云黃連根化學(xué)成分的研究

余成華 楊秋雄 朱春艷徐俊駒段熊仙趙從琪李光達梁艷麗*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)西南中藥材種質(zhì)創(chuàng)新與利用國家地方聯(lián)合工程研究中心，云南 昆明650201； 2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南省藥用植物生物學(xué)重點實驗室，云南 昆明650201； 3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南 昆明650201）

云黃連Coptis teetaWall.又稱云連，屬毛茛科黃連屬多年生的草本植物，主要分布于云南西北部的高黎貢山脈［1］，苛刻的生長環(huán)境使得云黃連分布有限，而過度的采挖導(dǎo)致云黃連野生資源極度匱乏，栽培范圍也十分有限。在2015年版《中國藥典》 中將入藥的黃連

歸分為3 類，分別為毛茛科植物云黃連Coptis teetaWall.、中國黃連Coptis chinensis Franch 和三角葉黃連Coptis deltoideaC.Y.Cheng et Hsiao 的干燥根莖。黃連味苦、性寒、無毒。有清熱燥濕、瀉火解毒、清胃、舒肝、降壓、解毒等作用［2］。黃連中的主要藥效成分為黃連堿、小檗堿、藥根堿、巴馬汀、表小檗堿、秋葵堿等［3］。前人的研究表明，3個黃連品種中都含有這6種成分，在相同的生長年份［4?6］，總生物堿中，以中國黃連的生物堿含量最高，但小檗堿作為黃連總生物堿中最有效的成分［7］，以云黃連中小檗堿的成分含量最高。為了進一步開發(fā)利用云黃連的生物資源，保護黃連的生物多樣性，闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用多種色譜分離方法結(jié)合現(xiàn)代波譜分析技術(shù)，通過對云黃連根莖進行提取，對乙酸乙酯萃取部分分離鑒定了14個化合物，其中化合物1～4為首次從該植物中分離得到。

1 材料

中藥高速粉碎機（浙江永歷制藥機械有限公司）；循環(huán)水真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；電子萬用爐（北京市永光明電子儀器有限責(zé)任公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化儀器有限公司）；APIQstarPulsaLC／TOF 質(zhì)譜儀、AVANCE Ⅲ?600 MHz、AVANCEⅢ?800 MHz 超導(dǎo)核磁共振儀（德國Bruker 公司）；柱層析用RP?18（德國Merck 公司）；SephadexLH?20（瑞 典Amersham Pharmacia Biotech 公司）；柱層析硅膠（200～300 目）、GF254薄層層析硅膠、硅膠G 薄層板（青島海洋化工廠）；梅特勒·托利多NewClassicMS 半微量型電子天平（瑞士梅特勒·托利多公司）。

植物樣品于2017年采自新云南省怒江州福貢縣，經(jīng)云南農(nóng)業(yè)大學(xué)梁艷麗教授鑒定為毛茛科黃連屬云黃連Coptis teetaWall.的干燥塊根。

2 提取與分離

云黃連的干燥莖根12 kg 經(jīng)粉碎機粉碎為顆粒狀，直徑為（0.5～1 cm），將粉碎后的云黃連顆粒裝入滲漉桶中用甲醇浸泡（浸泡時間10 h）；從滲漉桶中放出濾液，反復(fù)浸泡（浸液的甲醇量為原藥材的8～10 倍體積）至濾液無色，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收甲醇至無醇味，共得浸膏4 080 g。將浸膏溶于5%HCl 溶液中，攪拌均勻后靜置，加入乙酸乙酯萃取，減壓蒸餾回收，得到非生物堿部分3 650 g；再將回收后浸膏用5% NaOH 溶液調(diào)至pH 9，后加入乙酸乙酯萃取，攪拌均勻后靜置分層，取上清液回收至無乙酸乙酯味，獲得生物堿部分共830 g。分別將生物堿和非生物堿用硅膠拌樣后放干裝入硅膠柱中，利用柱層析來進行分離。

