電針揚刺對大鼠創(chuàng)面修復及血清炎性因子表達的影響

陳榮良，杜偉斌，胡華輝，沈福祥，曹國平，全仁夫

(浙江中醫(yī)藥大學附屬江南醫(yī)院，蕭山中醫(yī)院·浙江 杭州 311201)

皮膚是人體與外界環(huán)境的首道屏障，組成免疫系統(tǒng)的重要部分[1]。多種創(chuàng)傷如燒燙傷、切割傷、研磨傷等，均可使皮膚缺損；而皮膚缺損后難以愈合成為臨床的難點[2-3]。一般認為皮膚的自我更新及修復可分為炎性反應(yīng)-細胞增殖分化-組織重塑3 個階段[4-5]。針灸尤其是電針揚刺作為一種綠色療法，在調(diào)動皮膚內(nèi)源性電流、糾正創(chuàng)面內(nèi)環(huán)境、加速創(chuàng)面修復方面有顯著的功效，但其內(nèi)在作用機制尚不明確[6-7]。本研究以電針揚刺為干預手段，以大鼠皮膚缺損創(chuàng)面為對象，觀察其療效及對其治療前后血清相關(guān)炎性因子的表達，從炎性反應(yīng)階段入手探究針灸修復皮膚缺損的作用及機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級2月齡SD大鼠20只，體質(zhì)量(220±20)g，雌雄各半，由浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(滬)2017-0005。SPF級分籠飼養(yǎng)，濕度50%～70%，溫度20～24 ℃，每日 12 h光照，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進行實驗。

1.2 試劑和儀器 TNF-α、IL-1β、IL-6試劑盒：Assay公司，美國。Varioskan Flash 全波長多功能酶標儀：Thermo公司，美國。一次性華佗牌針灸針、韓式電針儀：蘇州醫(yī)療用品廠。

1.3 模型制備 參考Ansell.DM[8]方法制備全層皮膚缺損大鼠模型。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，造模前禁食水12 h，麻醉，常規(guī)5 點固定，脊椎左或右側(cè)旁2 cm作為造模區(qū)域，剪毛、脫毛處理，碘伏消毒，打孔器將造模區(qū)中心皮膚進行全層切除，直徑約1.5 cm，深及皮下，碘伏消毒包扎，制成皮膚全層缺損模型。分置單籠喂養(yǎng)，喂飼標準飼料，維持傷口干燥、預防感染。

1.4 動物分組及處理 20 只大鼠按隨機數(shù)字表法隨機均分成模型組和電針組。模型組僅予每日碘伏消毒包扎。電針組在造模后當日即給予電針揚刺治療：選取創(chuàng)面中心一點和創(chuàng)面邊緣正常皮膚0.5 cm處上下左右各一點，給予毫針(0.20 mm×13mm)針刺，不施針刺手法，然后連接韓氏治療儀進行治療，負極位于中心，正極位于上下左右，頻率2 Hz，輸出電流0.6～1 mA，以毫針出現(xiàn)輕顫為度，每日1 次，每次28 min。

1.5 觀察指標

1.5.1 行為學觀察 造模后每天觀察并記錄大鼠的存活數(shù)目、精神狀況、反應(yīng)能力、攝食攝水量等。

1.5.2 創(chuàng)面面積測定 游標卡尺測量并計算各組3、7、14 d創(chuàng)面面積和愈合率。創(chuàng)面面積愈合率=(治療前創(chuàng)面面積一治療后創(chuàng)面面積)/治療前創(chuàng)面面積×100%。

1.5.3 血清TNF-α、IL-1β、IL-6檢測 ELISA檢測。分別于術(shù)后第3天、第7天電針治療1 h后,大鼠眼眶后靜脈叢取血,離心(3 000 r/min,10 min)分離血清,部分血清于-80 ℃冰箱中保存,備用。按照試劑盒使用說明書進行操作。

2 結(jié)果

2.1 2 組大鼠一般行為學觀察結(jié)果 實驗動物在術(shù)后首日普遍精神較差，可能源于因麻醉、驚嚇等原因，之后各組實驗動物攝食量、攝水量均不同程度好轉(zhuǎn)并逐漸恢復至正常水平，無實驗動物死亡。

