當(dāng)歸熟地藥對(duì)配方顆粒與單味配方顆粒組合的化學(xué)有效成分對(duì)比研究*

許麗潔 韓 鵬 吳美蘭 宣志紅#

1 諸暨市中醫(yī)醫(yī)院 浙江 諸暨 311800

2 浙江景岳堂藥業(yè)有限公司 浙江 紹興 312025

中藥配方顆粒是在遵循傳統(tǒng)中醫(yī)理論的基礎(chǔ)上，以符合炮制要求的中藥飲片為原料，經(jīng)工業(yè)化的提取、濃縮、干燥、制粒和分裝等現(xiàn)代中藥生產(chǎn)工藝過(guò)程精制而成的顆粒劑[1]。它既保證了原中藥飲片的全部特征，能夠滿足中醫(yī)師進(jìn)行辨證論治、隨證加減，同時(shí)又具有不需要煎煮、直接沖服、服用量少、療效確切、藥效高、藥性強(qiáng)、安全衛(wèi)生、攜帶保存方便等許多優(yōu)點(diǎn)，市場(chǎng)前景廣闊[2]。中藥配方顆粒在臨床應(yīng)用中是單味藥物獨(dú)立提取后的混合，而傳統(tǒng)湯劑是群藥共煎。中藥湯劑在煎煮時(shí)有相須、相殺、相畏等作用，會(huì)經(jīng)過(guò)一系列相當(dāng)復(fù)雜的物理化學(xué)反應(yīng)，可增強(qiáng)療效，也可降低毒性或不良反應(yīng)，反應(yīng)中產(chǎn)生的新成分也可能會(huì)起到一定的作用。中藥配方顆粒不具備群煎過(guò)程，混合后的整體療效有可能會(huì)受到影響[3-6]。本研究將不同配比（2∶1、1∶1、0.5∶1）的當(dāng)歸熟地藥對(duì)合并煎煮，制成以中藥藥對(duì)混合投料的顆粒劑（簡(jiǎn)稱“當(dāng)歸熟地藥對(duì)配方顆?！保?，其煎煮次數(shù)、時(shí)間與單煎一致，加水量與各單煎的總量相同。對(duì)當(dāng)歸熟地藥對(duì)配方顆粒沖泡后藥液和單味配方顆?；旌蠜_泡后藥液中阿魏酸、毛蕊花糖苷含量進(jìn)行比較，為當(dāng)歸熟地藥對(duì)配方顆粒的研究提供一定的思路和基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀；智能超聲波清洗器（DL-480E）；BT125D型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑：阿魏酸（批號(hào)110773-201614，99.0%），毛蕊花糖苷（批號(hào)111530-201713，92.5%），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、冰乙酸為分析純；水為純化水。

1.3 樣品：當(dāng)歸熟地藥對(duì)配方顆粒和當(dāng)歸、熟地配方顆粒由浙江景岳堂藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 阿魏酸含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證[7]：分述如下。

2.1.1 色譜條件：色譜柱為UltimateAQ-C18（4.6mm×250mm,5μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng) 316nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量10μl。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備：取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每亳升含14μg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過(guò)，即得。

2.1.4 專屬性驗(yàn)證：取當(dāng)歸熟地配方顆粒（1∶1）（批號(hào)：DS-04）研細(xì)，按“供試品溶液的制備”方法制成供試品溶液。取熟地配方顆粒研細(xì)，取0.2g，精密稱定，按“供試品溶液的制備”方法制成陰性供試品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10μl分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果對(duì)照品色譜中，阿魏酸色譜峰理論塔板數(shù)為96805，對(duì)稱因子為1.243。供試品色譜圖上阿魏酸峰理論塔板數(shù)為97711，對(duì)稱因子為1.223。陰性供試品在該時(shí)位置無(wú)干擾。說(shuō)明該方法專屬性良好。相關(guān)色譜圖見圖1～3。