初次分離生物堿部分氯仿?甲醇（100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、9∶1、8∶1、5∶1）為有機溶劑進行洗脫得到9個部分HL1?HL9。HL2 經(jīng)正向硅膠柱氯仿?甲醇（20∶1、15∶1、10∶1、9∶1、8∶2、7∶3、1∶1）梯度洗脫，得到8個部分（HL2.1～HL2.8），HL2.2 再經(jīng)正向硅膠柱氯仿?乙酸乙酯（10∶1、9∶1、8∶2、6∶4）梯度洗脫，得到4個部分（HL2.2.1～HL2.2.4），將HL2.2.3經(jīng)薄層硅膠板氯仿?乙酸乙酯（8∶2、7∶3）洗脫，得到 2個部分 HL2.2.3.1 和 HL2.2.3.2，將HL2.2.3.2 經(jīng)薄層硅膠板氯仿?乙酸乙酯（7∶3）洗脫2 次最后得化合物5（15.6 mg）。HL3 經(jīng)正向硅膠柱氯仿?甲醇（20∶1、15∶1、10∶1、9∶1、8∶2、7∶3、1∶1）梯度洗脫，得到4個部分（HL3.1～HL3.4）；HL3.3 經(jīng)過氯仿?乙酸乙酯（20∶1、15∶1、10∶1、9.5∶0.5、9∶1、8∶2、7∶ 3）梯度洗脫 得化合物14（321 mg）、12（506 mg）、13（102 mg）、11（11.2 mg）、10（46 mg）、9（13.6 mg）、8（9.2 mg）。

非生物堿部分用石油醚?丙酮（100∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、9∶1、8∶2、7∶3）有機溶劑梯度洗脫得到10個部分（FY1～FY10），F(xiàn)Y5經(jīng)柱層析色譜石油醚?丙酮（20∶1～7∶3）梯度洗脫得到FY5.1～5.5，F(xiàn)Y5.1 再經(jīng)薄層色譜石油醚?丙酮（9∶1）2 次洗脫純化得化合物1（21 mg）、2（10.2 mg）。FY5.4 經(jīng)薄層色譜板石油醚?乙酸乙酯（9∶1）2 次洗脫純化得化合物3（9.5 mg）。FY6 經(jīng)柱層析色譜石油醚?乙酸乙酯（20∶1～7∶3）梯度洗脫得到FY6.1～FY6.6，F(xiàn)Y6.2 經(jīng)半制備HPLC 得化合物4（1.2 mg）。FY7 經(jīng)柱層析色譜氯仿?乙酸乙酯（20∶1～6∶4）梯度洗脫得FY7.1～FY7.5，F(xiàn)Y7.2 用半制備 HPLC 得化合物7（14.5 mg）。FY7.5 柱 層析色譜氯仿?乙酸乙酯（10∶1～6∶4）洗脫得到FY7.5.2，F(xiàn)Y7.5.2 經(jīng)薄層色譜氯仿?乙酸乙酯（10∶1）洗脫純化2 次得化合物6（4.5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色粉末（丙酮），HR?ESI?MSm／z：183.150 5［M＋H］＋，分子式C9H10O4。1H?NMR（CD3OD，600 MHz）δ：6.31（1H，s，H?3）6.13（1H，s，H?3），3.88（3H，s，?OCH3），2.43（3H，s，?CH3）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：105.4（s，C?1），164.5（s，C?2），101.8（d，C?3），166.2（s，C?4），112.7（d，C?5），144.4（s，C?6），173.4（s，C?7），52.0（q，?OCH3），24.2（q，?CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］對照基本一致，故鑒定為methyl orsellinate。

化合物2：白色結(jié)晶（丙酮），HR?ESI?MSm／z：193.113 2［M＋H］＋，分子式C10H8O4。1H?NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.77（1H，d，J＝9.2，H?4），6.86（1H，s，H?5），6.52（1H，s，H?8），5.94（1H，d，J＝9.2，H?3），3.82（3H，s，6?OCH3）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：165.7（C?2），107.2（C?3），146.8（s，C?4），108.1（s，C?5），150.4（C?6?OCH3），163.2（C?7），104.7（s，C?8），109（C?4a），153.7（C?8a），56.2（?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］對照基本一 致，故鑒定為7?hydroxy?6?methoxy?2H?1?benzopyran?2?one。

