基于QuEChERS 方法檢測(cè)蔬菜和水果中 農(nóng)藥殘留的質(zhì)量控制分析

◎ 丁宗博，李 莉，張興龍

（青島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，山東 青島 266000）

隨著人們對(duì)食品質(zhì)量安全的重視，食品檢驗(yàn)檢測(cè)對(duì)整體的質(zhì)量控制有了更高的要求。質(zhì)量控制措施如果不科學(xué)、不嚴(yán)謹(jǐn)，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的有效性，從而造成決策失誤。做好蔬菜、水果中農(nóng)藥殘留分析的質(zhì)量控制是出具準(zhǔn)確、可靠數(shù)據(jù)的前提和重要保障[1-2]。

相比傳統(tǒng)的固相萃取前處理方法，QuEChERS 方法由于其快速、簡(jiǎn)單、廉價(jià)、有效、可靠及安全的特點(diǎn)，在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。本文基于QuEChERS 前處理方法，對(duì)蔬菜和水果中農(nóng)藥殘留檢測(cè)過(guò)程中的關(guān)鍵控制點(diǎn)進(jìn)行性析，并提出了質(zhì)量控制措施。

1 樣品采集的質(zhì)量控制

樣品采集主要包括產(chǎn)地和市場(chǎng)兩個(gè)方面。產(chǎn)地采樣時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照NY/T 789—2004[3]要求，確定抽樣單元；市場(chǎng)采樣時(shí)，同一攤位、同一品種、同一來(lái)源及同批銷(xiāo)售的為1 個(gè)抽樣單元。每個(gè)抽樣單元內(nèi)采集1 個(gè)代表性樣本，保證被抽檢的樣品具有代表性和隨機(jī)性。按照GB/T 8855—2008[4]規(guī)定，隨機(jī)抽取該范圍內(nèi)的樣本，每個(gè)樣品的采樣量應(yīng)不少于3 kg，南瓜取5 個(gè)個(gè)體，花椰菜、大白菜、紅甘藍(lán)和萵苣等取10 個(gè)個(gè)體。

2 樣品制備的質(zhì)量控制

2.1 制樣場(chǎng)所的要求

制樣場(chǎng)所應(yīng)潔凈衛(wèi)生，并具有滿足樣品制備相關(guān)要求的用水。如現(xiàn)場(chǎng)條件無(wú)法滿足制樣要求，則可就近選擇合適場(chǎng)所進(jìn)行樣品制備。

2.2 制樣器具的要求

應(yīng)采用適合并有效的制樣器具，制樣器具不應(yīng)對(duì)樣品造成污染。每處理完一個(gè)樣品后，都要對(duì)制樣器具進(jìn)行清潔，避免交叉污染。

2.3 制樣

樣品首先進(jìn)行預(yù)處理，先去除雜物以及腐爛、枯萎或受病蟲(chóng)害侵蝕嚴(yán)重的個(gè)體。用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品，用干凈紗布擦去附著在樣品表面的泥土。如果樣品附著太多泥土，可用濕毛巾擦洗或用軟毛刷刷洗，并擦干。然后，按照GB 2763—2019[5]附錄A 要求，確定樣品的測(cè)定部位，經(jīng)四分法縮分后制備樣品。制樣時(shí)，應(yīng)采用破壁機(jī)，使樣品粉碎程度盡量高，有助于克百威、涕滅威、氧樂(lè)果和吡蟲(chóng)啉等內(nèi)吸傳導(dǎo)性農(nóng)藥的提取檢測(cè)。

2.4 樣品分裝

制備好的樣品必須馬上獨(dú)立包裝，避免相互污染，根據(jù)檢測(cè)需要分裝成若干份，加貼唯一性標(biāo)簽。不立即進(jìn)行前處理的，可在-18 ～-20 ℃左右的冰柜中保存?zhèn)溆谩y(cè)定時(shí)每份樣品只解凍一次，切不可重復(fù)解凍。

