利膽化痰活血方對代謝綜合征大鼠糖脂代謝及血壓的影響*

阮君，尚浩南，劉雨，張強(qiáng)，劉凱利，張力，肖鐵剛，范春香，王兵

1.上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院，上海 200233； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，上海 200082；3.上海市第八人民醫(yī)院，上海 200235； 4.上海市浦東新區(qū)浦南醫(yī)院，上海 200125

代謝綜合征(metabolic syndrome，MS)是肥胖、高血糖(糖尿病或糖調(diào)節(jié)受損)、血脂[三酰甘油(triglyceride，TG)和(或)高密度脂蛋白膽固醇(high density lipid protein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipid protein cholesterol，LDL-C)]異常及高血壓等疾病的臨床證候群，是誘導(dǎo)心腦血管疾病的高危因素。MS患者罹患心腦血管病和2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)與非MS者相比均顯著增加[1]，故MS已成為世界性的公共衛(wèi)生問題。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為與熱、濕、痰、瘀密切相關(guān)[2]。本研究用利膽化痰活血方干預(yù)MS大鼠模型，觀察其對大鼠糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)及血壓的影響，探索中醫(yī)治療MS的新方法。

1 材料

1.1 動物42只SPF級雄性SD大鼠，體質(zhì)量(150±20)g，6～8 周齡，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，許可證號：SCXK(滬)2012-001，倫理號：2018-0119。飼養(yǎng)于上海市第六人民醫(yī)院動物房，SPF 級，飼養(yǎng)室溫度 22～26 ℃，濕度 40%～70%，晝夜明暗交替(12 h/12 h)，每籠4～5只，自由活動，予充足飼料及飲用水。

1.2 飼料高脂高糖高鹽飼料：繁殖鼠料47%、豬油18.9%、膽固醇1.3%、膽鹽0.3%、蔗糖14%、酪蛋白8.7%、食鹽5%、預(yù)混料1.8%、麥芽糊精3%；普通飼料：水分≤10%、粗蛋白質(zhì)≥20.5%、粗脂肪≥4%、粗纖維≤5%、粗灰分≤8%、鈣1.0%～1.8%、總磷0.6%～1.2%、賴氨酸≥1.32%、蛋氨 酸+胱氨酸≥0.78%；購于中國科學(xué)院上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司。

1.3 藥品與試劑利膽化痰活血方顆粒劑(藥物組成：玉米須30 g，虎杖15 g，制半夏6 g，陳皮9 g，丹參15 g)(四川新綠藥業(yè)科技有限發(fā)展公司)。胰島素試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號：20181223)。

1.4 儀器5417R型低溫離心機(jī)(eppendorf公司)；7170S型全自動生化分析儀(日本HITACH公司)；SynergyH4型酶標(biāo)儀(Bio-Tek 公司)；CODA2雙通道無創(chuàng)鼠尾血壓測量儀(美國Kent公司)。

2 方法

2.1 動物分組與給藥方法42只SD大鼠隨機(jī)分為普通飼料喂養(yǎng)的空白組(n=9)和喂養(yǎng)高脂高糖高鹽飲食建立MS大鼠模型[3](n=33)，造模12周后，將造模組分為模型組(n=8)、利膽化痰活血方低劑量組(n=8)、利膽化痰活血方中劑量組(n=8)和利膽化痰活血方高劑量組(n=9)。利膽化痰活血方低、中、高劑量組分別為6.25 g·kg-1、12.5 g·kg-1和25 g·kg-1，空白組和模型組予同體積的生理鹽水，灌胃干預(yù)時(shí)間為6周?？瞻捉M繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，模型組和利膽化痰活血方組均繼續(xù)高脂高糖高鹽飼料喂養(yǎng)。

2.2 相關(guān)指標(biāo)測定

2.2.1 大鼠收縮壓的測定第18周，將大鼠放置在固定器中，調(diào)節(jié)固定器松緊度，固定器放在加熱板的槽上；使大鼠尾巴接入VPC套管和OC套管中，開啟加熱板電源，加熱15 min后(根據(jù)季節(jié)調(diào)整加熱時(shí)間)，開始測量大鼠血壓。測量結(jié)束后，將偏差較大的數(shù)值剔除，取3次數(shù)值均數(shù)，即為收縮壓。單位以mm Hg表示。測量過程中大鼠活動受到限制。

