基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究壽胎丸治療先兆流產(chǎn)作用機(jī)制

楊柳青，陳 赟，繆晨韻，趙 穎，王如燁，章 勤

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬?gòu)V興醫(yī)院，浙江 杭州 310007）

先兆流產(chǎn)(threatened abortion,TA) 指孕28 周前出現(xiàn)陰道流血、腹痛腰酸等癥狀,婦科檢查宮頸口未開,無妊娠物排出,是最常見的妊娠并發(fā)癥之一,發(fā)病率為20%～25%,嚴(yán)重影響婦女身心健康,若未及時(shí)治療,則發(fā)展為難免流產(chǎn)［1-3］。先兆流產(chǎn)病因復(fù)雜,其病因機(jī)制尚未完全闡明,西醫(yī)治療一般采用臥床休息、禁止性生活,并予以人絨毛膜促性腺激素、黃體酮等藥物治療［1,4］。該病歸屬中醫(yī)“胎漏、胎動(dòng)不安” 范疇,中醫(yī)藥治療先兆流產(chǎn)有數(shù)千年歷史,臨床療效顯著,不良反應(yīng)少。中醫(yī)理論認(rèn)為腎藏精,主生殖,為五臟之本,元?dú)庵?腎氣的強(qiáng)弱是胎元能否穩(wěn)固的關(guān)鍵,所以腎虛為其基本病機(jī)［5］。壽胎丸出自張錫純所著《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》,具有補(bǔ)腎固沖,安胎之功,主治婦人滑胎,后世醫(yī)家多以本方為安胎基礎(chǔ)方隨證化裁進(jìn)行臨床應(yīng)用,并被“十一五” 國(guó)家級(jí)規(guī)劃教材—《中醫(yī)婦科學(xué)》 收錄為腎虛型“胎漏、胎動(dòng)不安” 主治方劑,已成為中醫(yī)臨床治療先兆流產(chǎn)經(jīng)典名方［6-7］。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)一詞,最先由英國(guó)藥理學(xué)家Andrew L Hopkins 于2007 年提出,并在2008 年將其作為“下一代藥物研發(fā)模式” 進(jìn)行闡述［8-9］。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是指應(yīng)用系統(tǒng)生物學(xué)和多向藥理學(xué)方法構(gòu)建生物學(xué)網(wǎng)絡(luò),從網(wǎng)絡(luò)平衡的整體角度描述生物系統(tǒng)、藥物和疾病之間的相互作用,研究中藥的藥理作用、機(jī)制和安全性［10］。通過構(gòu)建的網(wǎng)絡(luò)可顯示:一種疾病可由多種不同基因調(diào)控；單個(gè)基因亦可調(diào)控多種疾病,與中醫(yī)學(xué)“同病異治” 和“異病同治” 的理論契合。此外,網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)能從整體角度系統(tǒng)分析中藥復(fù)方“多成分-多靶點(diǎn)” 的作用機(jī)制,其“系統(tǒng)性、整體性” 的特點(diǎn)與中醫(yī)中藥“整體觀、辨證論治” 的原則相吻合。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)能揭示中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其分子機(jī)制,使中醫(yī)藥研究從經(jīng)驗(yàn)醫(yī)學(xué)向循證醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)變,有效地推動(dòng)中藥復(fù)方的深入研究,對(duì)現(xiàn)代中藥的研究和開發(fā)具有重要意義［10-12］。因此,本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法挖掘壽胎丸治療先兆流產(chǎn)可能的潛在活性成分及作用靶點(diǎn),構(gòu)建蛋白相互作用(PPI) 及中藥復(fù)方-成分-靶基因-疾病網(wǎng)絡(luò),進(jìn)行基因本體(GO) 富集分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG) 通路富集分析,為壽胎丸治療先兆流產(chǎn)提供相關(guān)科學(xué)性依據(jù)及啟發(fā)。

1 方法

1.1 壽胎丸的活性成分收集 通過檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái) (TCMSP)［13］(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php) 和TCMID［14］(http://119.3.41.228 ∶8000/) 收集壽胎丸中菟絲子、桑寄生、續(xù)斷、阿膠化學(xué)成分(阿膠化學(xué)成分信息來自TCMID,其余三味中藥成分信息來自TCMSP),并根據(jù)成分的藥代動(dòng)力學(xué)(Absorption and distribution and metabolism and excretion,ADME) 參數(shù),口服生物利用度(Oral bioavailability,OB) ≥30% 和類藥性(Drug likeness,DL) ≥0.18 為篩選條件進(jìn)行檢索,得到壽胎丸生物活性成分,檢索時(shí)間為2019 年5 月16 日。

