血清TK1、ULBP2水平預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者化療效果的臨床研究

程傳耀 解智慧 柴慧芳 秦長(zhǎng)江

結(jié)直腸癌(CRC)發(fā)病率及病死率較高，據(jù)報(bào)道，CRC發(fā)病率占胃腸道腫瘤第三位，且多發(fā)于40歲以上中老年群體，男性發(fā)病率較女性高，近年發(fā)病率呈升高趨勢(shì)[1]。轉(zhuǎn)移是CRC惡化特征，CRC的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移主要是肝臟，約50%的CRC患者發(fā)生術(shù)前或術(shù)后肝臟轉(zhuǎn)移[2]。目前，化療是治療轉(zhuǎn)移性CRC的主要手段之一，可取得一定療效，但仍有部分患者經(jīng)化療效果不佳，預(yù)后較差[3]。因此，尋求可早期預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的新型標(biāo)志物十分必要。胸苷激酶1(TK1)屬于細(xì)胞內(nèi)周期依賴性酶，TK1在增殖旺盛的細(xì)胞中含量顯著升高，據(jù)報(bào)道，TK1活性受到腫瘤增殖影響，可用來(lái)評(píng)估腫瘤增殖程度[4]。UL16結(jié)合蛋白2(ULBP2)是自然殺傷細(xì)胞表面活化性受體，在抗腫瘤免疫及抗感染免疫等中發(fā)揮重要作用，據(jù)報(bào)道，ULBP2在諸多腫瘤疾病患者的血清中呈高表達(dá)[5]。故推測(cè)血清TK1、ULBP2可能參與CRC的發(fā)生及發(fā)展，與化療效果具有潛在聯(lián)系，但目前關(guān)于此類研究較少。本研究主要觀察血清TK1、ULBP2在轉(zhuǎn)移性CRC患者中的表達(dá)，并分析二者預(yù)測(cè)患者化療效果的價(jià)值，為臨床提高CRC化療效果提供依據(jù)。具示如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年10月至2019年12月本院收治的81例轉(zhuǎn)移性CRC患者為研究對(duì)象，本研究得到醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且患者及家屬簽署知情同意書。男性51例，女性30例；年齡49～69歲，平均年齡(60.21±5.19)歲；轉(zhuǎn)移類型：同時(shí)性轉(zhuǎn)移58例、異時(shí)性轉(zhuǎn)移23例；病理類型：結(jié)腸癌50例、直腸癌31例；TNM分期[6]：Ⅰ期～Ⅱ期36例、Ⅲ期～Ⅳ期45例。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①患者均符合《現(xiàn)代腫瘤學(xué)》[7]轉(zhuǎn)移性CRC診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)穿刺或手術(shù)組織病理活檢檢查確診；②入院前未接受手術(shù)或放化療；③預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月；④患者均在本院完成4個(gè)周期的化療(28 d為1個(gè)周期)，且獲得隨訪；⑤精神正常，可溝通交流。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并重要臟器病變或功能不全；②合并其他惡性腫瘤；③伴全身感染性疾病或自身免疫性疾病；④伴凝血功能異常；⑤合并神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

1.3 方法

1.3.1 化療方法 給予患者西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案：西妥昔單抗首次400 mg/m2，靜脈滴注2 h，之后每周維持量250 mg/m2，靜脈滴注1 h，最大滴速≤5 ml/min；治療前30 min給予患者使用靜脈用地塞米松5 mg，肌內(nèi)注射異丙嗪25 mg進(jìn)行預(yù)處理；西妥昔單抗在化療藥物應(yīng)用前使用，第2天開始應(yīng)用化療藥物。FOLFOX4化療方案：靜脈滴注奧沙利鉑85 mg/m2，d1；亞葉酸鈣200 mg/m2，d1～2；5氟尿嘧啶500 mg/m2，d1～5；持續(xù)28 d為1周期，化療4個(gè)周期評(píng)估短期療效。