2.2.2 大鼠血清生化指標(biāo)測定第18周末，所有大鼠禁食不禁水12 h，以10%水合氯醛(100 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，抽取腹主動脈血，沿15 mL的EP管壁緩慢注入，室溫靜置3～4 h或4 ℃冰箱過夜靜置，離心半徑8.5 cm，2 500 r·min-1，離心10 min，分離血清，4 ℃保存。用全自動生化分析儀測定血清中總膽固醇(total cholesterol，TC)、TG、HDL-C、LDL-C、空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)水平。

2.2.3 大鼠空腹胰島素測定用ELISA法檢測大鼠空腹血清的胰島素(fasting serum lisulin，F(xiàn)INS)水平。

2.2.4 大鼠胰島素抵抗指數(shù)(insulin resistant index，IRI)根據(jù)FBG和FINS計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(IRI)。

IRI=FPG×FINS/22.5

2.2.5 大鼠肝臟HE染色大鼠以10%水合氯醛麻醉后，取大鼠左葉肝臟放入4%多聚甲醛溶液，制備組織切片。

3 結(jié)果

3.1 利膽化痰活血方對MS大鼠收縮壓水平影響與空白組比較，模型組收縮壓顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，利膽化痰活血方高劑量組可顯著降低收縮壓(P<0.01)，利膽化痰活血方低、中劑量組有降低收縮壓的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。提示利膽化痰活血方可降低MS大鼠血壓，且高劑量組效果最佳。見表1。

表1 各組大鼠收縮壓比較

3.2 利膽化痰活血方對MS大鼠血脂的影響與空白組比較，模型組血清TC、LDL-C顯著升高(P<0.01)，TG明顯升高(P<0.05)，HDL-C有降低的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與模型組比較，利膽化痰活血方高劑量組血清TC、TG均明顯降低(P<0.05)，LDL-C顯著降低(P<0.01)；利膽化痰活血方低、中劑量組血清TC、TG、LDL有降低的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；利膽化痰活血方各劑量組血清HDL-C變化不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠血脂比較

3.3 利膽化痰活血方對MS大鼠糖代謝水平影響與空白組比較，模型組大鼠FBG、FINS和IRI水平顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，利膽化痰活血方高劑量組FBG水平顯著降低(P<0.01)，F(xiàn)INS和IRI明顯降低(P<0.05)；利膽化痰活血方低、中劑量組FBG、FINS和IRI水平有降低的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表3。

表3 各組大鼠空腹血糖、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)比較

3.4 利膽化痰活血方對肝臟脂肪變的影響空白組細(xì)胞形態(tài)正常，排列有序；模型組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞形態(tài)不均一，腫大或壞死，細(xì)胞核被擠至一邊，可見大量大小不等的脂滴和炎性浸潤；利膽化痰活血方高劑量組可見少量脂滴空泡，空泡形狀較小，胞漿豐富。見圖1。

注：A：空白組；B：模型組；C：利膽化痰活血方高劑量組圖1 各組大鼠肝組織HE染色(×200)

