豬偽狂犬病疫苗及其免疫

近年來，豬偽狂犬病病毒在國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)的陽(yáng)性感染率居高不下，嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。而養(yǎng)殖場(chǎng)戶病急亂投醫(yī)，隨意選擇疫苗，不按程序免疫，首免日齡不正確，甚至多種疫苗輪番使用等，免疫效果往往事與愿違。筆者通過多年的免疫實(shí)踐與調(diào)查研究，認(rèn)為只要抓住偽狂犬病毒易感的關(guān)鍵時(shí)間節(jié)點(diǎn)，避開母源抗體干擾，選用高效安全疫苗，并科學(xué)掌握免疫的時(shí)機(jī)和方法，就能達(dá)到比較理想的效果。現(xiàn)將具體做法介紹于下，與同行探討。

1 常用的疫苗種類

豬偽狂犬病毒屬于甲型皰疹雙鏈DNA病毒，雖然只有一個(gè)血清型，但毒力有強(qiáng)弱之分，毒株的致病性也有高有低。近年來，我國(guó)科研團(tuán)隊(duì)已經(jīng)分離到多個(gè)不同的毒株，證明豬偽狂犬病毒毒株已經(jīng)發(fā)生變異，且不同毒株感染同一動(dòng)物時(shí)，病毒可以重組，產(chǎn)生更強(qiáng)毒力的毒株，引起新的疫情暴發(fā)。因此，對(duì)合理選擇疫苗預(yù)防控制該病提出了較高的要求。目前，有多種疫苗可用于預(yù)防控制與凈化豬偽狂犬病，現(xiàn)簡(jiǎn)要介紹于下。

1.1滅活疫苗 滅活疫苗安全性較高，不易引起散毒與潛伏感染，在世界各地區(qū)都有應(yīng)用。由于其難以誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)(CTL)，因而只會(huì)產(chǎn)生體液免疫，甚至不能引起細(xì)胞免疫的缺陷，同時(shí)，接種后產(chǎn)生的抗體滴度可隨著時(shí)間的推移而逐漸下降，因此，需要重復(fù)接種，且免疫劑量較大，成本費(fèi)用較高，有時(shí)還易發(fā)生過敏反應(yīng)。

1.2自然缺失弱毒活疫苗 常規(guī)意義上的弱毒活疫苗，是將分離到的野毒株經(jīng)非豬源細(xì)胞反復(fù)傳代，加入突變劑培養(yǎng)而獲得的疫苗。國(guó)際上主流毒株都是Bartha和Buk株。目前，國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)使用較多的常規(guī)基因缺失疫苗有Bartha株，SA215株，HB-98株和BUK株等。其中，廣泛使用的是gI/gE雙基因缺失PR弱毒凍干活疫苗(Bartha-k61。也叫k61)。

一般而言，自然基因缺失弱毒活疫苗，仍有良好的免疫原性，且安全性高，價(jià)格又低廉，一直在防控中發(fā)揮著重要作用。但缺點(diǎn)是主要的毒力基因TK基因沒有缺失，有可能導(dǎo)致返強(qiáng)而致該病重新流行，同時(shí)還存在造成潛伏感染或向未免疫生豬散毒的可能性。

1.3基因工程疫苗 近年來，隨著對(duì)豬偽狂犬病病毒基因組結(jié)構(gòu)與免疫原性研究的不斷深入，目前包括基因工程缺失弱毒活疫苗，核酸疫苗，亞單位疫苗，重組病毒疫苗等一系列豬偽狂犬病基因工程疫苗被開發(fā)出來，并應(yīng)用于免疫實(shí)踐，獲得良好效果。

1.3.1基因工程缺失弱毒活疫苗 通常將缺失PRV一個(gè)主要毒力基因(如TK)獲得的疫苗稱為第一代基因缺失疫苗，該類疫苗具有較高的安全性，30～35日齡仔豬接種后能產(chǎn)生中和抗體，并在遭受攻毒后可表現(xiàn)再次免疫應(yīng)答，給豬群提供有效的保護(hù)。

