復(fù)合酶法提取藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的工藝及其分離提純

張 華，仇宏圖，高青山，王福超, 2*

復(fù)合酶法提取藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的工藝及其分離提純

張 華1，仇宏圖1，高青山1，王福超1, 2*

(1. 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，延吉 133002；2. 錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，錫林浩特 026000)

為提高藍(lán)莓皮渣這一副產(chǎn)品的利用率，通過冷凍干燥技術(shù)，制得藍(lán)莓皮渣粉末，通過單因素試驗(yàn)確定復(fù)合酶比例、酶解溫度、酶解時(shí)間、pH值4個(gè)因素對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的含量的影響，采用響應(yīng)面優(yōu)化得出最優(yōu)提取條件，并進(jìn)行了LC-18SPE分離提純。結(jié)果表明：液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）結(jié)果顯示藍(lán)莓皮渣中大多為酯類物質(zhì)和醛、酮類物質(zhì)；白藜蘆醇最優(yōu)提取條件為料液（乙醇）比1:20（g·mL-1），復(fù)合酶比例（纖維素酶:果膠酶）1:5，酶解溫度54.62 ℃，酶解時(shí)間1 h，pH值5.38，白藜蘆醇提取含量最高為(236 ±0.424) mg·kg-1。利用乙酸乙酯分提含量最高達(dá)到76.61%。

藍(lán)莓皮渣；復(fù)合酶法；白藜蘆醇；分離提純

白藜蘆醇存在于多種植物中，目前，植物提取獲得白藜蘆醇的主要原料為虎杖、葡萄和藍(lán)莓等?；⒄仁莻鹘y(tǒng)的中醫(yī)藥材，加之虎杖資源面臨萎縮，提取成本較大[1]。而葡萄中的白藜蘆醇在各個(gè)組織間分布均不同，在果皮和果梗中含量較多[2]。藍(lán)莓（Blueberry）又稱藍(lán)漿果、越橘，俗稱都市果，屬杜鵑花科越橘屬植物，果實(shí)呈藍(lán)色，含有豐富的營養(yǎng)成分[3-4]，以及含有花青素、綠原酸、槲皮素等多種黃酮類化合物[5-6]，亦含有白藜蘆醇（芪三酚）這一含有芪類結(jié)構(gòu)非黃酮類多酚化合物，一般以白藜蘆醇糖苷和白藜蘆醇兩種主要形式存在。白藜蘆醇是一種天然植物抗毒素，其具有抗腫瘤、抗氧化、降血脂、抗病毒、抗炎、抗癌、抗衰老、抗血栓、保護(hù)血管等多種生物功能[7-8]，這一物質(zhì)被列為目前最有前景的抗心血管、抗癌活性物質(zhì)。常用的白藜蘆醇提取方法有溶劑提取法、超臨界流體萃取、大孔樹脂吸附分離法、微波輔助提取法等[9]。溶劑提取法相比與其他方法有操作簡單、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，但也存在得率低，溶劑浪費(fèi)嚴(yán)重等問題，復(fù)合酶輔助乙醇提取能夠有效提高溶劑利用率，同時(shí)提高產(chǎn)物的得率。

張敏等[10]的研究表明，從虎杖酶解液中萃取白藜蘆醇可使得提取率大幅度提高，李婷等[11]在葡萄皮渣中用酶法輔助乙酸乙酯浸提法提高白藜蘆醇含量。雖然對(duì)于白藜蘆醇的提取已經(jīng)進(jìn)行了廣泛的研究，但是在藍(lán)莓皮渣中進(jìn)行提取分離研究甚少。