4 討論

《醫(yī)學(xué)求是》云：“少陽為中氣之樞紐，樞軸運(yùn)動，中氣得以運(yùn)行”；《黃帝內(nèi)經(jīng)》載：“凡十一藏取決于膽”。劉渡舟教授認(rèn)為：“凡十一藏取決于膽”內(nèi)涵包括五臟的神志活動取決于膽和膽疏泄五臟六腑氣血兩個(gè)方面[4]。肝膽、脾胃同居中焦，膽雖為六腑之一，其性為降，肝膽共主疏泄，為氣機(jī)升降之樞，能夠維持全身氣機(jī)疏通暢達(dá)，具有通而不滯、散而不郁的作用，保證機(jī)體多種生理功能正常發(fā)揮。只有氣機(jī)調(diào)暢，才能充分發(fā)揮肺、脾、腎在水液代謝中的作用。少陽膽既是人體氣機(jī)升降出入的樞紐，也是人體陰陽出入的樞紐，膽腑疏泄正常，對全身的新陳代謝具有促進(jìn)和調(diào)節(jié)作用[5]。根據(jù)MS臨床表現(xiàn)特點(diǎn)及中醫(yī)文獻(xiàn)資料，多將其歸于“肥滿”“肥胖”“脾癉”等范疇[6]。痰濕與血瘀是MS的重要病理基礎(chǔ)[7-10]，肝膽疏泄異常，三焦功能失司，則少陽樞機(jī)不利，五臟功能失調(diào)，機(jī)體氣血津液運(yùn)化、輸布失常，致氣滯、痰阻、血瘀而發(fā)為本病。宗文靜等[11]認(rèn)為痰瘀互結(jié)與MS關(guān)系密切；馬麗娜·阿新拜認(rèn)為痰濕內(nèi)蘊(yùn)是MS的主要中醫(yī)證候要素[12]；韓強(qiáng)研究表明以重、濁、黏、滯為主要特征的痰濕體質(zhì)類型與MS相關(guān)[13]。因此，課題組提出“少陽樞機(jī)不利為MS發(fā)病之本，痰瘀為重要病理基礎(chǔ)”觀點(diǎn)[14]，繼而探索利膽化痰活血方對MS的臨床影響。

本研究所用利膽化痰活血方由玉米須、虎杖、陳皮、制半夏和丹參5味中藥組成。玉米須的活性成分為黃酮類、多糖類、甾體衍生物、玉米黃素、皂苷類、生物堿類、和脂肪酸類[15-18]。黃酮類為玉米須降血糖的主要活性成分[19]，其有降血糖、抗氧化、清除自由基、抗病毒等藥理作用。研究者認(rèn)為[20]，玉米須的抗氧化作用能夠減輕四氧嘧啶對胰島β細(xì)胞損傷程度，從而提高胰島的分泌功能達(dá)到降血糖作用。玉米須可能通過調(diào)節(jié)AKT1和 INSR蛋白參與胰島素信號通路或AMPK信號通路對抗2型糖尿病[21]。有研究表明[22]以虎杖、玉米須為主的痰濕方治療非酒精性脂肪肝炎能改善患者的臨床癥狀和肝功能，降低脂肪沉積，是治療NASH較為有效的藥物。虎杖苷可改善糖尿病誘導(dǎo)的心肌損傷和胰島素抵抗，可能通過激活SIRT1/PGC-1ɑ信號通路調(diào)節(jié)胰島素信號傳導(dǎo)作用[23]；另基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究虎杖活性成分可能通過參與調(diào)控胰島素抵抗、PPAR信號通路及調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞中的脂肪分解等信號通路調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，從而實(shí)現(xiàn)降血脂的作用[24]。黃連溫膽湯含有半夏、陳皮，主要用于治療膽胃不和、痰熱內(nèi)擾之證，具有調(diào)血脂，改善胰島素敏感性、降糖、抗炎的作用，并可運(yùn)用于代謝性疾病的治療中。半夏瀉心湯對由于胰島素抵抗和/或胰島素分泌缺陷引起慢性血糖升高的2型糖尿病有治療效果[25]；白術(shù)、陳皮、半夏、茯苓、蒼術(shù)是改善胰島素抵抗的基本方[26]。丹參酮Ⅰ能改善胰島素抵抗Hep G2細(xì)胞，其機(jī)制可能是通過抑制PTP1B的表達(dá)促進(jìn) P-AKT/AKT 的活化[27]。

基于以上文獻(xiàn)，結(jié)合本研究結(jié)果，利膽化痰活血方灌胃6周后，MS模型大鼠血清TC、TG、LDLC、FBG、FINS、IRI及收縮壓均有下降，肝臟脂肪病變程度明顯減輕。說明利膽化痰活血方可改善MS模型大鼠糖脂代謝紊亂，并有降低收縮壓作用，能夠治療MS相關(guān)組分疾病，為日益增多的MS人群的治療提供了新的可能性。目前公認(rèn)胰島素抵抗是MS的主要發(fā)病機(jī)制之一[28]，且高血壓發(fā)生也與胰島素抵抗使胰島素刺激血管舒張劑亞硝酸鹽產(chǎn)生有關(guān)[29]。因此，我們推測利膽化痰活血方的作用機(jī)制可能與改善胰島素抵抗有關(guān)，下一步將繼續(xù)深入研究。