1.2 壽胎丸作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 基于上述所篩選的生物活性成分,從pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得各活性成分的Canonical SMILES 結(jié)構(gòu)式,并將Canonical SMILES 結(jié)構(gòu)式導(dǎo)入 SwissTargetPrediction(http://www.swisstargetprediction.ch/) 數(shù)據(jù)庫(kù),限定物種為“homo sapiens”,獲取成分靶點(diǎn)［15］。SwissTargetPrediction 數(shù)據(jù)庫(kù)目前收錄了3 個(gè)不同物種的三千多種蛋白質(zhì)及其37 萬已知的活性物質(zhì),能有效預(yù)測(cè)小分子蛋白靶點(diǎn),具有應(yīng)用范圍廣,預(yù)測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn),在中藥靶點(diǎn)預(yù)測(cè)中得到了廣泛應(yīng)用［16-17］。

1.3 先兆流產(chǎn)相關(guān)靶點(diǎn)收集 以 “threatened abortion”“threatened miscarriage” 為關(guān)鍵詞,利用TTD (http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/)、Genecards (https://www.genecards.org/)、NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) 3 個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行疾病靶點(diǎn)檢索,將檢索結(jié)果進(jìn)行合并,刪除重復(fù)靶點(diǎn),從而獲得先兆流產(chǎn)相關(guān)靶點(diǎn),檢索時(shí)間為2019 年6 月20 日。

1.4 基因映射及蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將壽胎丸作用靶點(diǎn)與先兆流產(chǎn)相關(guān)靶點(diǎn)通過R 語言軟件(3.6.1 版本)進(jìn)行映射,得到壽胎丸治療先兆流產(chǎn)的潛在作用靶點(diǎn)(交集靶點(diǎn)),繪制韋恩圖。將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入 STRING(https://string-db.org/) 數(shù)據(jù)庫(kù),限定物種為 “homo sapiens”,置信度得分閾值設(shè)為“highest confidence” (＞0.9),以TSV 形式保存結(jié)果。此外應(yīng)用R 語言軟件(3.6.1 版本) 對(duì)所得的PPI 進(jìn)行統(tǒng)計(jì),繪制頻次柱狀圖,篩選核心基因。

1.5 藥物-活性成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將“1.4” 項(xiàng)下結(jié)果通過Cytoscape3.2.1 軟件繪制藥物-活性成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò),并對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析,網(wǎng)絡(luò)圖中節(jié)點(diǎn)(node) 為藥物、活性成分、疾病、靶點(diǎn),邊(edge) 代表以上節(jié)點(diǎn)之間的相互關(guān)系。

1.6 GO 功能富集分析及KEGG 通路富集分析 首先,使用R 語言軟件將1.4 所得潛在作用靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換成entrezID。然后,給R 語言軟件安裝clusterProfiler、bioconductor 等程序包。再運(yùn)行R 語言得到KEGG 富集分析結(jié)果,以條形圖、氣泡圖、通路圖等形式展示,并根據(jù)P值判斷富集功能和通路的顯著性,以探究壽胎丸治療先兆流產(chǎn)可能的作用機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 壽胎丸活性成分篩選 本研究以O(shè)B≥30%、DL≥0.18 為限制條件,通過TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)壽胎丸4 味中藥進(jìn)行檢索,得到活性成分分別為菟絲子11 種、桑寄生2 種、續(xù)斷8 種,但未收錄阿膠成分信息,其3 種成分來自TCMID (未顯示OB、DL 等ADME 信息,檢索到的3 種成分均統(tǒng)計(jì)在內(nèi))。表1 為篩選后壽胎丸所含24 個(gè)成分信息,經(jīng)過去重及刪除無Pubchem Cid 后得到15 個(gè)。