2.2 2 組大鼠創(chuàng)面愈合情況觀察結(jié)果 見表1。

表1 2 組大鼠術(shù)后3、7、14 d創(chuàng)面愈合情況比較

2.3 2組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平檢測結(jié)果 見表2。

表2 2組大鼠術(shù)后3、7d血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平比較

3 討論

有研究認為，正常無損傷的皮膚往往維持有一種“皮膚電池”作用，而當皮膚一旦受損，正常的經(jīng)上皮電位就會短路，電流自損傷上皮底部流出，損傷處的邊緣由此形成穩(wěn)定的電流，這種電流的負極通常指向受損皮膚表皮的深層部分，被認為是損傷性的內(nèi)源性電場[9-10]。而在大部分慢性難愈性創(chuàng)面表面，發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性電場強度變?nèi)?，這種現(xiàn)象啟發(fā)了外加微電流促進創(chuàng)面修復的治療方案。皮膚損傷后創(chuàng)面組織和體內(nèi)出現(xiàn)大量炎癥反應(yīng)，這些過度的炎癥反應(yīng)及其介質(zhì)如未得到有效抑制，將導致細菌的滋生，不利于創(chuàng)面修復[11-12]。因此，皮膚損傷后如何抑制過度的炎癥反應(yīng)是加速創(chuàng)面修復的重要手段。Gürgen等[13]對大鼠皮膚缺損創(chuàng)面進行2 Hz、15 min的電刺激后，發(fā)現(xiàn)在真皮、肉芽組織、毛囊、皮脂腺的TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎性細胞因子都明顯減少，證明電刺激可抑制皮膚損傷的炎癥反應(yīng)，從而縮短創(chuàng)面愈合時間。

中醫(yī)學將皮膚創(chuàng)傷歸類于“潰瘍”“金瘍”“折瘍”范疇。周代就有關(guān)于瘡瘍的詳細記載，并出現(xiàn)了獨立的?？啤Ｗ鳛樽鎳t(yī)學的瑰寶，針灸在治療骨傷科、皮膚科疾病方面發(fā)揮重要作用。揚刺法源自于《靈樞·官針》：“揚刺者，正內(nèi)(納)一，傍內(nèi)(納)四而浮之，以治寒氣之博大者也”。具有舒經(jīng)活絡(luò)、消腫散結(jié)、益氣補血之功效；適用于病變范圍大、病變位置較淺的病癥。而電針刺激療法則是針刺聯(lián)合電刺激，具有兩者的雙重效益[14]。

本研究基于創(chuàng)面穩(wěn)態(tài)電流原理，將揚刺法和電刺激的雙重優(yōu)勢巧妙結(jié)合應(yīng)用，重建皮膚損傷區(qū)損傷性內(nèi)源性電場，改善局部微循環(huán)，并以此結(jié)果探討電針揚刺對創(chuàng)面修復及血清相關(guān)炎性因子表達的影響。研究結(jié)果顯示：①3 d后兩組大鼠創(chuàng)面都有少許愈合，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；7 d和14 d后電針組愈合面積和愈合率均較模型組高，且相較7 d，14 d電針組創(chuàng)面愈合效果更佳，組內(nèi)、組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；提示電針揚刺加速了創(chuàng)面修復過程。②3 d和7 d后電針組血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量均少于模型組，且隨著治療次數(shù)/時間延續(xù)，炎癥因子進一步降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；說明電針揚刺對炎癥反應(yīng)具有抑制作用。

綜上所述，通過電針揚刺能夠糾正損傷性內(nèi)源性電場失衡現(xiàn)象，重建創(chuàng)面穩(wěn)態(tài)電流回路，有效加速創(chuàng)面修復，降低促炎因子的表達水平是其作用機制之一。然而皮膚組織修復是一個復雜的過程，包含了炎癥反應(yīng)、再上皮化、肉芽組織新生、早期血管化等一系列演變，尚仍需進一步深入研究。