第二代基因缺失疫苗，是指在TK基因缺失的基礎(chǔ)上又缺失相應(yīng)的糖蛋白基因而研制成功的雙缺失和多缺失疫苗株。試驗(yàn)表明，其顯著特點(diǎn)是可以通過血清學(xué)方法將免疫接種豬與自然感染野毒的豬相區(qū)別，有利于精準(zhǔn)防控，為偽狂犬病的根除提供有力支撐。

基因缺失區(qū)域明確，返祖可能性極小，是基因工程缺失弱毒活疫苗的顯著優(yōu)點(diǎn)。這類疫苗株具有很強(qiáng)的免疫原性和良好的遺傳穩(wěn)定性，實(shí)施免疫后能夠獲得較強(qiáng)的保護(hù)力，且安全性較高。但該類疫苗對(duì)儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件要求也非常嚴(yán)苛，現(xiàn)實(shí)情況下一般豬場(chǎng)難以保證，進(jìn)而可能影響到實(shí)際的免疫效果。

1.3.2核酸疫苗 核酸疫苗又稱為DNA疫苗或基因疫苗，實(shí)施免疫后能夠激發(fā)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)外源蛋白質(zhì)的特異性的免疫應(yīng)答。其主要優(yōu)點(diǎn)是能夠同時(shí)激活細(xì)胞免疫和體液免疫，避免潛伏感染，不受母源抗體干擾，安全性高，免疫期長(zhǎng)，缺點(diǎn)是雖然可以產(chǎn)生較高的抗體水平，但對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)力不太理想。

1.3.3亞單位疫苗 亞單位疫苗是通過基因工程技術(shù)，將PRV的保護(hù)性抗原基因進(jìn)行克隆并在原核或真核系統(tǒng)中高效表達(dá)所獲得的產(chǎn)物制成的疫苗。由于其具有抗原遞呈與免疫增強(qiáng)的雙重作用，不含核酸遺傳物質(zhì)，實(shí)施免疫接種后不會(huì)產(chǎn)生潛伏感染或引起持續(xù)性感染，能夠?qū)⒚庖邞?yīng)答與野毒感染相區(qū)分開來，因而有利于豬偽狂犬病的控制和消滅。但由于其免疫原性與弱毒疫苗和滅活疫苗相比較差，生產(chǎn)成本相對(duì)又高，應(yīng)用受到一定的限制。

1.3.4重組活載體疫苗 由于偽狂犬病的病毒宿主范圍和基因組都比較大，可在不影響PRV毒株增殖的同時(shí)插入一個(gè)或多個(gè)外源基因而重組獲得活載體疫苗。目前，主要有以腺病毒為載體的重組疫苗、以豬痘病毒為載體的重組疫苗及直接以豬偽狂犬病毒為載體的重組疫苗等。

重組疫苗優(yōu)點(diǎn)是載體病毒較穩(wěn)定，免疫原性持久，能夠誘發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫，避免弱毒活疫苗和滅活疫苗免疫的缺陷，接種方便安全，免疫譜相對(duì)較廣。比如，接種以豬偽狂犬病毒為載體的重組雙價(jià)疫苗，能使豬同時(shí)獲得對(duì)PRV和CSFV兩種強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)，因此，重組活載體疫苗不僅對(duì)偽狂犬病有很好的防控效果，而且對(duì)其他病毒類病的免疫防控也有良好的應(yīng)用前景。

2 疫苗的動(dòng)態(tài)選擇

選擇疫苗通常要考慮毒株，效價(jià)，佐劑等因素，通過評(píng)估確定其安全性與有效性。研究表明，滅活疫苗，弱毒活疫苗以及基因缺失疫苗都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，在生產(chǎn)中可根據(jù)具體情況動(dòng)態(tài)選用。當(dāng)然，選擇疫苗時(shí)，能夠通過疫苗免疫血清與流行毒株的交叉中和實(shí)驗(yàn)，依據(jù)中和效價(jià)的高低來選擇更為科學(xué)合理。