化合物3：白色針晶（甲醇），HR?ESI?MSm／z：413.231 1［M＋H］＋，分子式C29H48O。1H?NMR（CD3OD，600 MHz）δ：5.70（1H，s，H?4），1.21（3H，s，18?CH3），0.94（3H，d，J＝6.4 Hz，26?CH3），0.89（3H，t，29?CH3），0.83（3H，d，J＝8.2 Hz，29?CH3），0.81（3H，d，21?CH3），0.71（3H，s，19?CH3）；13C?NMR（150 MHz，CD3OD）δ：37.4（C?1），35.0（C?2），202.4（C?3），124.1（C?4），175.4（C?5），29.3（C?6），33.4（C?7），36.9（C?8），55.4（C?9），34.0（C?10），22.1（C?11），41.0（C?12），43.6（C?13），57.3（C?14），25.2（C?15），28.1（C?16），57.4（C?17），12.4（C?18），17.7（C?19），19，4（C?21），27.2（C?23），47.3（C?24），30.3（C?25），20.2（C?26），19.3（C?27），24.2（C?28），12.4（C?29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］對照基本一致，故鑒定為豆甾?4?烯?3?酮。

化合物4：淡黃色油狀物（丙酮），HR?ESI?MSm／z：209.112 1［M＋H］＋，分子式C11H12O。1H?NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.60（1H，d，J＝16 Hz，H?7），7.15（1H，d，J＝1.6 Hz，H?8），7.09（1H，t，H?1），7.04（1H，t，H?2），6.77（1H，d，J＝ 8 Hz，H?5），3.87（3H，s，?OCH3），3.75（3H，s，?CH3）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：127.0（C?1），112.4（C?2），149.7（C?3?OH），147.0（C?4），116.7（C?5），123.5（C?6），111.6（C?8），169.8（C?9），56.8（?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］對照基本一致，故鑒定為阿魏酸甲酯。

化合物5：白色結(jié)晶（甲醇），碘化鉍鉀反應(yīng)性，HR?ESI?MSm／z：340.051 1［M＋H］＋，分子式C19H17NO5。1H?NMR（CH3OD，600 MHz）δ：8.16（1H，d，J＝5.8 Hz，H?3），7.56（1H，s，H?8），7.52（1H，d，J＝5.8 Hz，H?4），7.17（1H，s，H?5），6.52（1H，d，J＝8.6 Hz，H?6），6.32（1H，d，J＝8.6 Hz，H?5），4.40（2H，s，H?9），3.79（3H，s，H?OCH3），3.74（3H，s，H?OCH3）；13C?NMR（CH3OD，150 MHz）δ：160.2（s，C?1），140.6（d，C?3），121.0（d，C?4），103.0（d，C?5），152.7（s，C?6），150.4（s，C?7），103.9（d，C?8），35.5（t，C?a），134.7（s，C?1′），149.2（s，C?2′），137.0（s，C?3′），153.1（s，C?4′），104.5（d，C?5′），120.3（d，C?6′），125.0（d，C?4a），120.4（s，C?8a），56.3（q，?OCH3），61.1（q，?OCH3），103.4（t，?O?C?O?）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］對照基本一致，故鑒定為berbithine。

化合物6：黃色結(jié)晶（氯仿），HR?ESI?MSm／z：299.150 3［M＋H］＋，分子 式C17H14O。1H?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：12.5（1H，s，5?OH），9.70（1H，s，7?OH），9.50（1H，s，3?OH），8.15（2H，d，J＝8.0 Hz，H?2），7.45～7.66（3H，m，H?3）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：145.5（C?2），136.8（C?3），176.0（C?4），155.3（C?5），106.4（C?6），159.5（C?7），103.2（C?8），151.5（C?9），101.6（C?10），131.0（C?1a），128.5（C?2a，6a），127.5（C?3a，5a），129.8（C?4a）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］對照基本一致，故鑒定為3，5，7?三羥基?6，8?二甲基黃酮。

化合物7：淺黃色油狀液體（丙酮），HR?ESI?MSm／z：155.122 0［M＋H］＋，分子式C8H10O3。1H?NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.45（1H，d，J＝7.6 Hz，H?5），7.30（1H，d，J＝2.0 Hz，H?2），6.82（1H，dd，J＝8.0 Hz，H?6），4.15（2H，t，J＝7.1 Hz，H?8），3.14（2H，t，J＝7.5 Hz，H?7）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：132.6（C?1），118.5（C?2），147.6（C?3），146.7（C?4），117.5（C?5），121.5（C?6），40.7（C?7），65.4（C?8）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］對照基本一致，故鑒定為3，4?二羥基苯乙醇。