鑒于此，本試驗(yàn)使用復(fù)合酶乙醇輔助提取的方法，并通過LC-18SPE進(jìn)行純化，以提高白藜蘆醇含量為目標(biāo)，確定了最佳工藝參數(shù)及純化溶劑，旨在為藍(lán)莓皮渣這一副產(chǎn)品的深加工利用提供新思路，為白藜蘆醇的資源開發(fā)提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 新鮮藍(lán)莓，長白山野生藍(lán)莓；白藜蘆醇R107315-25 g，纖維素酶40 000 U·g-1，果膠酶30 000 U·g-1，均為上海阿拉丁科技有限公司；95%無水乙醇，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備 往復(fù)式恒溫震蕩水浴培養(yǎng)搖床：LC-18SPE：Tubes3 mL柱，美國；冷凍干燥機(jī)：FD-1C-50，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；高效液相色譜儀：LC－2010A HT，島津企管理（中國）有限公司；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：7890A/5975C，美國Agilent公司；紫外燈：WFH-204B，杭州齊威儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備以及白藜蘆醇的定性 將新鮮藍(lán)莓榨汁，過濾后將皮渣置于冷凍干燥盤中均勻薄層鋪開，并封膜，在– 80 ℃冰箱內(nèi)冷凍24 h后，迅速轉(zhuǎn)移至冷凍干燥機(jī)中冷凍48 h后取出，刮粉得初制樣品，于研缽中磨碎，過100目篩，制得樣品備用。以供試品和白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比，用薄層層析法定性白藜蘆醇[12]。

1.2.2 液相色譜和質(zhì)聯(lián)連用（LC-MS）進(jìn)行成分分析 采用液相色譜和質(zhì)聯(lián)連用（LC-MS）對(duì)藍(lán)莓皮渣提取物進(jìn)行分析。其分析條件如下所示：XR-OPS色譜柱（50 mm × 3.3 mm, 2.2 μm），柱溫50 ℃，進(jìn)樣量20 μL，以0.5%的甲酸水溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫。電噴霧離子源（EIS），掃描模式為正負(fù)離子模式并觸發(fā)多級(jí)質(zhì)譜，正離子質(zhì)譜采集范圍（m/z）為70 ～ 700，負(fù)離子采集范圍（m/z）為70 ～ 500。質(zhì)譜檢測(cè)采用ESI正離子模式：霧化氣55 psi，輔助氣55 psi，氣簾氣40 psi，噴霧電壓5 500 V，離子化溫度550 ℃，通過信息依賴性采集模(IDA)激活增強(qiáng)離子掃描（EPI）。一級(jí)質(zhì)譜主要條件為DP，80 V，CE，10 eV，采集范圍100～1 000；二級(jí)質(zhì)譜主要條件IDA，DP，80 V，CE，(30±20) eV，采集范圍50～1 000。

1.2.3 提高藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的單因素試驗(yàn) 精確稱量0.50 g 凍干藍(lán)莓皮渣粉末，在料液比1:20（g·mL-1），酶解溫度50 ℃、pH 5.0 的條件下，酶解3 h[13]，分別按纖維素酶:果膠酶（5:1、2:1、1:1、1:2和1:5）的比例添加復(fù)合酶0.3%至藍(lán)莓皮渣粉中[14]，以白藜蘆醇的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行分析。根據(jù)纖維素酶和果膠酶最優(yōu)比例結(jié)果，在其他試驗(yàn)條件不變情況下，采用不同酶解溫度（40、45、50、55和60 ℃）探究酶解溫度對(duì)白藜蘆醇含量的影響。接著根據(jù)前兩個(gè)條件最優(yōu)結(jié)果，在其他試驗(yàn)條件不變情況下，采用不同酶解時(shí)間（1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 h）進(jìn)行提取，以酶解時(shí)間為橫坐標(biāo)，白藜蘆醇的含量為縱坐標(biāo)作圖，分析酶解時(shí)間對(duì)白藜蘆醇含量的影響。最后在不同pH（3.0、4.0、5.0、6.0和7.0）下進(jìn)行提取，分析不同pH對(duì)白藜蘆醇含量的影響。

1.2.4 提高藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的響應(yīng)面優(yōu)化 影響試驗(yàn)的關(guān)鍵因素主要是復(fù)合酶添加量、反應(yīng)溫度、反應(yīng) pH 值，采用 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)原理，通過響應(yīng)面分析法進(jìn)行三因素三水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，因素與水平設(shè)計(jì)見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平