2.1重視毒株的匹配 近年來，在實(shí)施豬偽狂犬病預(yù)防控制與凈化根除中，使用基因缺失疫苗已成為主流趨勢(shì)，現(xiàn)有疫苗Bartha株，HB-98株， SA215株和BUK株仍然發(fā)揮著主導(dǎo)作用，其中大部分國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口疫苗采用的均是Bartha毒株(代表產(chǎn)品是Bartha-K61株)。用其免疫能與自然感染野毒相區(qū)分，免疫原性好，免疫后能產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫力，對(duì)預(yù)防豬偽狂犬病經(jīng)典株和變異株均有效，且安全性高、無毒力返強(qiáng)等風(fēng)險(xiǎn)，目前不少國(guó)家都在推廣應(yīng)用，免疫效果也比較理想。

一般情況下，對(duì)于正在暴發(fā)流行的豬場(chǎng)或野毒陽(yáng)性豬場(chǎng)或免疫效果不好，抗體水平顯著下降的豬場(chǎng)，應(yīng)選用與其流行毒株相一致的弱毒活疫苗，對(duì)全豬群進(jìn)行緊急預(yù)防接種，以期迅速而全面地建立免疫保護(hù)機(jī)制，在短時(shí)間內(nèi)控制疫病傳播；而在疫情得到控制并逐漸穩(wěn)定后，為獲得穩(wěn)定而較持久的抗體水平，同時(shí)盡量避免使用弱毒活疫苗造成散毒感染，應(yīng)以選用滅活疫苗為主。比如，對(duì)豬偽狂犬病野毒陰性豬場(chǎng)實(shí)施常規(guī)免疫時(shí)，建議使用基因缺失滅活苗。

2.2充分考慮疫苗的效價(jià)和佐劑 效價(jià)即抗原含量。我們知道，免疫主要是通過特異性的抗原來產(chǎn)生特異性的免疫力來預(yù)防特定疾病的，因此疫苗每頭份中抗原含量的多少，決定著疫苗的效價(jià)水平。目前，豬偽狂犬病疫苗的抗原含量單位用CCID50或TCID50(即半數(shù)細(xì)胞感染量)來表示，由于廠家不同，所生產(chǎn)疫苗的抗原含量有所差異，選購(gòu)疫苗時(shí)不能僅看價(jià)格高低，而要參看抗原含量的高低，選擇抗原含量高的產(chǎn)品。

疫苗的佐劑有增強(qiáng)型與普通型之分，增強(qiáng)型的以油佐劑為多，水佐劑則有普通型與增強(qiáng)型兩種。這些佐劑性能特點(diǎn)各異，不能籠統(tǒng)的分出優(yōu)劣。

一般來說，油佐劑疫苗抗體產(chǎn)生較慢，但能獲得穩(wěn)定而較持久的抗體水平，缺點(diǎn)是應(yīng)激相對(duì)較大，水性佐劑疫苗，抗體產(chǎn)生快，高峰期高，應(yīng)激較小，但抗體維持時(shí)間較短，容易出現(xiàn)波動(dòng)。因此，選擇水佐劑或油佐劑型疫苗，主要看免疫的對(duì)象和目的。如果主要為了通過母源抗體來專門保護(hù)新產(chǎn)仔豬，給經(jīng)產(chǎn)母豬接種時(shí)應(yīng)選用水佐劑疫苗，這樣可以利用水佐劑型疫苗快速產(chǎn)生高峰的特點(diǎn)，保證母豬在產(chǎn)仔時(shí)能夠獲得較高的母源抗體水平，如果想讓母豬整個(gè)生育期的抗體水平長(zhǎng)時(shí)間保持較高而平穩(wěn)的狀態(tài)，同時(shí)通過母源抗體既保護(hù)仔豬又保護(hù)母豬本身，則應(yīng)選用釋放較為平穩(wěn)緩慢，免疫抗體水平能夠維持較長(zhǎng)時(shí)間的油佐劑型疫苗。

