高齡孕婦1196 例羊水細(xì)胞染色體核型結(jié)果分析

龐賢春

（廣西北海市婦幼保健院遺傳實(shí)驗(yàn)室，廣西 北海）

0 引言

隨著我國二胎政策的放開，人們婚育觀念的改變及輔助生殖技術(shù)的進(jìn)步，近年來，高齡（≥35 歲）孕婦的數(shù)量迅速增加。而高齡孕婦生產(chǎn)染色體異常胎兒的概率遠(yuǎn)高于適齡孕婦[1,2]。由于高齡產(chǎn)婦的卵子老化，其染色體不分離的發(fā)生概率升高，胎兒染色體異常的概率也隨之增長，進(jìn)而導(dǎo)致畸形兒的生育率增加。[3]。下面我們對2015-2019年來本院做產(chǎn)前診斷的高齡孕婦羊水細(xì)胞染色體核型結(jié)果分析如下。

1 對象與方法

1.1 對象

2015 年1 月至2019 年12 月來本院行羊水穿刺的高齡孕婦（其中包含無創(chuàng)染色體產(chǎn)前篩查高風(fēng)險，不良孕產(chǎn)史）1196 例，孕周17-24 周，均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 梁色體核型檢驗(yàn)

在B 超引導(dǎo)下，經(jīng)腹部羊膜腔穿刺術(shù)，無菌操作，抽取2ml 羊水棄去，再抽取20ml 羊水分別等量置于2 支15ml無菌離心管中，1500r/min 離心10min,在超凈工作臺無菌操作，棄上清，留2.5ml 細(xì)胞懸液，分別接種于兩個裝有不同廠家的培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，用無菌吸管吹打混勻，分別放置在37℃含5%CO2的不同的兩套培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)7d，取出培養(yǎng)瓶于倒置顯微鏡下觀察羊水細(xì)胞的生長情況，進(jìn)行添液或者換液處理。繼續(xù)培養(yǎng)1-2d 后，倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有6-8 個克隆且有許多圓形透亮的細(xì)胞時加入秋水仙素阻斷，胰酶脫落，低滲，固定收獲細(xì)胞，滴片，80℃烤片3-4h，常規(guī)下G 顯帶，并進(jìn)行核型分析。每例標(biāo)本常規(guī)計數(shù)至少20 個細(xì)胞，并在萊卡染色體分析系統(tǒng)下分析5 個核型，記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常的核型。如有可能有性染色體異常病例的標(biāo)本，則應(yīng)至少計數(shù)30 個細(xì)胞，如疑嵌合體，計數(shù)50 個以上細(xì)胞，對一些多態(tài)性染色體及標(biāo)記性染色體加做C 帶或N 帶加以驗(yàn)證。根據(jù)人類遺傳學(xué)國際命名體制ISCN(2013)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行描述染色體核型，并出具染色體核型分析報告。

1.2.2 C 顯帶

用5%Ba(OH)2和2 X SSC 處理，Giemasa 染色，在油鏡下觀察分散好、長度適中的著絲粒區(qū)深染的染色體。

1.2.3 N 顯帶

用50%AgNO3銀染，Giemasa 染色，在油鏡下觀察分散好、長度適中的有黑色銀染顆粒的染色體。

2 結(jié)果

2.1 染色體異常核型及異常檢出率

1196 例高齡孕婦（≥35 周歲）羊水標(biāo)本培養(yǎng)成功1194 份，成功率為99.8%。共檢出染色體異常71 例，異常檢出率為5.9%(71/1196)，其中染色體數(shù)目異常50 例，染色體結(jié)構(gòu)異常3 例，染色體多態(tài)性13 例，嵌合體5 例。

2.2 常見異常染色體種類及異常率

在本研究中高齡孕婦三體綜合征胎兒共38 例：其中21-三體為31 例，異常率 2.59% （31/1196）;18-三體為5 例，異常率0.42%（5/1196）;13- 三體2 例，異常率0.17%（2/1196）,其次為性染色體異常14 例（包括性染色體數(shù)目異常及嵌合體)，異常率1.17%（14/1196）,多態(tài)性核型13 例，異常率1.09%(13/1196),見表1。