3 樣品運(yùn)輸?shù)馁|(zhì)量控制

樣品應(yīng)在24 h 內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，否則應(yīng)將樣品制備冷凍后運(yùn)輸。樣品運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)采用適當(dāng)措施保證樣品不被污染，避免陽(yáng)光直射。高溫季節(jié)樣品運(yùn)輸應(yīng)選擇保持低溫的容器，低溫包裝時(shí)應(yīng)使用適當(dāng)?shù)牟牧习鼧悠罚苊馀c冷凍劑接觸造成凍傷，冷凍劑不可使用碎冰。

4 樣品提取的質(zhì)量控制

4.1 稱樣

樣品制樣結(jié)束后立即測(cè)定的，稱樣前可用稱樣匙先混勻，然后稱量，尤其針對(duì)含水量大的樣品；若樣品已冷凍保存，可待其完全解凍后，在稱樣前用勻漿機(jī)高速勻漿混勻，然后稱樣。若解凍不完全就稱量，容易造成乳化，也容易造成待測(cè)農(nóng)藥組分分布不均，檢測(cè)結(jié)果不可靠。

4.2 提取

加入提取溶劑、萃取鹽包渦旋振蕩時(shí)振蕩器力度要足夠大，使其充分接觸，確保提取效率。為防止加入鹽包后放熱反應(yīng)產(chǎn)生結(jié)塊，加入陶瓷均質(zhì)子提取效果更加理想。

5 樣品凈化的質(zhì)量控制

參照GB 23200.113—2018[6]，對(duì)于提取顏色較深的試樣，需加入含有885 mg 硫酸鎂、150 mg PSA 及15 mg GCB 的凈化包，以去除色素。因GCB 對(duì)農(nóng)藥有不同程度的吸附性，要謹(jǐn)慎使用。對(duì)于顏色較淺的試樣，使用內(nèi)含900 mg 硫酸鎂、150 mg PSA 的凈化包即可。

6 樣品濃縮、復(fù)溶的質(zhì)量控制

凈化離心好的上清液過(guò)0.22 μm 濾膜后可直接上LC-MS/MS 測(cè)定；上氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀之前，因提取溶劑為乙腈，為防止損壞色譜柱，需進(jìn)行溶劑置換。此過(guò)程中氮吹儀的水浴溫度設(shè)定在40 ℃左右，控制好氮?dú)饬魉?，以免有機(jī)相濺落容器內(nèi)部或?yàn)R出，導(dǎo)致待測(cè)農(nóng)藥組分損失，影響測(cè)定結(jié)果。氮吹至近干后，加入乙酸乙酯復(fù)溶，上GC-MS/MS 測(cè)定。

7 儀器測(cè)定的質(zhì)量控制

7.1 進(jìn)樣順序

為防止污染，應(yīng)遵循以下進(jìn)樣順序：試劑空白→空白樣品→質(zhì)控樣品→試劑空白→標(biāo)準(zhǔn)溶液→樣品溶液→標(biāo)準(zhǔn)溶液→空白試劑。

需特別注意的是，對(duì)于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，流動(dòng)相要現(xiàn)配現(xiàn)用，尤其是水相，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)容易滋生細(xì)菌，建議使用屈臣氏蒸餾水配制。

7.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

目前，農(nóng)藥殘留測(cè)定使用的標(biāo)準(zhǔn)品母液濃度多為1 000 mg·L-1，容量為1 mL。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要密封、避光、低溫保存，標(biāo)簽要完整，有效期要明確，并定期進(jìn)行期間核查。按照GB/T 27404—2008[7]的規(guī)定，50 ～100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液可-20 ℃保存，有效期為6 個(gè)月；5 ～10 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液-20 ℃保存，有效期為1 個(gè)月；測(cè)試用濃度可冷藏保存，有效期為1 周。過(guò)期標(biāo)準(zhǔn)溶液不可使用，需重新配制。此外，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要有統(tǒng)一編號(hào)，保證可溯源，并填好配制記錄、使用記錄等。

7.3 試劑和耗材

每購(gòu)入一批試劑和耗材，在使用前應(yīng)按相應(yīng)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)其進(jìn)行雜質(zhì)的檢查，排除試劑、耗材中雜質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，如有必要應(yīng)進(jìn)行處理后再使用。一般試劑濃縮50 ～100 倍后測(cè)定，檢查對(duì)被測(cè)組分是否有干擾；對(duì)新購(gòu)入同一批次的耗材隨機(jī)挑選一批按照檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行回收率測(cè)定，經(jīng)儀器確認(rèn)回收率正常后方可使用。

