微粉中藥“藿芪散”對(duì)小鼠外周血T 細(xì)胞亞群（CD4+/CD8+）的影響

劉 迎，史萬(wàn)玉

（1.河北交通職業(yè)技術(shù)學(xué)院 050091；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)學(xué)院 071001）

黃芪是多年生草本植物，具有補(bǔ)脾氣，固表止汗，利尿消腫，脫毒生肌等功效。 淫羊藿能補(bǔ)腎壯陽(yáng)，祛風(fēng)除濕。 治陽(yáng)痿不舉，小便淋瀝，筋骨攣急，半身不遂，腰膝無(wú)力，風(fēng)濕痹痛，四肢不仁。

藿芪散由中藥淫羊藿和黃芪按照一定比例配伍而成，本試驗(yàn)通過(guò)研究 “藿芪散” 對(duì)小鼠外周血T 淋巴細(xì)胞亞群 （CD4+/CD8+）比例的影響情況，來(lái)探討該復(fù)方對(duì)動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用， 同時(shí)比較分析超微粉制劑相較于中藥傳統(tǒng)制劑的優(yōu)勢(shì)， 為隨后開(kāi)發(fā)藿芪散超微粉成為飼料添加劑提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥“藿芪散”

試驗(yàn)用淫羊藿和蒙古黃芪均購(gòu)自河北安國(guó)藥材市場(chǎng)。 中藥“藿芪散”由淫羊藿和黃芪按一定比例組方后，用普通粉碎機(jī)粉碎，過(guò)24 目篩即得到普通粗粉；再將普通粗粉用進(jìn)行超微粉碎，過(guò)300 目篩即為微粉。

藿芪散微粉與粗粉與分別用藥鍋武火熬制沸騰，再用文火水煎煮30min，經(jīng)8 層紗布過(guò)濾，重復(fù)上述煎藥過(guò)程一次，合并兩次中藥煎液，濃縮至每毫升相當(dāng)于原生藥1g，置4°冰箱備用。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明雌性小鼠49 只，體重22～25g，購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.3 主要試劑及藥品

小鼠CD4-FITC、CD8-PE 單克隆抗體：為Pharmingen 產(chǎn)品

1.1.4 主要儀器設(shè)備

BFM-6 貝利微粉機(jī) 濟(jì)南倍力粉技術(shù)有限公司

Epics-XL II 型流式細(xì)胞儀 Beckman coulter 公司

1.2 分組與給藥

49 只雌性昆明小鼠，隨機(jī)等分為7 組，即生理鹽水對(duì)照組(NS 組)、粗粉低劑量組（CL 組）、粗粉中劑量組（CM 組）、粗粉高劑量組（CH 組）、微粉低劑量組（WL 組）、微粉中劑量組（WM 組）、微粉高劑量組（WH 組）。生理鹽水對(duì)照組小鼠經(jīng)胃灌服生理鹽水0.4mL 只/天，低、中、高劑量組每只小鼠每天分別經(jīng)胃灌服1:1 的“藿芪散”粗粉、微粉煎液0.2mL、0.4mL 和0.6mL/只/天，共灌藥6d。

1.3 CD4+/CD8+的測(cè)定

于給藥6d 后的24h，摘除小鼠眼球采血，用肝素抗凝(50U/mL )， 每管0.1mL， 分為2 管， 分別加入小鼠CD4-FITC 單抗和CD8-PE 單抗，充分混合，室溫下避光孵育45min，用細(xì)胞洗液洗滌2 次，1 000rpm， 2min， 棄上清液， 加稀釋的熒光標(biāo)記抗體0.1mL，室溫下避光孵育45min，洗1 次，棄上清液，余約0.5mL 細(xì)胞懸液，加固定液50μL.以上操作在室溫下進(jìn)行，標(biāo)本以臺(tái)盼藍(lán)染色，死細(xì)胞＜5%。 在EPICS-XLII 型流式細(xì)胞儀上測(cè)定，用Expo32ADC 進(jìn)行免疫熒光數(shù)據(jù)分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 20.0 軟件包進(jìn)行處理， 并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1“藿芪散”對(duì)小鼠CD4+/CD8+的影響