表1 壽胎丸中活性成分信息（含重復(fù)）

2.2 壽胎丸潛在靶點(diǎn)及先兆流產(chǎn)相關(guān)靶點(diǎn)收集、映射 從Pubchem 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得活性成分的Canonical SMILES 結(jié)構(gòu)式,并將Canonical SMILES 結(jié)構(gòu)式上傳到SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù),獲取成分靶點(diǎn),去重后獲得507 個(gè)相應(yīng)靶點(diǎn)；通過 TTD、Genecards、NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù),以 “ Threatened abortion” “Threatened miscarriage” 為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索,將3 個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果進(jìn)行合并,去重后獲得先兆流產(chǎn)相應(yīng)靶點(diǎn)196 個(gè)。將壽胎丸作用靶點(diǎn)與先兆流產(chǎn)相關(guān)靶點(diǎn)通R語言軟件映射后,得到交集靶點(diǎn),繪制韋恩圖,見圖1、表2。應(yīng)用STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)圖,見圖2,網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)36 個(gè),邊數(shù)190 條,其中節(jié)點(diǎn)代表蛋白(交集靶點(diǎn)),邊代表各蛋白之間相互關(guān)系,邊數(shù)越多,關(guān)聯(lián)度越大,將STRING 中下載的tsv 文件用R 語言軟件進(jìn)行處理,統(tǒng)計(jì)并繪制出各蛋白-蛋白相互作用的邊數(shù)(前20),見圖3,邊數(shù)最多的為STAT3 (24 條邊)、EGFR (21 條邊)、MMP-9 (20 條邊)。即PPI 網(wǎng)絡(luò)中核心基因?yàn)樾盘?hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9) 等,核心基因與壽胎丸活性成分有較高的結(jié)合活性,其在體內(nèi)治療先兆流產(chǎn)發(fā)揮主要作用。

圖1 壽胎丸治療先兆流產(chǎn)潛在靶點(diǎn)

表2 壽胎丸治療先兆流產(chǎn)潛在靶點(diǎn)

圖2 STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)分析蛋白-蛋白的相互作用

圖3 PPI 中的核心基因

圖4 藥物-活性成分-疾病-靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)圖

2.3 藥物-活性成分-疾病-靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 應(yīng)用Cytoscape3.2.1 軟件繪制藥物-活性成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò),見圖4,共包括56 個(gè)節(jié)點(diǎn)(靶點(diǎn)36 個(gè),活性成分15 個(gè),疾病1個(gè),藥物4 個(gè)) 和1 156 條邊。自由度(Degree) 表示在蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)中該節(jié)點(diǎn)直接相互作用的節(jié)點(diǎn)的數(shù)目,節(jié)點(diǎn)的度越大則參與的生物功能越多,其生物重要性越強(qiáng)。分析結(jié)果顯示,有效成分中自由度最高的為β-谷甾醇(βsitosterol) 及槲皮素(quercetin),自由度分別為18、14,靶點(diǎn)KDR (酪氨酸激酶受體)、SLC6A4 (5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因)、ESR1 (雌激素受體α) 自由度(Degree) 最高,分別為13、10、9,表示其生物學(xué)重要性較強(qiáng)。

2.4 GO 功能富集分析及KEGG 通路富集分析 經(jīng)R 語言軟件處理后顯示,交集靶點(diǎn)共富集48 個(gè)生物學(xué)功能,排名前20 的GO 功能富集見圖5,圓點(diǎn)顏色代表P值功能富集的顯著性,顏色越偏向紅色,P值越小,顯著性越強(qiáng)；圓點(diǎn)大小代表參與該功能的靶點(diǎn)數(shù)目,圓點(diǎn)越大,參與該功能靶點(diǎn)越多。由此可知,壽胎丸治療先兆流產(chǎn)主要與體內(nèi)酶活性調(diào)節(jié)、基因轉(zhuǎn)錄、核受體活性、激素受體結(jié)合等方面內(nèi)容有關(guān)。

圖5 壽胎丸治療先兆流產(chǎn)潛在靶點(diǎn)的GO 功能富集

將所得的36 個(gè)交集靶點(diǎn)使用R 語言程序進(jìn)行KEGG 通路富集分析,處理后得到35 條通路,顯著性最高的15 條通路見表3,將顯著性排名前15 的通路作條形圖,見圖6,橫坐標(biāo)表示參與該通路靶點(diǎn)數(shù),顏色表示P值,顏色越偏向紅色,則P值越小,顯著性越高。經(jīng)分析,36 個(gè)交集靶點(diǎn)主要分布于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)、雌激素(Estrogen) 等多條信號(hào)通路,表明壽胎丸主要活性成分可通過多條信號(hào)通路來治療先兆流產(chǎn),通路間存在著復(fù)雜的相互作用關(guān)系,多成分、多靶點(diǎn)、相互調(diào)節(jié)是治療先兆流產(chǎn)的可能作用機(jī)制。