圖1 阿魏酸對(duì)照品色譜圖

圖2 當(dāng)歸熟地藥對(duì)供試品色譜圖

圖3 當(dāng)歸熟地藥對(duì)陰性樣品色譜圖

2.1.5 進(jìn)樣精密度：取阿魏酸對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD為0.53%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.1.6 線性關(guān)系的考察：精密吸取各濃度對(duì)照品溶液10μl，分別注入高效液相色譜儀。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果得線性方程Y=57241X-528.43，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999。說(shuō)明阿魏酸在濃度1.391～27.82μg/ml之間線性關(guān)系良好。

2.1.7 重復(fù)性：平行稱取6份樣品，按“供試品溶液的制備”操作，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，所得6份的含量RSD為1.05%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.1.8 回收率：取本品適量，研細(xì)，取0.1g藥對(duì)配方顆粒，精密稱定，平行9份，分別加入不同量的對(duì)照品溶液，其余操作同供試品溶液的制備，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果阿魏酸的回收率均在95%～105%之間，表明該方法回收率良好。

2.1.9 結(jié)果：經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法專屬性、進(jìn)樣精密度、線性、供試品穩(wěn)定性、重復(fù)性、中間精密度、回收率均良好，可用于當(dāng)歸熟地藥對(duì)中阿魏酸含量測(cè)定。

2.2 毛蕊花糖苷含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證[7]：分述如下。

2.2.1 色譜條件：色譜柱為WondaSil C18（4.6mm×250mm,5μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)334nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量10μl。理論板數(shù)按毛蕊花糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備：取毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每毫升含10μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 專屬性驗(yàn)證：取當(dāng)歸熟地配方顆粒（1∶1）研細(xì)，按“供試品溶液的制備”方法制成供試品溶液。取當(dāng)歸配方顆粒研細(xì)，精密稱取0.5g，按“供試品溶液的制備”方法制成陰性供試品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10μl分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，考察專屬性。結(jié)果對(duì)照品色譜中，毛蕊花糖苷色譜峰理論塔板數(shù)為8105，對(duì)稱因子為1.054。供試品色譜圖上毛蕊花糖苷峰理論塔板數(shù)為6239，對(duì)稱因子為1.180。陰性供試品在該時(shí)位置無(wú)干擾。說(shuō)明該方法專屬性良好，可用于該藥對(duì)中毛蕊花糖苷含量測(cè)定。色譜圖見圖4～6。

圖4 毛蕊花糖苷對(duì)照品色譜圖

圖5 當(dāng)歸熟地藥對(duì)供試品色譜圖

圖6 當(dāng)歸熟地藥對(duì)陰性樣品色譜圖

2.2.5 進(jìn)樣精密度：取毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD為0.86%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.2.6 線性關(guān)系的考察：精密吸取各不同濃度對(duì)照品溶液10μl，分別注入高效液相色譜儀。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果得線性方程Y=27717X+200.86，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999。說(shuō)明毛蕊花糖苷在濃度1.182～23.64μg/ml之間線性關(guān)系良好。

2.2.7 重復(fù)性：平行稱取6份樣品，按供試品溶液的制備方法制備樣品，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，所得6份含量RSD為1.35%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.2.8 回收率：取本品適量，研細(xì)，取0.25g藥對(duì)配方顆粒，精密稱定，平行9份，分別加入不同量的對(duì)照品溶液，其余操作同供試品溶液的制備，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果毛蕊花糖苷的回收率均在95%～105%之間，表明該方法回收率良好。

2.2.9 結(jié)果：經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法專屬性、進(jìn)樣精密度、線性、供試品穩(wěn)定性、重復(fù)性、中間精密度、回收率均良好，可用于當(dāng)歸熟地藥對(duì)中毛蕊花糖苷含量測(cè)定。

2.3 “中藥藥對(duì)”單味配方顆?；旌蠜_泡與“中藥藥對(duì)配方顆?！睕_泡含量比較：取相當(dāng)于9g飲片的當(dāng)歸配方顆粒、熟地配方顆粒按2∶1、1∶1、0.5∶1三種配比混合沖泡。同時(shí)將相應(yīng)配比的當(dāng)歸熟地藥對(duì)配方顆粒進(jìn)行沖泡。用高效液相色譜測(cè)定兩者阿魏酸和毛蕊花糖苷含量，比較兩者差異。結(jié)果以每相當(dāng)于1g飲片計(jì)，測(cè)定結(jié)果見下表1、表2。結(jié)果表明，中藥藥對(duì)配方顆粒沖泡后藥液中阿魏酸和毛蕊花糖苷的含量均略高于單味配方顆?；旌蠜_泡后的藥液中的含量，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 單味配方顆粒與中藥藥對(duì)配方顆粒沖泡后阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果（±s，mg/g）

