ARID1A、PIK3CA表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌關(guān)系及發(fā)病因素分析

高秀娟 張雅麗 莊新榮 張桂香

承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(067000)

子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病率為10%～20%[1]，相關(guān)性卵巢癌(EAOC)[2]是子宮內(nèi)膜異位癥較常見的惡性病變，早期發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位惡化，對降低病死率、提升疾病診斷效率并提早干預(yù)具有重要意義[3]。AT豐富結(jié)合域1A基因(ARID1A)[4]是染色質(zhì)重塑復(fù)合物SWI/WNF家族的重要一員，可以通過改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)來調(diào)控靶基因的表達(dá)，在多種腫瘤中表達(dá)降低。調(diào)查顯示[5]，10%的子宮內(nèi)膜異位癥患者存在ARID1A突變。磷脂酰肌醇-3-激酶催化亞單位α基因(PIK3CA基因)[6]是較常見的腫瘤基因，廣泛參與腫瘤細(xì)胞的凋亡、細(xì)胞周期等。本研究通過分析ARID1A、PIK3CA表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌的關(guān)系及危險因素，為臨床診斷提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以本院2016年1月—2020年5月收治的85例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為研究對象，另選非子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性卵巢癌患者80例作為對照。入選標(biāo)準(zhǔn)：①符合卵巢癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，即內(nèi)異癥和癌組織在同一病變中；病灶部位腫瘤來自于異位內(nèi)膜組織，排除其他惡性腫瘤轉(zhuǎn)移；存在類似子宮內(nèi)膜周圍腺體上皮組織特征；鏡檢發(fā)現(xiàn)存在向惡性過渡的組織學(xué)證據(jù)；②本院手術(shù)治療，術(shù)后病理由本院確診為卵巢透明細(xì)胞癌或卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌；③臨床資料完整，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病理證實為其他部位惡性腫瘤轉(zhuǎn)移；②術(shù)前接受放療、化療或免疫治療；③臨床病例資料不全；④存在嚴(yán)重心、肝等器質(zhì)性病變及嚴(yán)重心腦血管疾病、傳染性疾病。本研究經(jīng)倫理委員會通過。

1.2 檢測方法

所有研究對象入組后取外周靜脈血，抗凝取血漿，通過QIAAMP DNA Blood Mini Kit純化血漿DNA，-20℃保存待測。根據(jù)Genebank發(fā)布的人ARID1A、PIK3CA基因序列采用Primer 5.0軟件分別對相關(guān)位點設(shè)計引物。ARID1A上游引物設(shè)定為5'-TACATCTGGCTACTGGGTGTCGTATC-3'，下游引物設(shè)定為：5'-TCGCAGGGTCCGAGGTATTC-3'，PIK3CA基因上游引物采用正向5’-ATACCGCTCGAGCCTCCTGCATCCTTTCTT-3’下游采用反向5’-ATACCGCTCGAGCCTGTGTGCCTTTTTCCTTCC-3’進行擴增。PCR反應(yīng)體系為25 μl，其中含10xbuffer 2.5μl、dNTPS 1μl、Taq DNA聚合酶0.4 μl、DNA模板1μl、引物1μl、ddH20補足。擴増方法：95℃條件下預(yù)變性5min，94℃變性30s，50～60℃退火30s，72℃延伸10min，一共35個循環(huán)。以U6作為內(nèi)參基因，使用2-△△CT計算相對表達(dá)量。檢測試劑由上海吉馬制藥技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較3組ARID1A、PIK3CA表達(dá)，采用ROC曲線分析ARID1A、PIK3CA水平對子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌的診斷效率；比較EAOC組與OEM組年齡、初潮年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、孕次、產(chǎn)次、臨床表現(xiàn)(腹部不適、陰道出血、盆腔疼痛)、卵泡刺激素差異，分析子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病危險因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較

85例子宮內(nèi)膜異位癥患者中，子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性卵巢癌(EAOC組)45例，年齡(35.7±7.4)歲，體質(zhì)指數(shù)(BMI)(24.0±1.4)kg/m2；卵巢-子宮內(nèi)膜異位癥(OEM組)40例，年齡(35.9±7.4)歲，BMI(23.9±1.4)kg/m2。根據(jù)美國生殖協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)，EAOC組Ⅰ-Ⅱ期22例、Ⅲ-Ⅳ期23例，OEM組Ⅰ-Ⅱ期19例、Ⅲ-Ⅳ期21例。對照80例(non-EAOC組)，年齡(35.7±7.4)歲，BMI(2.1±1.9)kg/m2；Ⅰ-Ⅱ期41例，Ⅲ-Ⅳ期39例；漿液性腫瘤44例，粘液性腫瘤36例。3組患者年齡、BMI無差異(F=13.654，P<0.05)。