近年來，為了降低油佐劑疫苗應(yīng)激大的缺陷，同時(shí)又維持油佐劑抗體持久，均勻度好的優(yōu)勢(shì)，隨著基因缺失疫苗的研發(fā)，已有新型的水包油佐劑偽狂犬疫苗上市，這類疫苗高效價(jià)配以合適佐劑，可以產(chǎn)生更高水平的免疫力，有效阻斷病毒循環(huán)傳播，有利于偽狂犬病的控制與凈化，各類豬群均可選用。

3 正確掌握免疫時(shí)機(jī)與免疫方法

防控實(shí)踐表明，豬偽狂犬病疫苗的首免時(shí)間選擇很重要，免疫次數(shù)也并非越多越好。因此，為了達(dá)到理想的防控效果，必須抓住偽狂犬病毒易感的關(guān)鍵時(shí)間節(jié)點(diǎn)，掌握正確的免疫程序和操作方法實(shí)施免疫接種。

3.1首免時(shí)間的選擇 首免時(shí)間的選擇主要通過檢測(cè)母源抗體水平來決定，同時(shí)還要注意本豬場(chǎng)的既往感染壓力，并考慮既往所使用的疫苗種類和質(zhì)量。

當(dāng)前，豬偽狂犬疫苗的生產(chǎn)廠家很多，各類產(chǎn)品質(zhì)量不同，抗原效價(jià)參差不齊，免疫時(shí)間與程序的選擇也應(yīng)相應(yīng)調(diào)整，不能憑經(jīng)驗(yàn)一直沿用一套程序。近年來，由于國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)面臨的防控壓力普遍較大，對(duì)仔豬提前實(shí)施首次免疫的做法受到推崇，并獲得一定效果；但其存在易導(dǎo)致母源抗體和疫苗抗體相互抵消的副作用，掌握不好往往事與愿違。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，疫苗的抗原效價(jià)越高，產(chǎn)生的免疫力就越強(qiáng)，仔豬通過母源獲得的抗體水平也就越高，因此選擇疫苗必須嚴(yán)密注意存在的質(zhì)量差異，確定首免時(shí)間必須避免因?yàn)榭乖r(jià)低而出現(xiàn)母源抗體持續(xù)時(shí)間不一的情況，防止誤判。一般而言，在豬場(chǎng)管理水平較高，本地豬場(chǎng)壓力又普遍較小的情況下，首免日齡可以往后推。但在確定首免時(shí)間時(shí)，最好先對(duì)仔豬進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，然后再根據(jù)抗體衰減規(guī)律，制定個(gè)性化的免疫程序。

跟蹤測(cè)定顯示，一般母豬使用高效價(jià)基因缺失疫苗免疫后，新生仔豬獲得的母源抗體都比較高，一般在10-12周左右仍有保護(hù)力，所以仔豬的最佳首免時(shí)間就應(yīng)安排在10-12周齡；如果用的是低效價(jià)疫苗，母源抗體水平低只能維持3-4周齡，仔豬就應(yīng)在3-4周齡實(shí)施首免。鑒于近年來高效價(jià)基因缺失疫苗普遍推廣使用的實(shí)際，建議正常豬場(chǎng)，于70日齡左右進(jìn)行小豬首免，首免后間隔3-4周加強(qiáng)免疫一次；而既往感染壓力較大的豬場(chǎng)，還應(yīng)提前對(duì)新產(chǎn)仔豬進(jìn)行滴鼻免疫。

3.2滴鼻免疫的操作 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，母源抗體、野毒感染等的干擾，是造成免疫失敗的主要因素，如果豬場(chǎng)感染壓力持續(xù)加大，臨產(chǎn)母豬抗體水平低下，則應(yīng)提前實(shí)施仔豬免疫接種，特別是周邊省份及本地有豬偽狂犬病流行時(shí)，為迅速有效抑制病毒感染，同時(shí)免受母源抗體干擾，提早對(duì)新生仔豬實(shí)施滴鼻免疫不失為一種十分有效的補(bǔ)充免疫手段。