化合物8：黃色粉末（甲醇），HR?ESI?MSm／z：352.131 4［M＋H］＋，分子式C20H17NO5。1H?NMR（CD3OD，150 MHz）譜中可見5個芳香氫質(zhì)子信號δ：7.44（1H，d，J＝8.82 Hz，H?4），7.21（1H，d，H?1），6.0（2H，t，O?CH2?O），4.29（2H，t，H?5），3.95（3H，d，J＝7.44 Hz，9?OCH3），3.87（3H，s，10?OCH3）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：104.7（C?1），147.3（C?2），148.4（C?3），107.9（C?4），28.6（C?5），39.4（C?6），160.2（C?8），151.4（C?9），149.5（C?10），118.9（C?11），122.3（C?12），101.2（C?13），135.6（C?14），101.3（C?15），119.4（C?4a），132.3（C?8a），130.0（C?12a），123.7（C?14a），56.8（C?9?OCH3），61.6（C?10?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］對照基本一致，故鑒定為8?oxyberberine。

化合物9：橙紅色針晶（甲醇），碘化鉍鉀反應(yīng)陽性，HR?ESI?MSm／z：339.320 3［M＋H］＋，分子式C20H20NO4。1H?NMR（CDCl3，600 MHz）δ：9.74（1H，s，H?8），8.76（1H，H?13），8.12（1H，d，H?12），8.04（1H，d，H?11），7.65（1H，s，H?4），6.85（1H，s，H?1），4.92（2H，t，H?6），4.20（3H，s，?OCH3），4.15（3H，s，?OCH3），4.05（3H，s，?OCH3），3.25（2H，m，H?5）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：107.8（C?1），150.3（C?2），149.5（C?3），110.3（C?4），25.2（C?5），54.8（C?6），144.5（C?8），148.9（C?9），147.5（C?10），122.6（C?11），125.8（C?12），119.3（C?13），119.0（C?1a），130.2（C?4a），120.8（C?8a），135.2（C?12a），140.9（C?13a），54.6（?OCH3），55.8（?OCH3），60.7（?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］對照基本一致，故鑒定為藥根堿。

化合物10：黃色針晶（甲醇），碘化鉍鉀反應(yīng)陽性，HR?ESI?MSm／z：369.42［M＋H］＋，分子式C21H22NO4。1H?NMR（CDCl3，600 MHz）δ：9.70（1H，s，H?8），8.85（1H，s，H?13），8.17（1H，d，H?12），8.07（1H，d，H?12），7.64（1H，s，H?4），7.04（1H，s，H?1），4.95（2H，t，H?6），4.25（3H，s，?OCH3），4.15（3H，s，?OCH3），3.95（3H，s，?OCH3），3.92（3H，s，?OCH3），3.20（2H，t，H?5）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：108.4（C?1），152.5（C?2），150.1（C?3），110.5（C?4），27.0（C?5），60.8（C?6），145.5（C?8）149.2（C?9），143.5（C?10），119.7（C?11），122.7（C?12），126.5（C?13），138.5（C?14），128.5（C?4a），119.4（C?8a），133.5（C?12a），122.3（C?14a），54.9（C?2?OCH3），55.4（C?3?OCH3），55.7（C?9?OCH3），55.9（C?10?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］對照基本一致，故鑒定為巴馬汀。

化合物11：黃色針晶（甲醇），碘化鉍鉀反應(yīng)陽性，HR?ESI?MSm／z：337.110 2［M＋H］＋，分子式C20H18NO4。1H?NMR（CDCl3，600 MHz）δ：9.75（1H，s，H?8），8.70（1H，sH?13），8.15（1H，d，H?12），8.04（1H，d，H?11），7.25（1H，s，H?4），6.70（1H，s，H?1），6.20（2H，s，O?CH2?O），4.90（2H，t，H?6），4.51（3H，s，?OCH3），4.11（3H，s，?OCH3），3.30（2H，m，H?5）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：104.5（C?1），147.3（C?2），149.7（C?3），107.5（C?4），25.7C?5），54.7（C?6），144.7（C?8），143.5（C?9），149.2（C?10），122.5（C?11），125.5（C?12），119.6（C?13），119.45（C?1a），129.5（C?4a），120.8（C?8a），132.5（C?12a），136.7（C?13a），55.9（?OCH3），60.7（?OCH3），101.4（O?CH2?O）。以上數(shù)據(jù)與文獻［18］對照基本一致，故鑒定為表小檗堿。