表1 “藿芪散”對(duì)小鼠CD4+/CD8+的影響

表1 結(jié)果表明，“藿芪散” 粗粉和微粉的各個(gè)劑量均不同程度的提高小鼠外周血T 淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8+的比例， 其中超微粉低劑量組和粗粉中劑量組均顯著升高了小鼠外周血T 淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8+的比例(P＜0.01，或P＜0.05 )。原因可能是中藥經(jīng)超微處理后，比表面積增大，粒度更加細(xì)微均勻，藥物與胃粘膜的接觸面積增大；同時(shí)細(xì)胞破壁率高，有效成分溶出率加大，從而被小鼠更好的吸收利用，而微粉的中、高劑量可能又超過(guò)了合適劑量。 相對(duì)于超微粉中藥，粗粉中藥的粒度較大，有效成分溶出較低，所以微粉低劑量便達(dá)到了粗粉中高劑量的效果。

3 討論

機(jī)體免疫的重要途徑之一是細(xì)胞免疫，尤其是依賴(lài)T 淋巴細(xì)胞亞群的相互協(xié)作和相互制約，其中CD4+、CD8+T 細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用尤為至關(guān)重要。 正常動(dòng)物體內(nèi)CD4+，CD8+淋巴細(xì)胞存在一定比例，使機(jī)體免疫功能處于平衡穩(wěn)定的狀態(tài)。 從中獸醫(yī)角度理解，即為“陰平陽(yáng)秘，精神乃治”。 一旦這種平衡被打亂，則導(dǎo)致T 淋巴細(xì)胞亞群比例失衡。 若CD4+/CD8+比例升高，說(shuō)明正相免疫調(diào)節(jié)占優(yōu)勢(shì)，機(jī)體處于高的免疫狀態(tài)；CD4+/CD8+比例下降，說(shuō)明負(fù)相免疫調(diào)節(jié)占優(yōu)勢(shì)，可導(dǎo)致機(jī)體免疫狀態(tài)失衡，產(chǎn)生免疫功能紊亂，可能導(dǎo)致免疫疾病發(fā)生[1]。

已有研究結(jié)果表明， 淫羊藿和黃芪作為飼料添加劑混入畜禽飼料中，可提高動(dòng)物免疫力和生產(chǎn)性能，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育等方面的作用。

范領(lǐng)斌[2]在雛雞的飲水中連續(xù)42d 分別加入不同劑量的淫羊藿水煎液(0.5、1.0、1.5、0g/kg·d)，測(cè)雞的增重、料肉比和免疫器官指數(shù)。 結(jié)果表明，淫羊藿可使雞的體重增加，料肉比降低和免疫指數(shù)升高。 張運(yùn)強(qiáng)[3]等在基礎(chǔ)日糧上按日糧重量比例添加制備的黃芪與淫羊藿多糖硫酸酯， 研究表明該中藥混合物可以在不影響小鼠體質(zhì)量的同時(shí)在一定程度上調(diào)節(jié)小鼠的免疫指標(biāo)和提升血清的總抗氧化水平。 王小玲[4]等研究表明，淫羊藿苷能有效促進(jìn)股骨骨折大鼠骨折愈合，且藥物濃度越高作用越好。 劉國(guó)林[5]等研究表明，圍產(chǎn)期奶牛日糧中添加100g/(頭·d)黃芪(1∶1)時(shí)能提高奶牛的免疫力。 王憲舉[6]等研究表明，在日糧中添加黃芪粉可以提高藏羊生產(chǎn)性能并改善羊肉品質(zhì)。 安勝英[7]等研究表明，在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%黃芪提取物，能明顯提高蛋雞產(chǎn)蛋率，降低畸形蛋數(shù)、料蛋比。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，黃芪含豐富的黃芪多糖、氨基酸、甙類(lèi)、氨基酸等多種有效成分，可活化機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。 淫羊藿含黃酮類(lèi)化合物、木脂素、生物堿、揮發(fā)油等成分，能促進(jìn)造血功能和免疫功能，具有抗衰老、抗腫瘤等功效。

本試驗(yàn)結(jié)果中藿芪散可顯著提高小鼠外周血T 淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8+的比例，這可能與方劑中富含上述成分有關(guān)。

綜上所述，藿芪散能顯著提高小鼠外周血CD4+/CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群的比例， 微粉低劑量即可達(dá)到與粗粉中高劑量相當(dāng)?shù)男Ч?本試驗(yàn)為藿芪散超微粉成為飼料添加劑方面提供了科學(xué)的參考依據(jù)。