枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激肉雞睪丸抗氧化功能影響

熊永潔，賀紹君，劉德義，王喜峰，魏 霖，李 靜，胡倩倩（安徽科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院 233100）

當(dāng)前， 規(guī)?；怆u的飼養(yǎng)幾乎都是采用集約化的養(yǎng)殖模式，長途運(yùn)輸、疫苗免疫、溫度變化、飼養(yǎng)密度等眾多因素往往會引起雞群的應(yīng)激[1]。 熱應(yīng)激作為夏季肉雞養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中最為常見的一種不利應(yīng)激， 應(yīng)激發(fā)生后通常會引起雞的采食量急劇降低、生長與增重緩慢、免疫抑制。 持續(xù)或嚴(yán)重的熱應(yīng)激甚至能夠造成雞只的大量死亡。 熱應(yīng)激發(fā)生后，動物機(jī)體自身原有的氧化與抗氧化的平衡狀態(tài)被破壞，抗氧化功能出現(xiàn)紊亂，最終引起雞群發(fā)病[2]。 枯草芽孢桿菌作為一種益生菌，相關(guān)研究表明枯草芽孢桿菌能夠有效提高熱應(yīng)激時肉雞的采食量，降低料肉比，進(jìn)而提高雞群的整體成活率，并能顯著提高屠體的肉品質(zhì)量[3]。 為進(jìn)一步研究枯草芽孢桿菌在熱應(yīng)激引起肉雞繁殖性能下降過程中的保護(hù)作用，本實驗從睪丸抗氧化的角度出發(fā)，研究在雞的日糧中添加適量的枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激時雞睪丸抗氧化功能的影響， 以期為防治夏季熱應(yīng)激對雞繁殖性能造成的危害提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

枯草芽孢桿菌飼料添加劑（有效含量：2×1010CFU/g，北京科為博公司）；GSH-Px、SOD、MDA 快速實驗室檢測試劑盒（南京建成生物公司）。 其余所用試劑均為國產(chǎn)分析純，由安徽科技學(xué)院動物醫(yī)學(xué)實驗中心統(tǒng)一采購提供。

1.2 方法

1.2.1 雞的飼養(yǎng)與管理 21 日齡的健康科寶肉雞60 只，隨機(jī)分為三組：正常組（Con）、熱應(yīng)激組（HS）、熱應(yīng)激+枯草芽孢桿菌組(HS+BS)。 正常組按照商品化肉雞飼養(yǎng)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的正常溫度飼養(yǎng)， 熱應(yīng)激組、 熱應(yīng)激+枯草芽孢桿菌組的飼養(yǎng)溫度為33℃±1℃，相對濕度55%±5%。 試驗期間各組均為自由飲水，正常組和熱應(yīng)激組飼喂商品化的日糧，熱應(yīng)激+枯草芽孢桿菌組在商品化日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑，試驗進(jìn)行21d。

1.2.2 睪丸組織采集與抗氧化功能指標(biāo)的測定 在雞飼養(yǎng)至42d 結(jié)束時， 于每組雞中隨機(jī)選擇5 只進(jìn)行采樣前的預(yù)處理，即禁食12h，禁水8h。 預(yù)處理后處死采集睪丸，迅速置于液氮罐內(nèi)保存。 隨后按照GSH-Px、SOD、MDA 檢測試劑盒中附帶的說明書，分別進(jìn)行相應(yīng)抗氧化指標(biāo)的測定。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 使用SPSS17.0 統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析，單因素方差分析法（LSD 法）進(jìn)行組間的多重分析比較，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示無明顯差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組間GSH-Px 活力分析與比較

不同處理組的雞睪丸組織中GSH-Px 的活力見表1。

表1 枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激雞睪丸組織中GSH-Px 活力的影響（U/mL）

從表1 可以看出，在雞42d 時，熱應(yīng)激處理組的雞睪丸組織中的GSH-Px 酶活力與正常飼養(yǎng)組相比顯著下降(P＜0.05)；但熱應(yīng)激+枯草芽孢桿菌組與熱應(yīng)激處理組相比較，GSH-Px 的酶活力顯著上升(P＜0.05)。

2.2 各組間SOD 活力分析與比較

不同處理組的雞睪丸組織中SOD 的活力見表2。

從表2 可以看出，在雞42d 時，熱應(yīng)激處理組的雞睪丸組織中的SOD 酶活力與正常飼養(yǎng)組相比顯著下降(P＜0.05)；但熱應(yīng)激+枯草芽孢桿菌組與熱應(yīng)激處理組相比較，SOD 的酶活力顯著上升(P＜0.05)。

表2 枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激雞睪丸組織中SOD 活力的影響（U/mL）

2.3 各組間MDA 含量檢測與比較

不同處理組的雞睪丸組織中MDA 的含量見表3。

表3 枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激雞睪丸組織中MDA 含量的影響（nmol/mL）

