)試劑進(jìn)行30 min 震蕩,隨后浸泡15 min 再加以稀釋,酶結(jié)合物進(jìn)行30 min 震蕩,清洗15 min 后,浸泡在加底物溶液中溫育,搖床震蕩10 min,對(duì)最終的顯色結(jié)果進(jìn)行判定,各項(xiàng)操作由同組醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行,并且按照說(shuō)明書(shū)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 膠體金快速斑點(diǎn)法 首先采用測(cè)定板加2 滴稀釋液,等待其干后再加100 μl 血清,等待其滲濾后將濾液去除,隨后加金標(biāo)液等待滲干隨后加洗液,可由醫(yī)務(wù)人員對(duì)最終的結(jié)果進(jìn)行肉眼判斷。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比三種檢測(cè)方式對(duì)各組抗雙鏈DNA 抗體的診斷陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法對(duì)疾病活動(dòng)組患者抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率為95.00%(57/60),對(duì)疾病穩(wěn)定組患者的檢測(cè)陽(yáng)性率為71.67%(43/60),對(duì)對(duì)照組的檢測(cè)陽(yáng)性率為5.00%(3/60)；歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法對(duì)疾病活動(dòng)組患者抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率為76.67%(46/60),對(duì)疾病穩(wěn)定組患者的檢測(cè)陽(yáng)性率為61.67%(37/60),對(duì)對(duì)照組的檢測(cè)陽(yáng)性率為10.00%(6/60)；膠體金快速斑點(diǎn)法對(duì)疾病活動(dòng)組患者抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率為80.00%(48/60),對(duì)疾病穩(wěn)定組患者的檢測(cè)陽(yáng)性率為65.00%(39/60),對(duì)對(duì)照組的檢測(cè)陽(yáng)性率為8.33%(5/60)。三種檢測(cè)方法對(duì)疾病活動(dòng)組患者抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率高于疾病穩(wěn)定組、對(duì)照組,疾病穩(wěn)定組高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率為83.33%(100/120),均高于歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法的69.17%(83/120)、膠體金快速斑點(diǎn)法的72.50%(87/120),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1,表2,表3。

表1 綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法對(duì)三組抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率［n(%)］

表2 歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法對(duì)三組抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率［n(%)］

表3 膠體金快速斑點(diǎn)法對(duì)三組抗雙鏈DNA 抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率［n(%)］

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡在目前臨床上較為常見(jiàn),這種病癥在進(jìn)行檢查時(shí)［4］,主要通過(guò)對(duì)抗雙鏈DNA 抗體進(jìn)行檢查,能夠有效提高患者的診斷準(zhǔn)確率。系統(tǒng)性紅斑狼瘡目前在臨床上是一種十分常見(jiàn)的免疫性疾病,這種病癥會(huì)對(duì)患者的機(jī)體功能造成極大的損傷,所以醫(yī)務(wù)人員在開(kāi)展治療前,需要做好患者的病情分析和診斷,了解患者的個(gè)體狀況并且對(duì)患者進(jìn)行有效的管理［5,6］,這樣才能使患者的治療總有效率得到提升。本次研究中將綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法、膠體金快速斑點(diǎn)法以及歐蒙酶免疫斑點(diǎn)法應(yīng)用于患者的病情診斷中,可以看出綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法的檢測(cè)陽(yáng)性率相較于其他兩種檢測(cè)方法來(lái)說(shuō)明顯更高,并且能夠幫助醫(yī)務(wù)人員了解患者的病情,并且這種檢測(cè)方案還能夠在一定程度上避免出現(xiàn)誤診或者漏診的情況。

