老年癲癇患者血清TNF-α、IL-2及miR-21水平及意義

杜雨欣，劉波

老年癲癇的發(fā)生導(dǎo)致患者生活質(zhì)量顯著下降，并能增加老年癲癇患者的肇事率[1,2]。病情持續(xù)性進(jìn)展，還能增加老年患者的致殘率和病死率，導(dǎo)致老年癲癇患者整體臨床結(jié)局惡化。在研究癲癇的病情進(jìn)展機(jī)制的過(guò)程中，較多研究認(rèn)為基礎(chǔ)分子生物學(xué)領(lǐng)域的相關(guān)改變，能通過(guò)影響神經(jīng)元細(xì)胞的損傷凋亡，加劇神經(jīng)元細(xì)胞鞘膜組織的損害，進(jìn)而影響神經(jīng)元細(xì)胞的異常放電過(guò)程。腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）是炎性相關(guān)因子，能通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激性損傷，誘導(dǎo)下游炎癥信號(hào)因子的釋放，最終導(dǎo)致神經(jīng)元鞘膜完整性的破壞[3]；微小RNA21（micro RNA 21，miR-21）能通過(guò)加劇下游效應(yīng)因子的轉(zhuǎn)錄翻譯異常，干預(yù)神經(jīng)元細(xì)胞的修復(fù)過(guò)程[4]。為了揭示TNF-α、IL-2及miR-21的表達(dá)與老年癲癇患者的病情關(guān)系，本研究選取老年癲癇患者97 例，探討TNF-α、IL-2及miR-21的表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月至2019年12月在我院治療的老年癲癇患者97例為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)專家協(xié)作組制定的原發(fā)性癲癇標(biāo)準(zhǔn)[5]；年齡≥60 歲；患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、顱內(nèi)感染、免疫系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌疾病等；有酒精、藥物成癮史；繼發(fā)性癲癇。男59 例，女38 例；平均（70.03±7.20）歲。同時(shí)選取同期我院健康體檢者100 例為對(duì)照組，男66例，女34例；平均（71.18±8.11）歲。2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

抽取受試者的肘靜脈血5 mL，1000 r/min離心10 min，取上清液待測(cè)。采用ELISA法檢測(cè)TNF-α、IL-2，BioTek 酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)伯騰儀器有限公司；收集的上清液檢測(cè)品中加入0.3 mL氯仿，室溫下震蕩30 s，放置30 min，取上層清亮液體移入另一EP管，加入等體積的異丙嗪溶液，室溫放置30 min，1000 r/min 離心10 min，取沉淀 物 為RNA，加入75%乙醇溶液1 mL，溶解后1000 r/min 離心10 min，取上清液，加入20 μL DEPC水計(jì)算RNA濃度。采用SuperScript Ⅳ逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Invitrogen SuperScript Ⅳ反轉(zhuǎn)錄酶，購(gòu)自賽默飛公司）進(jìn)行cDNA 合成，采用金斯瑞oligo 進(jìn)行引物合成和設(shè)計(jì)，β-actin作為內(nèi)參。miR-21引物上游：CTTTGAG GTGCGTGTTT，下游：CAGTGCTCGCTTAGTGC，CISILE2018 高通量PCR 儀器購(gòu)自常州福生生物技術(shù)有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，組間差異比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組發(fā)作后1 h和對(duì)照組血清TNF-α、IL-2及miR-21水平比較

觀察組發(fā)作后1 h 血清TNF-α、IL-2 及miR-21水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.01），見(jiàn)表1。

2.2 觀察組腦電圖正常和異?；颊哐錞NF-α、IL-2及miR-21水平比較

觀察組腦電圖異?；颊甙l(fā)作后1h血清TNF-α、IL-2及miR-21水平明顯高于腦電圖正?；颊撸≒＜0.05），見(jiàn)表2。

表1 觀察組發(fā)作后1 h和對(duì)照組血清TNF-α、IL-2及miR-21水平比較（±s）

組別對(duì)照組觀察組t值P值例數(shù)10097 TNF-α/(ng/mL)1.43±0.605.50±0.9037.4510.000 IL-2/(ng/mL)4.20±1.158.72±1.3225.6480.000 miR-21相對(duì)表達(dá)量0.89±0.111.91±0.3527.7650.000

表2 觀察組腦電圖正常和異?；颊哐錞NF-α、IL-2及miR-21水平比較（±s）

表2 觀察組腦電圖正常和異?；颊哐錞NF-α、IL-2及miR-21水平比較（±s）

組別腦電圖正?；颊吣X電圖異?；颊遲值P值例數(shù)1186 TNF-α/(ng/mL)4.32±1.005.65±0.97-4.2680.000 IL-2/(ng/mL)7.10±1.128.93±1.22-4.7240.000 miR-21相對(duì)表達(dá)量1.67±0.401.94±0.37-2.2590.026

2.3 觀察組不同發(fā)作類別患者血清TNF-α、IL-2及miR-21水平比較

觀察組不同發(fā)作類別患者發(fā)作后1 h 血清TNF-α、IL-2 及miR-21水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 觀察組不同發(fā)作類型患者血清TNF-α、IL-2及miR-21水平比較（±s）

