外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系探討

趙國(guó)志

摘要：目的：探討外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系。方法：選擇2019年1月至2020年12月南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院收治的60例原發(fā)性乳腺癌患者作為研究對(duì)象，統(tǒng)計(jì)患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果，并收集患者術(shù)后病理組織學(xué)檢測(cè)信息，統(tǒng)計(jì)影響患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的臨床病理因素及免疫組織學(xué)相關(guān)因素。結(jié)果：60例乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)顯示，陽(yáng)性32例（53.33%），陰性28例（46.67%）。乳腺癌臨床分期Ⅳ期者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（80.00%）最高，顯著高于Ⅰ～Ⅱ期（41.18%）和Ⅲ期者（62.50%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。乳腺癌M分期M1者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（63.64%）最高，顯著高于M0者（47.37%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（82.61%）顯著高于未轉(zhuǎn)移者（35.14%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。經(jīng)非條件Logistic回歸分析顯示，影響外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的乳腺癌臨床病理因素為臨床分期、M分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P<0.05）。ER狀態(tài)、RR狀態(tài)、CerbB-2狀態(tài)不是影響乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的免疫組化因素（P>0.05）。結(jié)論：外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平與患者臨床分期、M分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理狀態(tài)存在一定相關(guān)性，陽(yáng)性者存在一定臨床病理特征，可為乳腺癌診療提供一定的參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：乳腺癌;外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞;臨床病理特征;臨床分期;免疫組化

乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，女性發(fā)病率較高，是威脅女性健康和生活質(zhì)量的重要危險(xiǎn)因素，臨床防控形勢(shì)嚴(yán)峻。近年來(lái)，乳腺癌的臨床研究逐漸深入，但是尚未完全清楚其病因及病機(jī)，需積極提升其診斷水平，尤其應(yīng)提高其早期診斷率，以改善患者預(yù)后[1～2]。外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞是指進(jìn)入人體外周血的腫瘤細(xì)胞，可發(fā)生于腫瘤的各階段及時(shí)期，是導(dǎo)致惡性腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的重要原因，因而外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞是乳腺癌生存期的獨(dú)立預(yù)后因素，積極監(jiān)測(cè)其指標(biāo)水平，有助于合理評(píng)估患者病情，但是其與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系尚有待明確[3]。本研究選擇60例原發(fā)性乳腺癌患者作為研究對(duì)象，分析了影響患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年1月至2020年12月南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院行手術(shù)治療及術(shù)后病理組織學(xué)檢查的60例原發(fā)性乳腺癌患者作為研究對(duì)象，均為女性，年齡29～78歲，平均（53.46±24.35）歲。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)乳腺超聲、乳腺鉬靶X線攝影及術(shù)后病理學(xué)檢查確診為原發(fā)性乳腺癌;預(yù)計(jì)生存期>3個(gè)月;無(wú)手術(shù)禁忌證;臨床資料完整;患者和家屬均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前接受放化療治療者;重要臟器功能不全者;合并內(nèi)分泌疾病、自身免疫性疾病者;基礎(chǔ)疾病控制不佳者;妊娠及哺乳期婦女。

1.3 研究方法

抽取患者空腹靜脈血5 ml（ACD抗凝管）進(jìn)行陰性富集法檢測(cè)（白細(xì)胞去除試劑盒購(gòu)于萊爾生物醫(yī)藥科技），采用采血管混勻后，常溫離心8 min，棄上清液，倒入50 ml離心管A中，經(jīng)1×hCTC Buffer洗滌2次，轉(zhuǎn)入A管，實(shí)施白細(xì)胞疊加至分離介質(zhì)，再次洗滌（同上），注入含有hCTC SePae-anon Matrix的B管，離心后取上清液，移至離心管C中，采用磁珠分離液體，磁珠混懸液疊加至分離介質(zhì)上，再次離心，沉淀后液體，待用。經(jīng)免疫熒光原位雜交技術(shù)，處理陰性富集處理的液體，采用磷酸鹽緩沖液2號(hào)固定樣品，隨后置入預(yù)熱的染色缸里，將標(biāo)本置于染色缸中并脫水處理，樣品區(qū)加入10 μl閃探針，置于雜交儀（美國(guó)賽默飛世爾科技），變性、雜交處理后，使用白細(xì)胞表面抗原標(biāo)記的CD45-Alexa594進(jìn)行免疫熒光染色。

1.4 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果，并收集患者術(shù)后病理組織學(xué)檢查信息，統(tǒng)計(jì)影響患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的臨床病理因素及免疫組織學(xué)相關(guān)因素。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)，多因素采用非條件Logistic回歸分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果

60例乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)顯示，陽(yáng)性32例（53.33%），陰性28例（46.67%）。