抗雙鏈DNA 抗體是目前臨床上對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡進(jìn)行診斷的一項(xiàng)具有較高價(jià)值的客觀指標(biāo)［7］,但缺乏相應(yīng)的診斷金標(biāo)準(zhǔn)［8］。雖然目前臨床研究人員認(rèn)為綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法檢測(cè)方式的診斷準(zhǔn)確度最為良好,但這種檢測(cè)也僅僅局限于方法上的差異。綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法在對(duì)抗雙鏈DNA 進(jìn)行檢查時(shí),由于目前短膜蟲(chóng)在臨床上被認(rèn)為是一種雪柱邊毛蟲(chóng),其雙鏈DNA 含量極為純凈,并且不含有單鏈DNA,抗原性較為特殊［9］。膠體金快速斑點(diǎn)法在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)診斷準(zhǔn)確率相較于綠蠅短膜蟲(chóng)間接免疫熒光法診斷來(lái)說(shuō)略低,究其原因可能是由于雙鏈DNA 抗原在純度包被等生化處理過(guò)程中,很容易導(dǎo)致DNA 內(nèi)部位點(diǎn)出現(xiàn)人為暴露,進(jìn)而影響抗單鏈DNA 抗體存在而引發(fā)非陽(yáng)性反應(yīng),這種現(xiàn)象可能會(huì)導(dǎo)致患者的診斷準(zhǔn)確率受到影響［10］。

抗雙鏈DNA 抗體檢查不僅能夠幫助醫(yī)務(wù)人員對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡進(jìn)行診斷,還能夠有效對(duì)紅斑狼瘡的活動(dòng)性和治療狀況進(jìn)行評(píng)估,通過(guò)這種方式能夠幫助醫(yī)務(wù)人員確定患者的病情狀況,了解患者的紅斑狼瘡發(fā)展,對(duì)于患者后續(xù)治療工作的開(kāi)展來(lái)說(shuō)有積極意義。值得注意的是,在應(yīng)用不同的診斷方式對(duì)患者進(jìn)行診斷時(shí),不同的診斷方式在應(yīng)用過(guò)程中產(chǎn)生的差異較為明顯,相關(guān)醫(yī)務(wù)人員需要了解患者的病理學(xué)特征并做出進(jìn)一步的改進(jìn),這樣才有助于提高患者的診斷效果。

在對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡進(jìn)行治療時(shí),激素是其中的常用藥物,而長(zhǎng)期應(yīng)用大劑量的糖皮質(zhì)激素,可能會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)較多的不良反應(yīng),老年患者常見(jiàn)骨質(zhì)疏松以及脊柱壓縮性骨折,腎上腺素萎縮或電解質(zhì)紊亂等病癥在臨床上也較為常見(jiàn),所以在用藥過(guò)程中需要注意觀察患者是否存在消化道癥狀,同時(shí)需要密切觀察患者的睡眠以及情緒變化,注意監(jiān)測(cè)患者血糖、血壓和肝功能變化,如果發(fā)現(xiàn)異常,應(yīng)當(dāng)及時(shí)告知醫(yī)師,幫助患者進(jìn)行處理。系統(tǒng)性紅斑狼瘡在治療過(guò)程中,患者需要時(shí)常應(yīng)用免疫抑制藥物,患者在用藥過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)心臟以及視網(wǎng)膜損傷,所以患者在接受免疫抑制藥物治療時(shí),需要對(duì)患者的視力和心率變化進(jìn)行監(jiān)測(cè),建議至少每半年對(duì)眼底進(jìn)行一次探查,同時(shí)做一次心電圖檢測(cè),以保證患者視網(wǎng)膜以及心肌功能發(fā)生損傷時(shí)能夠及時(shí)對(duì)其進(jìn)行治療。

綜上所述,三種診斷方式對(duì)于抗雙鏈DNA 抗體均具有較高的診斷陽(yáng)性率,并且在對(duì)患者的各個(gè)時(shí)期進(jìn)行診斷時(shí),產(chǎn)生的診斷效果較為良好,而三種診斷方式應(yīng)用于患者的診斷中,可以選擇聯(lián)合診斷,這樣有助于避免誤診或者漏診。