表1 常見異常染色體種類及異常率

3 討論

在臨床中，由于新生兒染色體病而導(dǎo)致其出現(xiàn)遺傳類疾病的現(xiàn)象十分常見，羊水染色體核型分析作為重要的產(chǎn)前細(xì)胞遺傳學(xué)診斷方法，能夠有效預(yù)防染色體病患兒的出生。不做篩查是我國現(xiàn)行的產(chǎn)前診斷策略，其僅將高齡作為施行有創(chuàng)產(chǎn)前診斷的唯一指標(biāo)[4]。產(chǎn)前診斷技術(shù)為減少出生缺陷提供了胎兒遺傳學(xué)信息，目前最為常用的產(chǎn)前診斷技術(shù)為羊膜腔穿刺和絨毛穿刺，因?yàn)樵诓僮髦写嬖谳^大的醫(yī)療風(fēng)險，導(dǎo)致妊娠丟失的發(fā)生，丟失率分別為0．06%-1.3%及0.5%-2%[5]，同時還會為產(chǎn)婦帶來較大的心理壓力。

已有大量文獻(xiàn)報道，高齡是影響孕婦中胎兒染色體異常的重要因素之一，孕婦年紀(jì)與發(fā)生率呈正比，尤其是T21[6]。本研究1196 例高齡孕婦，胎兒染色體異常核型71例，異常發(fā)生率達(dá)5.9%，其中三體綜合征38 例，占總異常率53.5%，21-三體為31 例，18-三體5 例，13-三體2 例，與此前研究中高齡孕婦由于染色體不分離導(dǎo)致染色體數(shù)目異常的概率增加相符合?？梢姡啐g妊娠由于卵子老化、染色體不分離的概率較高，導(dǎo)致各種染色體數(shù)目異常的概率大大增加。三體核型仍然是胎兒最常見的異常核型，染色體畸變常被認(rèn)為是引起三體綜合癥的主要原因，在親代的配子形成時或妊娠初期受精卵卵裂時出現(xiàn)染色體不分離，導(dǎo)致一個配子含多條染色體，另一個配子染色體缺失，受精后形成三體型或單體型異常的子代。由于3 條染色體載有相同的基因，破壞了遺傳物質(zhì)間的平衡，導(dǎo)致胎兒染色體異常[7-10]。高齡孕婦21 及18-三體綜合征的檢出率可通過遺傳咨詢進(jìn)行羊水染色體分析得到有效增加，減少給社會和家庭帶來的負(fù)擔(dān)。性染色體異常14 例（包括性染色體數(shù)目異常及嵌合體)，多態(tài)性核型13 例，占總異常率18.31%,其中以inv（9）最為多見，此外，結(jié)構(gòu)異常共檢出3 例胎兒常染色體結(jié)構(gòu)異常。如果從表型正常的父母遺傳而來的常染色體結(jié)構(gòu)異常，胎兒出現(xiàn)異常表型的風(fēng)險較低。而新發(fā)常染色體結(jié)構(gòu)異常、單親二體或者斷裂點(diǎn)剛好在致病基因的位點(diǎn)上，就可能出現(xiàn)畸形的胎兒。其異常效應(yīng)取決于非平衡片段基因的數(shù)量和功能表達(dá)。通常非平衡片段越大，所含的基因越多，表達(dá)的致病基因就越多，胎兒發(fā)生畸形的風(fēng)險就越大。多態(tài)變異的構(gòu)成及意義，1196 例標(biāo)本中共檢出13 例染色體多態(tài)變異，過去認(rèn)為染色體異染色質(zhì)區(qū)及隨體區(qū)所含基因少，不具有表型效應(yīng)，但近年來，在一定內(nèi)環(huán)境影響下，這些多態(tài)性變異可導(dǎo)致臨床表型異常也有報道[11,12]。

根據(jù)高齡產(chǎn)婦是產(chǎn)前診斷的重點(diǎn)對象這一顯著特征，本文特選取1196 例高齡產(chǎn)婦的羊水細(xì)胞作為研究樣本，并對其進(jìn)行染色體核型分析，進(jìn)而對高齡產(chǎn)婦所孕育胎兒的各種染色體疾病的發(fā)生率及其染色體異常的主要核型進(jìn)行探究，為單一高齡因素孕婦人群的產(chǎn)前篩查與診斷方案研究提供參考，并且作為依據(jù)為遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供有力支撐。