化合物12：黃色微晶體（甲醇），HR?ESI?MSm／z：353.141 3［M＋H］＋，分子式C21H22NO4。1H?NMR（CD3OD，600 MHz）δ：9.76（1H，s，H?8），8.70（1H，s，H?13），8.12（1H，d，J＝9.1 Hz，H?12），7.66（1H，s，H?1），6.96（1H，sH?4），6.10（2H，s，?OCH2O?），4.92（2H，t，J＝6.2 Hz，H?6）4.20（3H，s，10?OCH3），4.10（3H，s，9?OCH3）；3.24（2H，t，J＝6.2 Hz，H?5）；13C?NMR（CD3OD，150 MHz）δ：106.6（C?1），150.0（C?2），152.0（C?3），109.4（C?4），28.2（C?5），7.6（C?6），146.4（C?8），146.4（C?9），152.2（C?10），128.1（C?11），124.5（C?12），121.5（C?13），131.9（C?4a），123.4（C?8a），135.2（C?12a），139.7（C?13a），121.9（C?13b），62.5（C?9?OCH3），57.6（C?10?OCH3），103.7（?OCH2O?）。以上數(shù)據(jù)與文獻［19］對照基本一致，故鑒定為小檗堿。

化合物13：黃色結(jié)晶（甲醇），HR?ESI?MSm／z：337.281 4［M＋H］＋，分子式C19H14NO5。1H?NMR（CH3OD，600 MHz）δ：8.50（1H，d，J＝5.6 Hz，H?6），7.65（1H，d，J＝5.6 Hz，H?5），7.35（1H，s，H?1），7.20（1H，d，J＝9.0 Hz，H?12），7.09（1H，s，H?4），6.42（1H，d，J＝9.0 Hz，H?11），6.11（2H，s，H?OCH2O），3.90（3H，s，H?9?OCH3），3.87（3H，s，H?10?OCH3）；13C?NMR（CH3OD，150 MHz）δ：102.2（d，C?1），149.0（s，C?2），151.6（s，C?3），103.1（d，C?4），121.9（d，C?5），139.9（d，C?6），158.8（s，C?8），136.9（s，C?9），159.2（s，C?10），103.8（d，C?11），130.1（d，C?12），197.9（C?13），153.2（s，C?14），136.0（s，C?4a），114.8（s，C?12a），123.3（s，C?14a），61.1（q，C?9?OCH3），55.8（q，C?10?OCH3），102.0（t，C?OCH2O）。以上數(shù)據(jù)與文獻［20］對照基本一致，故鑒定為coptisonine。

化合物14：黃色結(jié)晶（甲醇），HR?ESI?MSm／z：321.211 0［M＋H］＋，分子式C19H14NO4。1H?NMR（CH3OD，600 MHz）δ：9.69（1H，s，H?8），8.72（1H，s，H?13），7.84（1H，d，J＝7.8 Hz，H?11），7.78（1H，d，J＝7.8 Hz，H?12），7.62（1H，s，H?1），6.84（1H，s，H?4），6.45（2H，s，?OCH2O?），6.22（2H，s，?OCH2O?），4.87（2H，m，H?6），3.23（2H，m，H?5）；13C?NMR（CH3OD，150 MHz）δ：105.2（d，C?1），148.0（s，C?2），149.1（s，C?3），107.6（d，C?4），27.5（t，C?5），55.8（t，C?6），144.8（d，C?8），143.9（s，C?9），151.4（s，C?10），120.1（d，C?11），122.6（d，C?12），120.7（d，C?13），131.5（s，C?4a），112.4（s，C?8a），132.4（s，C?12a），137.6（s，C?13a），121.8（s，C?13b），102.1（t，C?OCH2O），104.5（t，C?OCH2O）。以上數(shù)據(jù)與文獻［21］對照基本一致，故鑒定為黃連堿。

4 討論

本實驗通過對云黃連根莖進行化學(xué)成分的分離鑒定，共得到14個化合物。其中生物堿類8個、酯類3個，還有甾醇、黃酮和醇類各一個?；衔?、12屬于異喹啉生物堿［22］，在抗炎癥、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗腫瘤等方面起重要作用?；衔?又稱羥基酪醇，屬于多酚類，具有用于心血管藥物的合成，有防癌抗癌作用，也可作為抗氧劑［23］?；衔?又名為東莨菪內(nèi)酯，屬于香豆素類，其具有抗神經(jīng)退行性疾病、降血糖、降血壓、抗腫瘤、抗真菌、消炎等藥理作用［24］?；衔?屬于甾醇類，可用于生產(chǎn)農(nóng)業(yè)上的害蟲殺蟲劑。本研究豐富了云黃連化學(xué)成分的種類，以期為云黃連的藥用價值的開發(fā)提供參考。