2.2 各組ARID1A、PIK3CA表達(dá)水平比較

通過兩兩比較，ARID1A、PIK3CA表達(dá)水平從高到低依次為EAOC組、non-EAOC組、OEM組(P<0.05)(表1)。

表1 各組ARID1A、PIK3CA相對表達(dá)量比較

2.3 ARID1A、PIK3CA對子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌的診斷效能

診斷效能分析，ARID1A聯(lián)合PIK3CA診斷子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌靈敏度高于單獨檢測。通過ROC曲線分析，ARID1A、PIK3CA診斷臨界值分別為44.56及40.06(表2)。

表2 各指標(biāo)診斷子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌效能分析

2.4 子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病單因素分析

EAOC組年齡、絕經(jīng)率、卵泡刺激素、腹部不適、陰道出血、盆腔疼痛等發(fā)生率高于OEM組，初潮年齡小于OEM組(均P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者一般臨床資料比較

2.5 子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病多因素分析

多因素分析，患者年齡大、絕經(jīng)、FSH高、盆腔疼痛、腹部不適、陰道出血及初潮年齡小均為子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病的獨立危險因素(表4)。

表4 子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病多因素分析

3 討論

多項研究已經(jīng)證實，子宮內(nèi)膜異位癥與卵巢癌的發(fā)病密切相關(guān)[8-9]。異位于卵巢的子宮內(nèi)膜表現(xiàn)一種惡性腫瘤標(biāo)志的單克隆細(xì)胞增殖方式，同時在異位增生病變的多年刺激下，子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病風(fēng)險顯著升高。目前研究發(fā)現(xiàn)EAOC的發(fā)生涉及多個因素，包括基因突變、激素、氧化應(yīng)激和炎癥免疫等多個方面，但具體發(fā)病機制仍不清楚[10]。關(guān)注EMs導(dǎo)致EAOC的分子機制，盡早從EMs患者中發(fā)現(xiàn)惡變傾向，可為EAOC的預(yù)防和早期診斷提供新依據(jù)。

本研究ARID1A、PIK3CA表達(dá)水平，從高到低依次為EAOC組、non-EAOC組以及OEM組。有研究[11]認(rèn)為，10%的子宮內(nèi)膜異位癥患者存在ARID1A突變，且在EAOC中突變率>30%，但在高級別漿液性卵巢癌和黏液性癌中卻沒有發(fā)現(xiàn)ARID1A基因突變。ARID1A基因在機體正常細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)錄、復(fù)制以及修復(fù)甲基化過程中發(fā)揮重要作用，該基因的突變在一定程度上會造成腫瘤細(xì)胞增生，進而引發(fā)疾病惡化。解剖學(xué)研究中[12]，在局部病灶部位的腫瘤、過渡帶以及與之相連的典型子宮內(nèi)膜異位癥病灶部位，均會發(fā)現(xiàn)ARID1A基因的顯著性突變，而在病灶部位遠(yuǎn)端ARID1A基因突變不明顯。殷子然等[13]通過對卵巢子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞分析，ARID1A基因突變情況顯著，與本研究相互印證。PIK3CA基因的改變已在多種腫瘤組織的疾病進展中得到驗證，其可通過PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的有效調(diào)節(jié)，進而發(fā)揮腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞活動以及黏附作用[14]；同時，PIK3CA水平還與細(xì)胞的支架結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞間物質(zhì)運輸密切聯(lián)系。韋枝紅等[15]分析認(rèn)為，PIK3CA水平對子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病有顯著促進性作用。

本文對子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌的發(fā)病行多因素分析，患者年齡大、絕經(jīng)、FSH水平高、盆腔疼痛、腹部不適、陰道出血以及初潮年齡小均為造成患者子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌發(fā)病的獨立危險因素。分析認(rèn)為，隨著患者年齡增大，子宮內(nèi)膜萎縮程度升高，局部免疫能力下降，對腫瘤細(xì)胞的自我清除能力顯著下降。而初潮年齡較小在一定程度上會加劇子宮內(nèi)膜的炎性反應(yīng)以及氧化應(yīng)激反應(yīng)，進一步促進局部病灶部位的惡變。而作為卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的疾病發(fā)作，其較高的雌激素水平是最重要發(fā)病原因，一定程度反映了患者的子宮內(nèi)膜負(fù)荷。在疾病進展過程中，局部子宮內(nèi)膜碎片隨著血液循環(huán)進入輸卵管，進而造成患者的臨床癥狀，進一步加劇惡變風(fēng)險。

本研究ROC曲線分析，子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌的ARID1A、PIK3CA診斷臨界值分別為44.56及40.06，可為臨床預(yù)測子宮內(nèi)膜惡變提供一定參考。

綜上所述，子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)卵巢癌患者ARID1A、PIK3CA表達(dá)水平升高；在對患者診療中，針對年齡較大、絕經(jīng)、FSH水平較高、盆腔疼痛、腹部不適、陰道出血以及初潮年齡較小的患者，應(yīng)予以關(guān)注并盡早干預(yù)，提升疾病的早期確診率。