A. 纖維素酶:果膠酶；B. 反應(yīng)溫度（℃）；C. pH值。

1.2.5 高效液相色譜測(cè)定白藜蘆醇含量 色譜條件為液相色譜柱AgilentTC-C18(2)，250×4.6 mm，5 μm。采用低壓色譜洗脫：流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：超純水：進(jìn)樣量 10 μL；柱溫45 ℃；檢測(cè)波長306 nm；具體低壓梯度洗脫程序參照NY/T2641-2014。以白藜蘆醇標(biāo)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積值為縱坐標(biāo)，白藜蘆醇濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得回歸方程為= 2E + 0.8+ 102.64，2= 0.999 7。白藜蘆醇含量測(cè)定用如下公式：

其中：為試樣中白藜蘆醇的含量（mg·kg-1）；為試樣溶液中白藜蘆醇的濃度（mg·L-1）；為試樣定容體積（mL）；為試樣質(zhì)量（g）；為稀釋倍數(shù)。

1.2.6 LC-18SPE柱分離提純樣品中白藜蘆醇 用體積3 ～ 5 BV純水及乙醇（95%）依次沖洗SPE柱后，將體積5 BV濃度1 mg·mL-1提取液以流速1.5 mL·min-1上樣通入SPE柱中，依次用蒸餾水、體積分?jǐn)?shù)分別為30%、60%和90%的乙醇及100%的乙酸乙酯溶液依次洗脫，測(cè)量流出液中白藜蘆醇的濃度。

1.2.7 數(shù)據(jù)分析 所有數(shù)據(jù)均以獨(dú)立試驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，平行試驗(yàn)3次。采用SPSS 22.0進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，當(dāng)＜0.05時(shí)，被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 薄層層析定性

從圖1中可以看出，在紫外燈（285 nm）下觀察白藜蘆醇標(biāo)品的f值為0.117 6，酸性條件提取藍(lán)莓粉中檢測(cè)出的兩種物質(zhì)，f值分別為0.058 9和0.117 6。凍干藍(lán)莓粉中出現(xiàn)4種物質(zhì)，f值分別為0.058 9、0.117 6、0.441 2和0.529 4。堿性條件提取藍(lán)莓粉在此展開劑中未檢測(cè)出白藜蘆醇，此結(jié)果證明白藜蘆醇適應(yīng)于酸性環(huán)境下提取。

1. 酸性條件纖維素酶提取物；2. 酸性條件果膠酶提取物；3. 酸性條件復(fù)合酶（纖維素酶和果膠酶）提取物；4. 堿性條件纖維素酶提取物；5. 堿性條件果膠酶提取物；6. 堿性條件復(fù)合酶（纖維素酶和果膠酶）提取物；7. 藍(lán)莓皮渣凍干粉纖維素酶提取物；8. 藍(lán)莓皮渣凍干粉纖果膠酶提取物；9. 藍(lán)莓皮渣凍干粉復(fù)合酶（纖維素酶和果膠酶）提取物；10. 白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品。

Figure 1 Identification of resveratrol in blueberry extract under different extract conditions

2.2 凍干藍(lán)莓粉提取物L(fēng)C-MS分析

利用已經(jīng)建立的LC-MS，結(jié)合高分辨率質(zhì)譜IT-TOF-MS對(duì)藍(lán)莓皮渣提取物進(jìn)行分析，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)和chemspider等數(shù)據(jù)庫，共分析17種化合物，其中有7種為酯類物質(zhì)、5種酮類物質(zhì)、2種酸類物質(zhì)、1種烷烴類物質(zhì)、1種呋喃糖和1種醛類物質(zhì)。其具體化合物鑒定見表2。

表2 藍(lán)莓皮渣提取物化學(xué)成分

續(xù)表2

2.3 單因素試驗(yàn)