滴鼻免疫主要通過鼻腔粘膜發(fā)揮作用，能夠快速釋放抗原，成為近年豬偽狂犬病防控中的熱門話題。建議在仔豬1-3日齡進(jìn)行，疫苗應(yīng)選用基因缺失弱毒活疫苗，佐劑以生理鹽水為好。根據(jù)免疫經(jīng)驗(yàn)，滴鼻操作時(shí)若使用一般針管，不僅劑量很難把握，而且容易被豬噴出，為避免疫苗浪費(fèi)，提高免疫效果，滴鼻免疫最好使用專用滴鼻器(以霧化液體形式分散，可增加吸收面積)，劑量每頭仔豬1 mL，每個(gè)鼻孔各0.5 mL。為確保疫苗被充分吸收利用，防止從鼻孔流出，滴鼻前后仔豬鼻孔都應(yīng)保持向上姿勢(shì)。

3.3合理制定程序?qū)嵤┟庖?相關(guān)調(diào)查表明，由于有些豬場(chǎng)只重視母豬與種豬的免疫，而忽視育肥豬的免疫，導(dǎo)致育肥前期容易出現(xiàn)免疫空白，加之，所用疫苗與免疫程序不適宜，首免時(shí)機(jī)把握不好，免疫接種劑量不足等因素，如果遭遇強(qiáng)毒攻擊極易造成育肥期豬群感染，同時(shí)，育肥豬群感染后臨床上必然出現(xiàn)咳嗽癥狀，排出的病毒更會(huì)通過呼吸系統(tǒng)引起循環(huán)傳播，導(dǎo)致仔豬群(特別是母源抗體消失后的仔豬)感染并使gE轉(zhuǎn)陽(yáng)，從而使整個(gè)豬場(chǎng)的偽狂犬病感染壓力驟然上升。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，在制定免疫程序時(shí)，除進(jìn)行母源抗體檢測(cè)外，為確定是否阻斷病毒循環(huán)，對(duì)這類豬場(chǎng)最好進(jìn)行g(shù)E抗體檢測(cè)，gE檢測(cè)一般應(yīng)在育肥豬16周齡以上(即母源抗體消失殆盡后)進(jìn)行。如果gE抗體呈陰性，表示沒有野毒存在，如果gE抗體呈陽(yáng)性，則提示有野毒感染。通過對(duì)育肥豬群進(jìn)行g(shù)E抗體檢測(cè)，判斷是否存在野毒感染情況，同時(shí)結(jié)合母源抗體檢測(cè)，再制定個(gè)性化免疫程序，對(duì)豬偽狂犬病防控有非常重要的意義。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，對(duì)經(jīng)常使用基因缺失疫苗的豬場(chǎng)，一般免疫程序?yàn)椋荷L(zhǎng)育肥豬10周齡左右首免，一個(gè)月后再加強(qiáng)免疫1次，后備母豬配種前一個(gè)月免疫1次，間隔一個(gè)月再加強(qiáng)免疫1次；經(jīng)產(chǎn)母豬每4個(gè)月免疫1次，產(chǎn)前1個(gè)月左右再加強(qiáng)免疫1次，種公豬一般每4個(gè)月免疫1次，對(duì)于感染壓力較大的陽(yáng)性豬場(chǎng)，新生仔豬一般1-3 日齡滴鼻首免，間隔一個(gè)月加強(qiáng)免疫1次，到10周齡再肌注1次滅活疫苗。

總之，豬偽狂犬病防控始終是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，究竟使用哪種疫苗，執(zhí)行何種免疫程序，應(yīng)用哪種免疫方法，都應(yīng)依據(jù)母源抗體檢測(cè)與血清學(xué)監(jiān)測(cè)情況，并結(jié)合發(fā)病臨床癥狀與本場(chǎng)、本地區(qū)流行狀況而確定。