1.3.2 化療效果評(píng)估及分組方法 化療4個(gè)周期時(shí)，參照實(shí)體瘤相關(guān)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)[8]評(píng)價(jià)患者化療效果，完全緩解：靶病灶完全消失，持續(xù)時(shí)間>1個(gè)月；部分緩解：靶病灶最大直徑×最大垂直直徑縮小≥50%，且持續(xù)時(shí)間>1個(gè)月；穩(wěn)定：靶病灶最大直徑×最大垂直直徑縮小<50%，或增加≤25%；進(jìn)展：靶病灶最大直徑×最大垂直直徑增加>25%或出現(xiàn)新病灶。本研究中將化療效果為完全緩解、部分緩解患者納為緩解組；反之設(shè)為無(wú)效組。

1.3.3 血清TK1、ULBP2水平檢測(cè)方法 采集患者入院時(shí)、化療結(jié)束時(shí)清晨空腹靜脈血5 ml，置于抗凝管中靜置10 min，以2 000 r/min速率離心15 min備用；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清ULBP2、TK1、癌胚抗原(CEA)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 入院時(shí)、化療結(jié)束時(shí)患者血清ULBP2、TK1水平比較

81例結(jié)直腸癌患者化療結(jié)束時(shí)血清ULBP2、TK1水平均較入院時(shí)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 化療效果及患者分組情況

81例轉(zhuǎn)移性CRC患者經(jīng)評(píng)估發(fā)現(xiàn)，12例(14.81%)完全緩解，41例(50.62%)部分緩解，21例(25.93%)穩(wěn)定，7例(8.64%)進(jìn)展。緩解組53例(65.43%)，無(wú)效組28例(34.57%)。

表1 81例結(jié)直腸癌患者化療前后血清ULBP2、TK1水平比較

2.3 2組患者相關(guān)資料比較

2組基線資料、CEA水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；無(wú)效組血清ULBP2、TK1水平高于緩解組(P<0.05)。見表2。

2.4 各指標(biāo)影響轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的Logistic回歸分析結(jié)果

經(jīng)單項(xiàng)Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清ULBP2、TK1過(guò)表達(dá)可能是轉(zhuǎn)移性CRC患者化療無(wú)效的影響因素(OR>1，P<0.05)。見表3。

表2 2組患者相關(guān)資料比較

表3 各指標(biāo)影響轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的Logistic回歸分析結(jié)果

2.5 各指標(biāo)影響轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的多元回歸分析結(jié)果

將轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果作為狀態(tài)變量(1=無(wú)效，0=緩解)，將血清ULBP2、TK1作為協(xié)變量，同時(shí)納入其他基線資料，建立多元回歸模型，在校正性別、年齡、轉(zhuǎn)移類型、病理類型、TNM分期帶來(lái)影響后，結(jié)果顯示，血清ULBP2、TK1過(guò)表達(dá)是結(jié)直腸癌患者化療無(wú)效的影響因素(OR>1，P<0.05)。見表4。

2.6 血清ULBP2、TK1單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的價(jià)值分析

將轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果作為狀態(tài)變量(1=無(wú)效，0=緩解)，將血清ULBP2、TK1作為檢驗(yàn)變量，繪制ROC曲線圖(見圖1)，結(jié)果顯示，當(dāng)血清ULBP2、TK1的cut-off值分別取79.90 ng/l、5.145 pmol/l時(shí)，提示化療效果不良高風(fēng)險(xiǎn)，且此時(shí)血清ULBP2、TK1單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)患者化療效果不良的AUC分別為0.842、0.849、0.879，均有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。見表5。

表4 各指標(biāo)影響轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的多元回歸分析結(jié)果

表5 血清ULBP2、TK1單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的價(jià)值分析

圖1 血清ULBP2、TK1單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果的ROC曲線

3 討論

目前，西妥昔單抗聯(lián)合化療是治療轉(zhuǎn)移性CRC的一線方案，可在一定程度上延長(zhǎng)患者生存期，改善生存質(zhì)量[9]。但仍有部分轉(zhuǎn)移性CRC患者經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化療方案治療后，生存時(shí)間短，化療效果不佳，預(yù)后較差[10]。王玲[11]研究了92例接受西妥昔單抗聯(lián)合化療方案治療的轉(zhuǎn)移性CRC患者化療情況，結(jié)果顯示，42例患者治療效果不佳，占45.65%。本研究中81例轉(zhuǎn)移性CRC患者經(jīng)評(píng)估發(fā)現(xiàn)，28例患者治療無(wú)效，占34.57%，略低于上述研究，可能與患者的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)等因素有關(guān)。但上述結(jié)果均提示轉(zhuǎn)移性CRC患者經(jīng)化療后，仍有部分效果不佳，故尋求新型指標(biāo)預(yù)測(cè)患者化療效果至關(guān)重要。