表3 靶點(diǎn)通路富集結(jié)果（前15 個(gè)）

圖6 KEGG 通路富集

3 討論

壽胎丸具有補(bǔ)腎安胎之功,臨床中應(yīng)用壽胎丸或以壽胎丸為基礎(chǔ)方治療先兆流產(chǎn)具有較好的效果。因此,對(duì)壽胎丸治療先兆流產(chǎn)的研究具有重要意義。中醫(yī)臨床中以整體觀和辨證論治為指導(dǎo)原則,中藥復(fù)方有著多成分、多靶點(diǎn)、相互聯(lián)系的特征,網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)能從整體角度系統(tǒng)分析中藥復(fù)方“多成分-多靶點(diǎn)” 的作用機(jī)制,可以揭示中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其分子機(jī)制使中醫(yī)藥研究從經(jīng)驗(yàn)醫(yī)學(xué)向循證醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)變,為研究中藥復(fù)方的一種新策略,對(duì)現(xiàn)代中藥的研究和開發(fā)具有重要意義。臨床研究表明,壽胎丸能明顯改善先兆流產(chǎn)患者陰道流血、腰酸、腹痛等臨床癥狀,促進(jìn)血清β-HCG、孕酮、雌二醇含量,降低血清IL-17、IL-10 及TNF-α 水平［18-19］,聯(lián)合西藥治療早期先兆流產(chǎn)合并絨毛膜下血腫效果優(yōu)于單純西藥治療組［20-21］,相關(guān)Meta 分析顯示壽胎丸治療先兆流產(chǎn)的療效優(yōu)于單純西藥治療［22］,實(shí)驗(yàn)研究表明,壽胎丸含藥血清可促進(jìn)人早孕滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖活性及侵襲遷移能力,減少細(xì)胞凋亡［23］,提高促排卵妊娠大鼠的胚泡著床點(diǎn)數(shù)［24］,并通過調(diào)節(jié)控制性超排卵小鼠子宮內(nèi)膜Ang 及受體表達(dá),提高COH 小鼠子宮內(nèi)膜容受性［25］。

本研究根據(jù)TCMSP 和TCMID 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取壽胎丸全方4味中藥主要活性成分,然后再進(jìn)行活性成分篩選的,所以篩選后的成分均是主要藥味的主要成分,共收集壽胎丸有效成分15 種,現(xiàn)有的研究大多根據(jù)有效成分及靶點(diǎn)與藥材的關(guān)聯(lián)度來對(duì)組方規(guī)律進(jìn)行君、臣、佐、使解釋,活性成分及靶點(diǎn)越多的藥材,在處方中地位越重要,通過本研究中藥-有效成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)分析,根據(jù)自由度排名前8的活性成分中,5 種來源于菟絲子,由此體現(xiàn)出菟絲子的君藥地位。壽胎丸相關(guān)靶點(diǎn)507 個(gè),與先兆流產(chǎn)196 個(gè)疾病相關(guān)靶點(diǎn),交集后獲得36 個(gè)基因,構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò),網(wǎng)絡(luò)中核心基因?yàn)樾盘?hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9) 等。研究表明STAT3 作為一種轉(zhuǎn)錄因子,在各種組織的發(fā)育,細(xì)胞生長(zhǎng)和體內(nèi)平衡中起著關(guān)鍵作用［26］,胎盤發(fā)育需要細(xì)胞增殖,分化和遷移的精確協(xié)調(diào),更需滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜以建立胚胎血液,STAT3 激活對(duì)于滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲至關(guān)重要［27］,STAT3 亦可以通過增加LIF (白血病抑制因子) 和LIFR (白血病抑制因子受體) 之間的相互作用增強(qiáng)粘附分子的表達(dá),從而提高胚胎植入成功率［28］。EGFR 是表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員之一,廣泛分布于哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上,是一種參與多種細(xì)胞活動(dòng)的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,可通過自分泌、旁分泌和內(nèi)分泌途徑刺激滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖和分化,從而調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育和胚胎植入［29］,有文獻(xiàn)報(bào)道復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中EGFR 表達(dá)顯著降低［30］,這可能與EGFR 下調(diào)引起滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲功能異常有關(guān)。MMP-9 在滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲蛻膜過程中起重要作用,滋養(yǎng)細(xì)胞自分泌Mmps,誘導(dǎo)其侵入蛻膜,MMP-9 是滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入蛻膜的限速酶,能降解蛻膜基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)［31］,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MMP-9 水平在流產(chǎn)大鼠模型的血清和脫膜組織中均下降,通過抑制Mmps 與可導(dǎo)致妊娠大鼠子宮內(nèi)膜蛻膜發(fā)育不良、胚胎植入困難等［32］。STAT3、EGFR、MMP-9 等核心基因與壽胎丸活性成分有較高的結(jié)合活性,其在體內(nèi)治療先兆流產(chǎn)可能發(fā)揮主要作用。