表3 觀察組不同發(fā)作類型患者血清TNF-α、IL-2及miR-21水平比較（±s）

組別單純部分新發(fā)作患者復(fù)雜部分性發(fā)作患者部分繼發(fā)全面性發(fā)作患者F值P值例數(shù)502819 TNF-α/(ng/mL)5.53±1.035.44±1.025.50±1.001.0320.578 IL-2/(ng/mL)8.79±1.068.58±1.108.60±1.051.1020.512 miR-21相對(duì)表達(dá)量1.93±0.441.87±0.391.90±0.330.9820.672

2.4 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，觀察組的血清TNF-α、IL-2與miR-21 呈正相關(guān)（r=0.343 和0.376，P＜0.05），血清TNF-α和IL-2呈正相關(guān)（r=0.302，P＜0.05）。

3 討論

老年癲癇患者的發(fā)病較隱匿，藥物療效較差，遠(yuǎn)期發(fā)生癲癇大發(fā)作或者部分發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)較高，其致殘率或惡性臨床結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)也較高[6]。臨床觀察和隨訪研究發(fā)現(xiàn)，老年癲癇患者短期內(nèi)病情進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)可超過(guò)15%以上，同時(shí)其遠(yuǎn)期其他精神系統(tǒng)并發(fā)癥的發(fā)生率也明顯上升[7,8]?，F(xiàn)階段缺乏對(duì)于老年癲癇病情評(píng)估的指標(biāo)，雖然腦電圖能在老年癲癇的病情評(píng)估中發(fā)揮作用，但腦電圖檢測(cè)的假陰性率仍然較高，其對(duì)于癲癇患者異常腦電活動(dòng)檢測(cè)的陽(yáng)性率不足。神經(jīng)特異性烯醇化酶等指標(biāo)能在老年癲癇的病情評(píng)估過(guò)程中發(fā)揮作用，但其可靠性較低，指標(biāo)檢測(cè)的穩(wěn)定性不足。本研究通過(guò)對(duì)于老年癲癇發(fā)病過(guò)程中TNF-α、IL-2與miR-21的表達(dá)分析，一方面能深入揭示炎癥反應(yīng)對(duì)于老年癲癇患者病情的影響，另一方面還能為臨床上老年癲癇患者病情的評(píng)估提供血清量化的參考指標(biāo)。

TNF-α是腫瘤壞死因子家族成員，其能通過(guò)直接誘導(dǎo)炎癥性損害，加劇炎癥性因子對(duì)于神經(jīng)元鞘膜組織的損害。IL-2不僅能參與炎癥反應(yīng)過(guò)程，影響炎癥因子的激活，同時(shí)還能夠加劇中性粒細(xì)胞或者單核細(xì)胞的激活，影響到神經(jīng)元膜電荷的穩(wěn)定性。miR-21 是微小RNA 相關(guān)家族成員，其對(duì)于下游氧化應(yīng)激損傷相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，能影響多種病理生理機(jī)制的激活，影響癲癇病情的進(jìn)展。有部分研究認(rèn)為T(mén)NF-α的表達(dá)濃度的上升能顯著促進(jìn)癲癇病情的進(jìn)展[9-11]，但對(duì)于IL-2 與miR-21的分析研究較少。

本研究發(fā)現(xiàn)在老年癲癇患者中，血清TNF-α、IL-2與miR-21的表達(dá)濃度明顯高于正常老年人群，可能是因?yàn)槔夏臧d癇患者體內(nèi)存在明顯的炎癥反應(yīng)。miR-21的表達(dá)上升，主要由于癲癇患者神經(jīng)元細(xì)胞脫髓鞘導(dǎo)致的局部氧化應(yīng)激反應(yīng)的激活，促進(jìn)了膜內(nèi)外病理性信號(hào)通路的激活，加劇了微小RNA的異常激活和合成。有其他相似的研究發(fā)現(xiàn)，在癲癇患者中，miR-21的表達(dá)濃度的上升可隨著癲癇患者腦電活動(dòng)的異常而顯著上升，特別是合并癲癇大發(fā)作的患者，miR-21 的表達(dá)濃度的改變?cè)斤@著[12]。腦電圖是評(píng)估癲癇患者腦電活動(dòng)的指標(biāo)，在腦電圖異常的患者中，TNF-α、IL-2與miR-21的表達(dá)濃度明顯上升，高于腦電圖正常的患者，表明TNF-α、IL-2 與miR-21 的高表達(dá)能夠影響到腦電患者的神經(jīng)元電生理活動(dòng)。這主要是由于TNF-α、IL-2 與miR-21的高表達(dá)，能影響局部神經(jīng)元細(xì)胞膜內(nèi)外側(cè)離子泵的活性，導(dǎo)致鈉離子和鉀離子內(nèi)流的增加，促進(jìn)了神經(jīng)元細(xì)胞膜的異常電活動(dòng)[13-15]。顳葉和非顳葉癲癇患者發(fā)作后1 h 血清TNF-α、IL-2及miR-21水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明TNF-α、IL-2與miR-21 并不會(huì)影響到癲癇的發(fā)病部位。相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α、IL-2 與miR-21 相互之間存在一定的正相關(guān)關(guān)系，提示TNF-α、IL-2 與miR-21 在影響老年癲癇患者病情進(jìn)展過(guò)程中可能發(fā)揮相互協(xié)同刺激的作用。寄望后續(xù)的研究能夠深入研究TNF-α、IL-2與miR-21與癲癇患者治療預(yù)后的關(guān)系。