2.3.1 復(fù)合酶比例的確定 由圖2可知，隨著果膠酶比例不斷增加，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的含量逐漸增大，纖維素酶:果膠酶（1:5）時(shí)，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量達(dá)到最大。說明復(fù)合酶中的果膠酶起決定作用。這是由于果膠酶促進(jìn)細(xì)胞壁的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)被破壞，從而使白藜蘆醇不斷的被溶出[15-17]。預(yù)試驗(yàn)顯示單獨(dú)使用果膠酶藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量顯著低于纖維素酶。Meini等[14]的研究結(jié)果表明纖維素酶和其他酶比例為1:1時(shí)進(jìn)行提取，時(shí)效果最佳。因此，選取具有顯著差異的纖維素酶:果膠酶（5:1）、（1:1）和（1:5）3個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)。

圖2 復(fù)合酶（纖維素酶∶果膠酶）的比例對(duì)藍(lán)莓皮渣白藜蘆醇含量的影響

Figure 2 Effects of compound enzyme ratio (cellulose to pectinase) on resveratrol extraction rate

圖3 不同酶解溫度對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的影響

Figure 3 Effects of different enzymolysis temperature on resveratrol extraction rate

2.3.2 酶解溫度的確定 由圖3可知，隨著反應(yīng)溫度的升高，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的含量呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)，其中50 ℃時(shí)得率最高。這是因?yàn)檫m宜的溫度下，水分子運(yùn)動(dòng)活躍，有利于酶滲透底物而促進(jìn)加快分解細(xì)胞壁。溫度低于酶解最適溫度效果差，而溫度較高會(huì)導(dǎo)致提取物中的多酚類物質(zhì)易分解而致酶活變性，從而得率受到影響[18-19]。又由于溫度在45、50和55 ℃時(shí)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量差異不顯著，綜合考慮，選擇40、50和60 ℃ 3個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)。

2.3.3 酶解時(shí)間的確定 由圖4可知，其中酶解1 h藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量與酶解3 h和4 h無顯著性差異，并顯著高于酶解2 h和5 h的含量。出現(xiàn)這種現(xiàn)象是由于反應(yīng)開始時(shí)，底物濃度大，復(fù)合酶容易快速水解底物，使白藜蘆醇含量增加而快速提高。亦有可能是此提取條件提取的活性物質(zhì)之間發(fā)生了拮抗反應(yīng)，白藜蘆醇在此條件下先與復(fù)合酶結(jié)合反應(yīng)析出，后續(xù)其他物質(zhì)再與酶進(jìn)行反應(yīng)析出[12]。酶解3 h，可能反應(yīng)完全，即此處白藜蘆醇含量再次上升。為節(jié)省時(shí)間，又因?yàn)榕c其他單因素相比，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量影響因素最小，故選擇酶解時(shí)間為1 h。

2.3.4 pH值的確定 由圖5可知，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的含量隨著pH增大，呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，其中pH等于6.0時(shí)，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的含量達(dá)到最大值，但與pH 7時(shí)無顯著性差異。結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)中堿性條件下在藍(lán)莓皮渣中未能提取白藜蘆醇，且已知反式白藜蘆醇含有酚烴基，在堿性條件下生成酚鹽，從而改變白藜蘆醇的結(jié)構(gòu)[20]。因此選擇了pH5.0、6.0和7.0 共3個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)。

圖4 不同酶解時(shí)間對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的影響

Figure 4 Effects of different enzymolysis time on resveratrol extraction rate

圖5 不同pH值對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的影響

Figure 5 Effects of different pH values on resveratrol extraction rate

2.4 藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果

各因素的相互關(guān)系以及相互作用程度可以通過響應(yīng)面圖來反映。對(duì)影響試驗(yàn)的關(guān)鍵因素（復(fù)合添加量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)pH 值）進(jìn)行研究，分別得到的結(jié)果見表3，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表4。

以含量為考核指標(biāo)，通過試驗(yàn)結(jié)果分析各限制因素對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的影響（表4）。使用Design Expert 軟件進(jìn)行二次響應(yīng)面回歸分析，得到多元二次響應(yīng)回歸方程：