7.4 質(zhì)控樣品

質(zhì)控樣品的基質(zhì)，可根據(jù)檢測(cè)批次的種類(lèi)進(jìn)行選擇或選擇特殊、復(fù)雜、難做的基質(zhì)；質(zhì)控的項(xiàng)目盡量要兼顧儀器、性質(zhì)或者選擇難做的項(xiàng)目；質(zhì)控樣品的數(shù)量要達(dá)到每20 個(gè)樣品有一個(gè)質(zhì)控樣的要求；質(zhì)控樣品的回收率范圍應(yīng)在70%～120%，方可保證該批次檢測(cè)結(jié)果的有效性。

7.5 校準(zhǔn)

農(nóng)藥殘留檢測(cè)多采用單點(diǎn)校準(zhǔn)。每進(jìn)10 針樣品后應(yīng)進(jìn)1 針標(biāo)準(zhǔn)，用前后標(biāo)樣來(lái)計(jì)算中間樣品含量，消除儀器靈敏度變化的影響。此外，由于基質(zhì)效應(yīng)的影響，最好使用基質(zhì)標(biāo)進(jìn)行校準(zhǔn)，消除基質(zhì)干擾。

對(duì)于陽(yáng)性樣品或檢出值在限量值附近時(shí)，需進(jìn)行復(fù)測(cè)。復(fù)測(cè)時(shí)需要做質(zhì)控樣，并使用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度要接近樣品的濃度；對(duì)于含量很高的樣品，可選擇稀釋的方法上機(jī)測(cè)定。

7.6 儀器維護(hù)

與固相萃取前處理相比，QuEChERS 方法凈化效果不是很理想，對(duì)儀器的污染程度更高，因此，對(duì)儀器的維護(hù)頻率會(huì)更加頻繁。對(duì)于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，樣品測(cè)定完畢后，依次用90%水-甲醇、純甲醇沖洗整個(gè)系統(tǒng)至少2 h，用無(wú)紡布沾取異丙醇-水溶液（體積比1 ∶1）擦洗錐孔及其周?chē)?，定期清洗泵頭，2 ～3 個(gè)月清洗離子源等；而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀要做好進(jìn)樣口的維護(hù)，定期更換襯管、隔墊，清洗進(jìn)樣針，根據(jù)出峰情況截取色譜柱柱頭10 ～30 cm，調(diào)諧參數(shù)不佳時(shí)清洗離子源等，確保儀器處于最佳狀態(tài)。

8 檢測(cè)結(jié)果處理的質(zhì)量控制

樣品測(cè)定結(jié)束后，應(yīng)根據(jù)保留時(shí)間和定性/定量離子及其豐度比，準(zhǔn)確定性；定量部分?jǐn)?shù)據(jù)要記錄正確，計(jì)算無(wú)誤；數(shù)據(jù)結(jié)果計(jì)算時(shí)應(yīng)符合有效數(shù)字運(yùn)算的規(guī)定，數(shù)值修約應(yīng)符合《數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定》（GB/T 8170—2008）[8]的規(guī)定。

平行樣測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合有關(guān)精密度要求。若不符合，需重新測(cè)定。當(dāng)測(cè)定結(jié)果小于方法檢出限時(shí)應(yīng)報(bào)告為未檢出，同時(shí)寫(xiě)明小于方法檢出限；當(dāng)測(cè)定結(jié)果大于方法檢出限且小于方法定量限時(shí)，報(bào)告為定性檢出，同時(shí)寫(xiě)明小于方法定量限。

9 結(jié)語(yǔ)

為了確保農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度，保證檢測(cè)質(zhì)量，除文中質(zhì)量控制環(huán)節(jié)，還必須做好儀器設(shè)備的期間核查和校準(zhǔn)、使用情況登記、實(shí)驗(yàn)室用水、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制以及檢測(cè)人員的技術(shù)培訓(xùn)、持續(xù)能力提升等工作。只有質(zhì)量控制覆蓋蔬菜和水果中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的全過(guò)程，才能使分析結(jié)果準(zhǔn)確、可靠和有效。