TK1是DNA合成的關(guān)鍵酶，完整的TK1是四聚體形式，參與細(xì)胞周期DNA合成及損傷修復(fù)調(diào)節(jié)[12]。正常健康人很難檢測(cè)到TK1，但腫瘤患者血清及組織中TK1表達(dá)高，死亡細(xì)胞釋放的TK1進(jìn)入血液循環(huán)，使血清TK1成為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及繁殖的重要標(biāo)志物[13-14]。據(jù)報(bào)道，通過(guò)檢測(cè)血清中TK1含量，可在一定程度上反映患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞增殖情況，對(duì)評(píng)估腫瘤惡性程度、判斷預(yù)后有重要的指導(dǎo)意義[15]。故推測(cè)血清TK1水平對(duì)預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療無(wú)效風(fēng)險(xiǎn)有一定價(jià)值。ULBP是自然殺傷細(xì)胞2族成員D受體(NKG2)的重要活化性配體，一旦機(jī)體受到惡性病變刺激，ULBP與受體相結(jié)合可激活自然殺傷細(xì)胞，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞因子分泌[16]。ULBP2與巨噬細(xì)胞活化程度具有密切關(guān)系，可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬NKG2受體靶細(xì)胞能力，活化天然免疫效應(yīng)細(xì)胞，對(duì)抗腫瘤免疫起到重要作用[17]。研究顯示，在細(xì)胞快速增殖、高分化狀態(tài)下，ULBP2表達(dá)水平明顯升高，目前已證實(shí)，ULBP2在多種腫瘤血清中呈高表達(dá)狀態(tài)[18]。故推測(cè)血清TK1、ULBP2對(duì)預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果均有一定價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，81例轉(zhuǎn)移性CRC患者化療結(jié)束時(shí)血清ULBP2、TK1水平較化療實(shí)施前降低，且化療無(wú)效組血清ULBP2、TK1水平高于緩解組，且經(jīng)回歸分析結(jié)果顯示，血清ULBP2、TK1過(guò)表達(dá)是轉(zhuǎn)移性CRC化療無(wú)效的影響因素，提示血清ULBP2、TK1水平在轉(zhuǎn)移性CRC患者中呈高表達(dá)，經(jīng)規(guī)范化療后，水平有所下降，二者過(guò)表達(dá)可能會(huì)增加轉(zhuǎn)移性CRC化療無(wú)效風(fēng)險(xiǎn)。分析其原因可能為，腫瘤細(xì)胞是典型的高活性細(xì)胞，ULBP2在多種惡性腫瘤中表達(dá)升高，可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并發(fā)揮抗腫瘤免疫機(jī)制參與結(jié)直腸癌發(fā)生及發(fā)展，與患者預(yù)后具有密切聯(lián)系[19]。腫瘤細(xì)胞的復(fù)制及轉(zhuǎn)移與TKI密切相關(guān)，而患者死亡的主要原因是腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，故血清TKI高表達(dá)可在一定程度上反映患者化療效果及預(yù)后情況[20]。本研究最后繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清TK1、ULBP2單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果具有一定價(jià)值，且當(dāng)二者的cut-off值分別取79.90 ng/l、5.145 pmol/l時(shí)，可獲得最佳預(yù)測(cè)價(jià)值，提示血清TK1、ULBP2用于預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果具有潛在價(jià)值。但本研究仍存局限，如未對(duì)血清TK1、ULBP2之間的相關(guān)性進(jìn)行分析，關(guān)于二者是否會(huì)相互影響，共同參與轉(zhuǎn)移性CRC病情發(fā)展并干擾化療效果還需臨床進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，血清TK1、ULBP2過(guò)表達(dá)可能提示轉(zhuǎn)移性CRC患者化療無(wú)效風(fēng)險(xiǎn)，二者對(duì)預(yù)測(cè)CRC患者化療效果有一定價(jià)值，早期監(jiān)測(cè)各指標(biāo)水平，對(duì)早期預(yù)測(cè)、評(píng)估轉(zhuǎn)移性CRC患者化療效果，并指導(dǎo)化療方案調(diào)整及合理制定具有重要意義。