2.2 外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與乳腺癌臨床病理特征的單因素分析

乳腺癌臨床分期Ⅳ期者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（80.00%）最高，顯著高于Ⅰ～Ⅱ期（41.18%）和Ⅲ期者（62.50%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。乳腺癌M分期M1者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（63.64%）最高，顯著高于M0者（47.37%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（82.61%）顯著高于未轉(zhuǎn)移者（35.14%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與乳腺癌臨床病理特征的Logistic回歸分析

以外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性為因變量，單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的3項(xiàng)因素為自變量，經(jīng)非條件Logistic回歸分析顯示，影響外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的乳腺癌臨床病理因素為臨床分期、M分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.4 外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的乳腺癌免疫組化因素分析

ER狀態(tài)、RR狀態(tài)、CerbB-2狀態(tài)不是影響乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的免疫組化因素（P>0.05）。見(jiàn)表3。

3討論

乳腺癌是威脅女性健康的高發(fā)惡性腫瘤，近年來(lái)這類惡性腫瘤的臨床診療技術(shù)發(fā)展迅速，患者生存期得到了有效提升，但是仍存在較高的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，需進(jìn)一步提升其診療水平。手術(shù)病理組織學(xué)檢查是確診乳腺癌的最終依據(jù)，但是存在較大局限性，實(shí)施率受限;組織活檢也是乳腺癌診斷的主要依據(jù)，但是作為一類有創(chuàng)性檢查，仍存在較多限制因素[4]。近年來(lái)，影像學(xué)檢查技術(shù)發(fā)展迅速，乳腺超聲、鉬靶X線攝影檢查、磁共振檢查技術(shù)得到了明顯優(yōu)化，成為乳腺癌篩查的重要手段，但是存在一定誤診和漏診風(fēng)險(xiǎn)，診斷準(zhǔn)確率有待提升[5]。

乳腺癌發(fā)生早期，腫瘤細(xì)胞即可進(jìn)入外周血并發(fā)生全身擴(kuò)散，而乳腺癌微轉(zhuǎn)移、預(yù)后評(píng)估相關(guān)臨床研究發(fā)現(xiàn)，外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞是導(dǎo)致患者全身擴(kuò)散和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的主要原因，因而檢查患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平對(duì)患者病情和預(yù)后評(píng)估具有重要意義[6]。但是，其變化情況與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系尚不明確，亟待分析探明，從而為乳腺癌診療提供更為豐富的參考資料[7～8]。乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究顯示，外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平升高是乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要前提，乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率高達(dá)60%～90%[9]。本研究經(jīng)非條件Logistic回歸分析顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的乳腺癌臨床病理因素，提示外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平陽(yáng)性患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高，不利于患者預(yù)后改善。分析其主要原因?yàn)椋和庵苎h(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性患者，機(jī)體中大量腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位或者轉(zhuǎn)移灶脫落進(jìn)入外周循環(huán)系統(tǒng)，在與機(jī)體淋巴組織微環(huán)境的雙向動(dòng)態(tài)作用過(guò)程中，容易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，同時(shí)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移后，腫瘤細(xì)胞易脫落進(jìn)入外周循環(huán)系統(tǒng)，兩者相互促進(jìn)，不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)較高。此外，本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，非條件Logistic回歸分析也顯示，臨床分期、M分期也是影響乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的臨床病理影響因素。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，臨床分期Ⅳ者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（80.00%）最高，且乳腺癌M分期M1者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率（63.64%）最高，可知隨臨床分期升高，患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率逐漸升高，且M分期M1者，外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性相對(duì)較高。分析其原因主要為：臨床分期Ⅳ者和M分期M1者腫瘤增殖活性較強(qiáng)，侵襲能力也相對(duì)較強(qiáng)，較多腫瘤細(xì)胞進(jìn)入外周循環(huán)，導(dǎo)致外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平，提示不同臨床分期和M分期患者存在外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平的差異性。而血標(biāo)本的獲得相對(duì)簡(jiǎn)單，可通過(guò)外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞監(jiān)測(cè)進(jìn)行早期篩查與評(píng)估，及時(shí)采取抗腫瘤治療措施。單因素分析顯示，乳腺癌患者臨床病理T分期、N分期、病理類型、腫瘤直徑、分子分型和免疫組化因素（ER狀態(tài)、RR狀態(tài)、CerbB-2狀態(tài)）并非影響外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性的臨床病理影響因素，提示上述臨床病理因素、免疫組化因素和分子分型與外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性并無(wú)明顯相關(guān)性。

綜上所述，外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平與患者臨床分期、M分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理狀態(tài)存在一定相關(guān)性，陽(yáng)性者存在一定臨床病理特征，可為乳腺癌診療提供一定的參考依據(jù)。

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