=156.38+3.97+23.23+15.76+34.87-8.94,為白藜蘆醇含量預(yù)測(cè)值(mg·L-1)。

表4顯示，模型極顯著（＜0.01），失擬項(xiàng)不顯著（＞0.05），說明方程對(duì)試驗(yàn)擬合較好。分析各方差可得，因素A、A2、AB和B2對(duì)白藜蘆醇含量有極顯著的影響（＜0.01），因素AC對(duì)白藜蘆醇含量有顯著的影響（＜0.05），因素 B、C、BC、C2對(duì)白藜蘆醇含量影響不顯著，說明A、B、C三個(gè)因素之間交互性作用明顯。各因素對(duì)白藜蘆醇含量的影響從大到小依次為A（酶的比例）＞B（反應(yīng)溫度）＞C（酶解時(shí)間）。

表3 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表4 模型分析方差結(jié)果

注: *表示差異顯著（<0.05）；**表示差異極顯著(<0.01)。

圖 6 各因素交互結(jié)果對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的綜合評(píng)分影響的響應(yīng)面圖

Figure 6 Response surface plots showing the interactive effects of various factors on comprehensive evaluation

A. 最優(yōu)條件的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)液相圖；B. 純水洗脫液相圖；C、D和E分別為30%、60% 和90% 乙醇洗脫液相圖；F. 乙酸乙酯洗脫液相圖；R.白藜蘆醇的峰。

Figure 7 LC-18SPE liquid extraction diagram

通過觀察響應(yīng)面的變化（圖6），可以更加清晰地觀察兩因素之間交互作用對(duì)白藜蘆醇含量的影響。當(dāng)復(fù)合酶比例一定時(shí)，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的含量隨著溫度的升高，呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)。

由圖6（a）可知，酶解pH 5時(shí)，反應(yīng)溫度與復(fù)合酶比例對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的交互作用。反應(yīng)溫度一定時(shí)，隨著果膠酶比例的增大，白藜蘆醇的含量逐漸增大；復(fù)合酶比例一定時(shí)，隨著提取溫度的升高，白藜蘆醇含量逐漸升高，達(dá)到一定值后降低。

由圖6（b）可知，酶解溫度為50 ℃時(shí)，酶解pH與復(fù)合酶比例的交互作用。pH一定時(shí)，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量隨著果膠酶比例的的升高呈逐漸上升的趨勢(shì)；復(fù)合酶比例一定時(shí)，白藜蘆醇含量隨著pH增大呈先上升后降低的趨勢(shì)。

由圖6（c）可知，復(fù)合酶比例（纖維素酶:果膠酶（1:5））時(shí)，酶解pH與反應(yīng)溫度對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量的交互作用。當(dāng)pH一定時(shí)，白藜蘆醇含量隨溫度升高呈先上升后降低的趨勢(shì)；提取溫度一定時(shí)，隨著pH的升高，白藜蘆醇含量呈先升高后降低的趨勢(shì)。

通過Box-Behnken得到最高的優(yōu)化組合為：酶的比例（纖維素酶:果膠酶=1:5（g·g-1））、反應(yīng)溫度54.62 ℃、pH 5.38。根據(jù)結(jié)論，進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果測(cè)得，藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇含量為（236±0.424）mg·kg-1，與預(yù)測(cè)結(jié)果值相近。三因素之間交互性作用對(duì)藍(lán)莓皮渣中白藜蘆醇的含量影響顯著，通過觀察，響應(yīng)面分析結(jié)果與單因素結(jié)果趨勢(shì)一致。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果與模型預(yù)測(cè)理論值無顯著差異。說明該工藝準(zhǔn)確性良好，提取工藝穩(wěn)定可靠。

2.5 提取物中白藜蘆醇純化分析

白藜蘆醇（白藜蘆醇苷）的動(dòng)態(tài)脫附試驗(yàn)結(jié)果如圖7 所示。洗脫順序依次為蒸餾水、30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇及乙酸乙酯溶液，LC-18SPE 提純白藜蘆醇分別為C（9.54%）、D（10.48）、E（9.08%）和F（76.61%），B無R峰是因?yàn)檎麴s水只能除去其中糖類、蛋白質(zhì)和易溶性雜質(zhì)。F分提率最好是因?yàn)榱鲃?dòng)相極性降低，白藜蘆醇在此流動(dòng)相中的分配比增大而易脫附。