根據(jù)中藥-有效成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)分析,靶點(diǎn)KDR(酪氨酸蛋白激酶)、SLC6A4 (5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因)、ESR1 (雌激素受體α) 自由度(Degree) 最高,表示其生物學(xué)重要性較強(qiáng)。KDR 酪氨酸蛋白激酶,為VEGF (血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子) 的細(xì)胞表面受體,VEGF 及KDR 是胎盤血管生成的重要蛋白,在胎盤、胚胎發(fā)育中起重要作用,VEGF 和KDR 的轉(zhuǎn)錄對(duì)于維持妊娠至關(guān)重要［33-35］,壽胎丸可以通過增加KDR 含量,激活VEGF/KDR 途徑,調(diào)節(jié)子宮內(nèi)的血管生成,從而維持早孕。SLC6A 主要與情感表達(dá)相關(guān),有“快樂基因” 之稱,其多態(tài)性與強(qiáng)迫癥、人格障礙等相關(guān)。雌激素通過雌激素受體(ESR1/ESRα、ESR2/ESRβ) 在胎兒和胎盤發(fā)育中起著關(guān)鍵作用,并在植入前和妊娠維持過程中起著至關(guān)重要的作用,有研究表面ESR1多態(tài)性與自然流產(chǎn)和不明原因型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)［36-37］。

為了進(jìn)一步分析壽胎丸活性化合物可能作用于先兆流產(chǎn)的相關(guān)基因和信號(hào)通路,交集后的36 個(gè)基因進(jìn)行GO 功能富集分析及KEGG 通路富集分析。GO 功能富集分析顯示壽胎丸治療先兆流產(chǎn)主要與體內(nèi)酶活性調(diào)節(jié)、基因轉(zhuǎn)錄、核受體活性、激素受體結(jié)合等方面內(nèi)容有關(guān)。KEGG 通路富集分析顯示壽胎丸治療先兆流產(chǎn)可能的信號(hào)通路為磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 (PI3K/Akt)、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)、雌激素(Estrogen) 信號(hào)通路。PI3K/AKT 信號(hào)是調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層生長(zhǎng)和侵襲的重要途徑［38］,有研究表明,抑制FAK/SRC/PI3K/AKT 途徑引起MMP2 和eNOS 下調(diào),進(jìn)而抑制人EVT HTR-8/SVneo 細(xì)胞(人絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞的體外模型) 的遷移和侵襲,從而影響胚胎著床［39］。血管生成是胎兒和胎盤發(fā)育中藥因素,有研究顯示早期自然流產(chǎn)組絨毛組織HIF-1α 水平明顯低于人工流產(chǎn)組,且HIF-1α水平與微血管密度(MVD) 呈正相關(guān),敲除HIF-1 基因后MVD 水平明顯下降,并可導(dǎo)致胎盤血管生成失敗,引起胎盤缺血缺氧［40］,HIF-1α 的表達(dá)參與了滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲和遷移的控制［41］。雌激素是一種類固醇激素,調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物體內(nèi)過多的生理過程,包括生殖、心血管保護(hù)、骨骼完整性、細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)和行為。雌激素通過與不同的ER 結(jié)合改變細(xì)胞生理功,不但能與核ER 結(jié)合,也能與膜ER 結(jié)合激活PI3K 信號(hào)通路,可以直接或間接地通過一個(gè)或多個(gè)因素在維持靈長(zhǎng)類動(dòng)物妊娠過程中發(fā)揮著極其重要的生理作用［42-43］。

綜上所述,本研究表明壽胎丸治療先兆流產(chǎn)主要的活性成分可能為β-谷甾醇(β-sitosterol)、槲皮素(quercetin)等,這些活性成分通過作用于KDR、SLC6A4、ESR1、STAT3、EGFR 等靶標(biāo)以及調(diào)節(jié)PI3K/Akt、HIF-1、Estrogen等信號(hào)通路發(fā)揮治療作用,壽胎丸治療先兆流產(chǎn)可能通過調(diào)節(jié)絨毛組織微血管密度、促進(jìn)子宮內(nèi)膜血管生成、刺激滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、分化及侵入等生物過程來維持早孕,為后續(xù)深入研究壽胎丸治療先兆流產(chǎn)奠定理論基礎(chǔ)。