表1 單味配方顆粒與中藥藥對(duì)配方顆粒沖泡后阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果（±s，mg/g）

中藥藥對(duì)配方顆粒0.2627±0.0104 0.1827±0.0067 0.1602±0.0056配比當(dāng)歸熟地（2∶1）當(dāng)歸熟地（1∶1）當(dāng)歸熟地（0.5∶1）單味配方顆?；旌?.2539±0.0067 0.1927±0.0039 0.1405±0.0041

表2 單味配方顆粒與中藥藥對(duì)配方顆粒沖泡后毛蕊花糖苷含量測(cè)定結(jié)果（±s，mg/g）

表2 單味配方顆粒與中藥藥對(duì)配方顆粒沖泡后毛蕊花糖苷含量測(cè)定結(jié)果（±s，mg/g）

中藥藥對(duì)配方顆粒0.0521±0.0017 0.0763±0.0041 0.1170±0.0062配比當(dāng)歸熟地（2∶1）當(dāng)歸熟地（1∶1）當(dāng)歸熟地（0.5∶1）單味配方顆?；旌?.0452±0.0013 0.0659±0.0024 0.0890±0.0027

3 討論

藥對(duì)又稱對(duì)藥、對(duì)子藥、姐妹藥，在文獻(xiàn)中沒(méi)有統(tǒng)一的定義?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)通常認(rèn)為，藥對(duì)是中醫(yī)臨床常用的相對(duì)固定的兩味藥物的配伍組合，是歷代醫(yī)家長(zhǎng)期臨證的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，也是中藥配伍應(yīng)用中的基本形式。其藥簡(jiǎn)、其理奧、其力專，配合默契，用之中的。在臨床應(yīng)用中具有較強(qiáng)的針對(duì)性、靈活性和適應(yīng)性[8]。當(dāng)歸與熟地是中藥臨床比較常用的藥對(duì)，《本草正》中記載：“熟地黃性平，氣味純凈，故能補(bǔ)五臟之真陰，而又于多血之臟為最要……諸經(jīng)之血虛者，非熟地不可?！碑?dāng)歸甘補(bǔ)質(zhì)潤(rùn)，辛散溫通，入肝、心、脾經(jīng)，善能補(bǔ)血，又能活血，尤為婦科調(diào)經(jīng)良藥。凡一切血虛血瘀之證，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)；虛寒腹痛，跌打損傷，瘀血作痛，痹痛麻木，癰疽瘡瘍；以及血虛腸燥便秘等皆可用。二藥合用，相須配伍，共奏滋補(bǔ)陰精、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之功。當(dāng)歸熟地藥對(duì)體現(xiàn)了中藥相須的相互作用，十分具有代表性[9]。

本研究運(yùn)用高效液相色譜法，分別測(cè)定單味配方顆?；旌虾鬀_泡與“中藥藥對(duì)配方顆粒”沖泡后各組分的化學(xué)有效成分。考察中藥藥對(duì)所含配方的單味顆?；旌虾鬀_泡與“中藥藥對(duì)配方顆粒”沖泡在化學(xué)有效成分上的差異，結(jié)果表明，“中藥藥對(duì)配方顆粒”中有效成分的含量高于單味配方顆?；旌蠜_泡后藥液中的含量，提示當(dāng)歸熟地藥對(duì)的物質(zhì)基礎(chǔ)并不完全是由單味藥的物質(zhì)基礎(chǔ)決定的。中藥配伍在煎煮過(guò)程中由于各類型化合物間的相互作用可能影響其化學(xué)成分的轉(zhuǎn)移及溶出，從而促進(jìn)有效成分的溶出。本研究探索了“中藥藥對(duì)”合煎獲得的“中藥藥對(duì)配方顆?！弊鳛橹兴幓A(chǔ)配伍的可行性與必要性，為中藥配方顆粒的發(fā)展探索新的方向。