3 結(jié)論

目前用于提取白藜蘆醇的酶主要有纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶等。酶法提取產(chǎn)品安全性高，生產(chǎn)條件溫和，但由于細(xì)胞壁成分復(fù)雜，選用單一的酶往往不能達(dá)到很高的提取效率，因此根據(jù)不同細(xì)胞壁成分選用合適的復(fù)合酶對(duì)提取率非常關(guān)鍵。提取白藜蘆醇的溶劑提取法有水提法、堿溶酸沉和有機(jī)溶劑法。由于白藜蘆醇較難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，一般的水提法提取效率較低。本研究以藍(lán)莓皮渣為原料，采用復(fù)合酶輔助乙醇提取藍(lán)莓皮渣中的白藜蘆醇，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上通過響應(yīng)面分析法，確定了復(fù)合酶輔助乙醇提取藍(lán)莓皮渣中的白藜蘆醇的最佳工藝條件為：料液（乙醇）比1:20（g·mL-1），復(fù)合酶比例（纖維素酶:果膠酶）1:5，酶解溫度54.62 ℃，酶解時(shí)間1 h，pH值5.38。在此條件下，藍(lán)莓果皮中白藜蘆醇得率為（236 ± 0.424）mg·kg-1。各因素對(duì)藍(lán)莓果皮中白藜蘆醇提取效果影響的主次順序?yàn)椋好傅谋壤痉磻?yīng)溫度＞酶解時(shí)間，比較了幾種有機(jī)溶劑分離提純結(jié)果，提取率由低到高依次為30%乙醇洗脫液＜60%乙醇洗＜90%乙醇＜乙酸乙酯。本研究結(jié)果為天然白藜蘆醇的高效提取提供了一種有效的手段，同時(shí)為開發(fā)具有功能活性的食品添加劑提供了理論基礎(chǔ)?？傮w來看，為藍(lán)莓皮渣的開發(fā)利用以及高附加值的藍(lán)莓副產(chǎn)品深加工產(chǎn)品，建立了有效的提取方法。

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Extraction resveratrol process and fractionation from blueberry peel residue using mulriple enzymes

ZHANG Hua1, QIU Hongtu1, GAO Qingshan1, WANG Fuchao1, 2

(1. School of Agronomy, Yanbian University, Yanji 133002; 2. Xilingol Vocational College, Xilinhaote 026000)

Blueberry peel power (BPP) was obtained by freeze-drying technology to improve the utilization rate of blueberry peel as a by-product. The contents of resveratrol from blueberry powder were determined by single experiments on the ratio of complex enzymes, enzymolysis temperature, enzymolysis time and pH values to explore the optimal conditions, and LC-18SPE was used to separate and purify BPP, which was mainly composed of esters, aldehydes and ketones. The optimal conditions for BPP extraction were based on the ratio of solid (BBP) to liquid (ethanol) of 1:20 (g·mL-1), the ratio of compound enzyme (cellulase: pectinase) of 1:5, enzymolysis at 54.62 ℃ for 1 h with pH value of 5.38, and the extraction rate of resveratrol content was (236±0.424) mg·kg-1. The fractionation content with ethyl acetate was up to 76.61%.

blueberry pericarp; combined-enzyme method; resveratrol; fractionation

S58

A

1672-352X (2021)06-1027-08

10.13610/j.cnki.1672-352x.20211026.001

2021-10-27 15:54:03

[URL] https://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1162.s.20211026.1553.002.html

2021-02-19

高等學(xué)校學(xué)科創(chuàng)新引智計(jì)劃111項(xiàng)目（D20034）資助。

張 華，博士。E-mail：zhanghua@ybu.edu.cn

通信作者:王福超，講師。E-mail：8618504799768@qq.com