Survivin和Fas在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及臨床意義*

廖文莉，馬 韻

(1.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科)

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中最常見(jiàn)的一種類型，占西方國(guó)家成人非霍奇金淋巴瘤的30%～40%，發(fā)展中國(guó)家高達(dá)60%，兒童所占的比例在10%以下[1-3]。目前，已發(fā)現(xiàn)淋巴瘤的發(fā)生和發(fā)展與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切。細(xì)胞凋亡及其調(diào)控基因異常不僅參與腫瘤的發(fā)生，還會(huì)影響腫瘤的生物學(xué)行為。在西方國(guó)家DLBCL的生發(fā)中心B細(xì)胞(GCB型)以及活化B細(xì)胞(ABC,即non-GCB型)中[3-4]，有不同的凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)機(jī)制，這是否同樣出現(xiàn)在我國(guó)的DLBCL中值得進(jìn)一步研究。

我們對(duì)170例DLBCL標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè)，旨在探討本地DLBCL的免疫類型分布狀況、凋亡相關(guān)蛋白Survivin和Fas表達(dá)情況及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院診治的DLBCL 170例蠟塊。所有病例均由2名以上病理專家根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)復(fù)查。其中，男100例，女70例，男女比例1.4∶1；中位年齡51歲(18～81歲)；結(jié)內(nèi)36例，結(jié)外134例。對(duì)其中具有完整臨床資料和隨訪資料的94例患者，自病例確診日期起計(jì)算生存期，中位隨訪時(shí)間為15個(gè)月(0～40個(gè)月)。

1.2 免疫組織化學(xué)方法

免疫組織化學(xué)均采用S-P法，第一抗體分別為濃縮型兔抗人Fas單克隆抗體(SC-715)、濃縮型兔抗人Survivin單克隆抗體(ZA-0530)。以上第一抗體試劑均購(gòu)自北京中杉公司，S-P試劑盒購(gòu)自博奧森公司。將DLBCL分為GCB型和non-GCB型兩組[3-4]。

1.3 結(jié)果判斷

免疫組化染色陽(yáng)性反應(yīng)為黃-棕色顆粒并且明顯高于背景染色。兩人雙盲法觀察切片，在10×40倍光鏡下觀察10個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞較多的視野，計(jì)算其均值，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞。以上均用磷酸鹽緩沖洗液(PBS)代替第一抗體作陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)根據(jù)屬性采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析。表達(dá)率的比較和相關(guān)分析用χ2檢驗(yàn)，P<0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Survivin和Fas在DLBCL中的表達(dá)情況

Survivin蛋白陽(yáng)性染色定位于腫瘤細(xì)胞漿或細(xì)胞核中，F(xiàn)as蛋白陽(yáng)性染色定位于腫瘤細(xì)胞膜上，為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒，在DLBCL中陽(yáng)性表達(dá)免疫組化檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1(封二)。通過(guò)兩兩比較，Survivin和Fas的表達(dá)陽(yáng)性率之間有明顯差異(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 Survivin和Fas在170例DLBCL中的表達(dá)[n(%)]

2.2 Survivin與Fas在DLBCL不同免疫類型中的分布情況

本研究170例DLBCL中，GCB型27例(15.9%)，non-GCB型143例(84.1%)。Survivin與Fas在non-GCB型中的陽(yáng)性率均高于GCB型中，其中Fas在兩組中的陽(yáng)性率有明顯差異(P<0.01)，見(jiàn)表2。

表2 Survivin和Fas在DLBCL不同免疫類型中的分布情況[n(%)]

2.3 Survivin和Fas與DLBCL患者臨床特征的關(guān)系

我們對(duì)Survivin和Fas的表達(dá)陽(yáng)性率與DLBCL患者臨床病理特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Survivin表達(dá)的陽(yáng)性率在發(fā)病部位(淋巴結(jié)內(nèi)外)有差別，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表3。對(duì)Survivin和Fas的表達(dá)陽(yáng)性率與DLBCL患者的生存期分析發(fā)現(xiàn)：Survivin表達(dá)陽(yáng)性者生存期為(27.681±2.467)月，表達(dá)陰性者為(31.501±2.064)，陽(yáng)性者生存期較短；而Fas表達(dá)陽(yáng)性者生存期為(30.200±3.679)月，表達(dá)陰性者為(27.932±1.705)月，陰性者具有更短的生存期。

表3 Survivin和Fas表達(dá)與DLBCL發(fā)病部位的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

細(xì)胞凋亡是由基因控制的細(xì)胞主動(dòng)有序的死亡，它在生物體的進(jìn)化、維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的調(diào)節(jié)作用。細(xì)胞凋亡調(diào)控的異常使細(xì)胞的轉(zhuǎn)化突變得以積蓄，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和演進(jìn)[5]。細(xì)胞凋亡過(guò)程很復(fù)雜，涉及多基因激活、表達(dá)以及調(diào)控等過(guò)程，這些凋亡相關(guān)蛋白基因種屬之間既保守又相關(guān)，Survivin和Fas是近年來(lái)研究熱門的基因，因其在凋亡紊亂過(guò)程中的作用與淋巴瘤的發(fā)生及多重耐藥都有關(guān)聯(lián)[6]。

Survivin基因是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的凋亡抑制基因，F(xiàn)as是細(xì)胞凋亡的膜表面分子。本研究發(fā)現(xiàn)Survivin高表達(dá)、Fas低表達(dá)是DLBCL的普遍現(xiàn)象，并且Survivin在結(jié)外的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于節(jié)內(nèi)的表達(dá)，而Fas在節(jié)內(nèi)外的表達(dá)差異性不明顯，以上發(fā)現(xiàn)對(duì)于淋巴瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義。研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)Survivin與Fas在non-GCB型中的陽(yáng)性率均高于GCB型，其中Fas在兩組中的陽(yáng)性率有明顯差異(P<0.01)，提示Fas高表達(dá)可能含抑制Survivin并影響腫瘤的增殖和凋亡。結(jié)合臨床資料分析，發(fā)現(xiàn)Survivin表達(dá)陽(yáng)性者生存期較陰性者較更短；而Fas表達(dá)陰性者生存期較陽(yáng)性者更短，這可以獨(dú)立于臨床參數(shù)之外作為判斷DLBCL預(yù)后的輔助因子。

綜上所述，由于Survivin和Fas作用于凋亡途徑的環(huán)節(jié)不同，但在凋亡途徑上有相關(guān)性，我們認(rèn)為檢測(cè)Survivin和Fas的表達(dá)對(duì)評(píng)價(jià)DLBCL不同免疫亞型有互補(bǔ)作用，還可以成為針對(duì)性地設(shè)計(jì)或選擇適宜的分子治療靶點(diǎn)的參考依據(jù)。故檢測(cè)Survivin和Fas表達(dá)可以作為DLBCL臨床嚴(yán)重程度的參考指標(biāo)，有助于腫瘤的精準(zhǔn)治療，以便提高療效，延長(zhǎng)患者的生存期。