從表3 可以看出，在雞42d 時，熱應(yīng)激處理組的雞睪丸組織中的MDA 含量與正常飼養(yǎng)組相比顯著上升(P＜0.05)； 但熱應(yīng)激+枯草芽孢桿菌組與熱應(yīng)激處理組相比較，MDA 含量顯著降低(P＜0.05)。

3 結(jié)論與討論

雞發(fā)生熱應(yīng)激時，機(jī)體中一系列的生理生化、機(jī)能代謝均會受到嚴(yán)重影響而發(fā)生紊亂，最終導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量的自由基，當(dāng)過量的自由基超過機(jī)體的處理與清除能力時， 就會進(jìn)一步干擾和破壞動物正常的生理生化代謝過程和生理功能。 對于飼養(yǎng)的種雞， 熱應(yīng)激對繁殖功能造成的損傷往往嚴(yán)重影響雞的種用價值，進(jìn)而降低養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。 本實驗研究了枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激飼養(yǎng)條件下雞的睪丸抗氧化功能關(guān)鍵指標(biāo)的影響，為科學(xué)、合理地使用枯草芽孢桿菌制劑防治家禽熱應(yīng)激提供理論依據(jù)。

3.1 枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激雞睪丸組織中GSH-Px 活性的影響

GSH-Px 是動物體內(nèi)分解和清除過氧化物的一種重要抗氧化酶，其通過分解GSH 形成GSSG，從而使體內(nèi)有害的過氧化物轉(zhuǎn)變?yōu)闊o毒無害的化合物，同時加速過氧化氫的分解，使細(xì)胞膜在氧化條件下能夠維持結(jié)構(gòu)的完整性， 并保持正常的生理功能不受氧化因子的侵害[4]。 熱應(yīng)激能夠引起機(jī)體組織器官中GSHPx 的酶活力降低，導(dǎo)致動物組織器官的抗氧化能力下降。本試驗的研究結(jié)果顯示， 熱應(yīng)激顯著降低了雞睪丸組織中GSH-Px 的酶活力，而在日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑可以顯著增強(qiáng)睪丸組織中的GSH-Px 酶活力， 表明枯草芽孢桿菌能夠通過增強(qiáng)睪丸中GSH-Px 的酶活力進(jìn)而提高雞睪丸的抗氧化能力，從而降低熱應(yīng)激對公雞繁殖性能造成的危害。

3.2 枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激雞睪丸組織中SOD 活性的影響

SOD 作為生物體內(nèi)抗氧化酶家族的重要成員之一，能夠使超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)形成氧和過氧化氫， 從而調(diào)節(jié)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡。 動物機(jī)體在新陳代謝等一系列生理生化反應(yīng)過程中會不，同程度地產(chǎn)生有害的自由基，但由于體內(nèi)SOD 對自由基能夠起到清除作用，不會引起自由基的過量蓄積，最終使機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除處于一種動態(tài)平衡之中。 但是， 一些病理因素如應(yīng)激常常會引起體內(nèi)自由基的大量異常增加。 當(dāng)自由基的產(chǎn)生速度超過SOD 對其的清除能力時，動物的細(xì)胞、組織和器官等就會出現(xiàn)氧化損傷，進(jìn)而表現(xiàn)出疾病等異常癥狀。 本研究結(jié)果顯示，雞在熱應(yīng)激的環(huán)境中，其睪丸組織中的SOD 酶活力明顯降低。 表明雞在面臨熱應(yīng)激時，其體內(nèi)的SOD大量消耗，SOD 的產(chǎn)生以及代謝活性受到了熱應(yīng)激的影響。而在日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑能夠顯著提高雞睪丸組織中SOD 的酶活力，增強(qiáng)睪丸的抗氧化能力。

3.3 枯草芽孢桿菌對熱應(yīng)激雞睪丸組織中MDA 含量的影響

現(xiàn)有研究已經(jīng)證明， 機(jī)體在遭受熱應(yīng)激時會產(chǎn)生大量的自由基， 自由基與組織中的脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)后進(jìn)一步產(chǎn)生大量的MDA，最終導(dǎo)致組織中的蛋白質(zhì)和核酸等功能性分子發(fā)生交聯(lián)聚合化反應(yīng)，從而損傷組織器官正常的生理功能。 有研究顯示應(yīng)激能夠引起家禽體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物MDA 的含量升高、誘發(fā)氧化損傷而影響組織器官生理功能的正常發(fā)揮。 本試驗結(jié)果顯示，熱應(yīng)激時雞睪丸中的MDA 含量顯著增加，這與前人的研究結(jié)果相一致。日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑可顯著降低雞睪丸組織中MDA 的含量，表明枯草芽孢桿菌能通過抑制熱應(yīng)激時雞睪丸中MDA 的產(chǎn)生，進(jìn)而緩解熱應(yīng)激對雞睪丸生理功能的損傷。

以上結(jié)果表明，雞發(fā)生熱應(yīng)激后，睪丸的抗氧化能力顯著降低，日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌可有效增強(qiáng)睪丸的抗氧化能力，提高雞的種用價值。