實時直接分析質(zhì)譜法快速鑒別大果飛蛾藤藥材*

陳志永，楊媛媛，崔小敏，胡 靜，任 慧△

1 陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安710003；2 西安市食品藥品檢驗所

大果飛蛾藤Porana sinensisHemsl.為旋花科Convolvulaceae飛蛾藤屬porana植物，廣泛分布于廣東、廣西、湖南、湖北等地［1-2］。丁公藤Erycibe obtusifoliaBenth.為廣東、廣西地區(qū)傳統(tǒng)民間用藥，具有祛風(fēng)勝濕、消腫止痛的功效［3-5］。近年來，由于臨床用藥需求的增加，加之生態(tài)環(huán)境惡化，丁公藤藥材已不能滿足人們的臨床用藥需求［6-7］。通過對丁公藤藥材主產(chǎn)地廣西、浙江、江蘇、安徽等地的商品藥材進行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大果飛蛾藤已經(jīng)成為丁公藤藥材的主流替代品［7］。但目前關(guān)于大果飛蛾藤的研究報道依然較少，開展大果飛蛾藤的質(zhì)量控制研究，對滿足患者臨床用藥需求，保障瀕危稀缺中藥材丁公藤資源的可持續(xù)利用意義重大。

實時直接分析離子源（direct analysis in real time ionization source，DART）是一種直接離子化設(shè)備，其操作簡單，用毛細管蘸取樣品液即可實現(xiàn)樣品檢測，簡化了分離流程，近年來在中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用［8-9］。本課題組在前期研究中，建立了秦皮、前胡、獨活、補骨脂、白芷應(yīng)用實時直接分析質(zhì)譜的快速鑒別方法，并探討了不同類型香豆素在實時直接分析質(zhì)譜中的裂解規(guī)律，所建立的鑒別方法簡單、快速、準(zhǔn)確、綠色［10］。秦建平等［11］建立了應(yīng)用DART/QTOF-MS 鑒定龍血竭中多種酚酸類成分的方法，該方法能夠?qū)崿F(xiàn)龍血竭藥材質(zhì)量的快速評價。本研究首次建立了大果飛蛾藤藥材基于DART-MS 的快速鑒別方法，該方法試劑耗費少，樣品檢測周期短，具有較好的應(yīng)用前景。

1 儀器與試藥

質(zhì)譜分析由DART 離子源（美國IonSense 公司）和Finnigan Surveyor LCQ DECA XPplus 離子肼質(zhì)譜（美國賽默飛公司）完成，信息采集通過Xcalibar1.3 軟件進行。東莨菪素（中國藥品生物制品檢定所，批號：110768-200504），綠原酸（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200413），甲醇為分析純。3 批次大果飛蛾藤經(jīng)陜西省中醫(yī)藥研究院鑒定，均為正品，標(biāo)本存放于陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，藥材批號、收集地、收集時間見表1。

表1 大果飛蛾藤藥材信息

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備精密稱取不同批次大果飛蛾藤樣品粉末0.5 g，加甲醇25 mL，加熱回流提取0.5 h，放冷，濾過，濾液濃縮至干，加甲醇定容至1 mL，即得供試品溶液。取東莨菪素、綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，分別加甲醇制成1 mg/mL 的對照品溶液。DART 定性鑒別采用熔點管蘸取供試品溶液進行檢測。

2.2 儀器條件DART 參數(shù)：東莨菪素檢測模式為正離子模式，綠原酸檢測模式為負離子模式。離子化氣體為氦氣，放電針電壓為4.0 kV，格柵電壓+350 V/-200 V，載氣溫度300℃。質(zhì)譜參數(shù)：毛細管溫度300℃，輔助氣（N2）流速：15 A.U.，毛細管電壓15.0 V，鞘氣流速30.0 A.U.，噴霧電壓5.0 kV，相對碰撞能30.0%。

2.3 對照品的DART-MS和DART-MS/MS分析《中華人民共和國藥典》（2015 年版）丁公藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)薄層色譜鑒別項下以東莨菪素為鑒別成分。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)大果飛蛾藤中富含東莨菪素和綠原酸類成分?；跂|莨菪素、綠原酸在大果飛蛾藤中含量較高，DART-MS 中響應(yīng)較好，且兩種成分具有廣泛的生理活性，因此本研究選擇東莨菪素、綠原酸為大果飛蛾藤DART-MS 鑒別指標(biāo)性成分。東莨菪素在正離子離子模式下主要檢測到［M+H］+m/z193 的分子離子。在其二級質(zhì)譜中觀察到m/z165［M+H-CO］+等碎片。綠原酸在負離子模式下主要檢測到［M-H］-m/z353的分子離子，其二級質(zhì)譜中性丟失一個咖啡酸或奎尼酸分子，形成m/z191.0 和179.0 的碎片離子峰。東莨菪素和綠原酸的串聯(lián)質(zhì)譜圖見圖1。

圖1 東莨菪素（A）和綠原酸（B）的串聯(lián)質(zhì)譜圖

2.4 載氣溫度的選擇升高載氣溫度有利于供試品去溶劑化，使更多被分析物進入質(zhì)譜檢測器，而載氣溫度過高則會使樣品分解或碳化，加速樣品流失。本研究對載氣溫度進行優(yōu)化，考察溫度從100℃升高到400℃，溫度間隔50℃。通過質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)，信號強度隨著溫度升高而升高，達到最大值后，信號強度開始減弱。最終本研究選擇在300℃時檢測大果飛蛾藤中東莨菪素和綠原酸。

2.5 定性檢測采用熔點管蘸取不同批次大果飛蛾藤供試品溶液置于氦氣流中，離子阱質(zhì)譜采集樣品信息。從不同批次供試品溶液質(zhì)譜圖中可見東莨菪素（［M+H］+m/z193）和綠原酸（［M-H］-m/z353）的分子離子峰。利用串聯(lián)質(zhì)譜對東莨菪素和綠原酸的分子離子進行確認，增強了大果飛蛾藤DARTMS 鑒別的準(zhǔn)確性。對比不同批次大果飛蛾藤供試品溶液的質(zhì)譜圖可見，東莨菪素、綠原酸特征峰在供試品中均存在。研究結(jié)果表明，應(yīng)用DARTMS 技術(shù)可以對大果飛蛾藤藥材進行快速鑒別，該方法與薄層色譜鑒別方法相比，具有實時、快速、綠色等優(yōu)點。見圖2。

圖2 不同批次大果飛蛾藤樣品在正（A、B、C）、負（D、E、F）離子模式下的DART-MS譜圖。

3 討論

本研究首次建立了大果飛蛾藤的DART-MS 鑒別方法，該方法以東莨菪素、綠原酸為鑒別指標(biāo)性成分，所建立方法快速、簡單、綠色，可以實現(xiàn)大果飛蛾藤的快速鑒別。本研究有望提升大果飛蛾藤藥材質(zhì)量控制水平，推進大果飛蛾藤作為丁公藤代用品的應(yīng)用。DAR-MS 技術(shù)用于中藥鑒定，具有原位、直接、快速、高通量等特點，未來在中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。