雙氯芬酸鈉乳膏處方的優(yōu)化及體外釋放度考察

趙曉軍，劉影

(1.錦州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院；2.錦州醫(yī)科大學，遼寧 錦州 121000)

雙氯芬酸鈉屬于非甾體類抗炎藥，具有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎的作用，其鎮(zhèn)痛活性是吲哚美辛的6倍，阿司匹林的40倍。解熱作用是吲哚美辛的2倍，阿司匹林的350倍。臨床上用于緩解類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、痛風性關節(jié)炎，是疼痛發(fā)作期的常規(guī)用藥。該藥口服吸收快，半衰期短，達峰時間快，臨床療效好， 但在水中溶解度較小，對胃腸道的刺激性較大，患者不易耐受，降低了雙氯芬酸鈉的藥物療效，限制了該藥在治療骨關節(jié)腫痛方面的廣泛使用[1-2]，本實驗將雙氯芬酸鈉制成軟膏劑局部外用給藥。軟膏劑可以避免口服藥可能發(fā)生的肝首過效應及胃腸滅活，提高療效；能夠維持恒定的最佳血藥濃度，減少胃腸給藥的副作用；還可以延長作用時間，減少給藥次數(shù)；通過改變給藥面積調(diào)節(jié)給藥劑量，減少個體內(nèi)和個體間差異，患者可以自主用藥也可以隨時停藥[3]。一般劑型一日多次給藥后所產(chǎn)生的血藥濃度峰谷波動性不易避免，即便是口服用的緩釋劑型也排除不了胃腸道吸收部位的差異，而透皮給藥制劑采用比較穩(wěn)定的皮膚局部用藥，在給藥期間的吸收總量和速度不會出現(xiàn)明顯的改變。

1 材 料

1.1 儀器設備

L-2000型高效液相色譜儀(日本日立分光公司)；HLD型電子天平(上海力辰科技有限公司)；85-2WS型磁力攪拌器(上海滬析有限公司)；電熱鼓風干燥箱(易誠儀器設備有限公司)；BCD-235WE3CX型美菱冰箱(合肥美菱股份有限公司)；SN-LSC離心機(鹽城市凱特實驗儀器有限公司)；微孔濾膜(深圳逗點生物科技有限公司)；透皮滲透吸收儀(上海玉研科學儀器有限公司)。

1.2 試劑

雙氯芬酸鈉原料藥(批號:20180927,廣州楊葉生物科技有限公司)；雙氯芬酸鈉對照品(批號:20180723，深圳恒豐萬達醫(yī)藥科技有限公司)；吐溫80(江蘇省海安石油化工廠)、十八醇(江蘇省海安石油化工廠)、單硬脂酸甘油酯(天山藥業(yè))；羊毛脂(天山藥業(yè))、凡士林(南昌白云藥業(yè)有限公司)、甘油(天津市致遠化學試劑公司)、山梨酸鉀(天津市致遠化學試劑公司)；乙腈(深圳恒豐萬達醫(yī)藥科技有限公司)、甲醇(深圳恒豐萬達醫(yī)藥科技有限公司)、冰醋酸(河南凱帝榮譽出品)。

1.3 動物

小鼠、家兔均由錦州醫(yī)科大學動物養(yǎng)殖處提供。

2 實驗過程

2.1 乳膏劑的制備

2.1.1 雙氯芬酸鈉乳膏劑的質(zhì)量評估方法：(1)潤滑無刺激、黏稠度適中、均勻且細膩、易于涂布；(2)耐熱試驗與耐寒試驗：將雙氯芬酸鈉軟膏劑放在乳膏盒中，在60 ℃的烘箱中放置6 h，-20 ℃的冰箱中放置24 h，取出乳膏待恢復到室溫，觀察乳膏是否出現(xiàn)發(fā)硬、油水分層、合并與破裂等現(xiàn)象；(3)離心實驗：取雙氯芬酸鈉乳膏劑適量放在離心管中，在5000 r/min的速度下離心共25 min，觀察離心試驗后的乳膏劑是否會出現(xiàn)水油分離的現(xiàn)象[4-5]。

2.1.2 通過初步篩選，吐溫80(A)、凡士林(B)、羊毛脂(C)、十八醇(D)是決定雙氯芬酸鈉乳膏劑穩(wěn)定性的主要因素，將以上4個組分作為考察因素，每個因素設置3個水平[6-7]，見表1。

表1 正交設計因素與水平表

按照正交設計表L9(34)進行試驗，共構成9組配方，每個處方總量為10 g，按照2.1.1項下雙氯芬酸鈉乳膏劑的質(zhì)量評估方法進行評分，外觀性狀占10分，離心實驗占10分，耐熱耐寒試驗占10分，正交試驗設計結果見表2。

表2 雙氯芬酸鈉乳膏處方的正交試驗設計與結果

正交設計表中R值越大對試驗結果影響越大，k值最大者為最佳因素，根據(jù)表2結果，通過直觀分析可以看出各因素對雙氯芬酸鈉乳膏劑穩(wěn)定性的影響順序為吐溫80>凡士林>羊毛脂>十八醇，即A>B>C>D，乳膏劑的最佳處方為A2、B3、C1、D1。

通過方差分析得出因素A、B的P值<0.05，說明差異有統(tǒng)計學意義，因素C對試驗結果有影響，因此A和B是主要的因素，C和D 是次要的因素，最佳處方為A2、B3、C1、D1，見表3。

2.1.3 防腐劑的選擇：吐溫80能與羥苯酯類、季銨鹽類等絡合進而抑制防腐劑的效能，使防腐劑失去活性，因此本實驗選用山梨酸作為防腐劑，用量約為0.20%。

2.1.4 透皮吸收促進劑的選擇：良好的透皮促進劑應該對皮膚沒有任何刺激作用，沒有藥理作用，不致敏皮膚，物理化學性質(zhì)均穩(wěn)定，易溶于藥物和材料，起效快，作用時間長。本實驗選用月桂氮卓酮為促滲透劑，其有效濃度常在1%～6%范圍內(nèi)。

表3 雙氯芬酸鈉乳膏劑的方差分析結果

2.1.5 最終處方：經(jīng)查閱文獻[8-9]及市場上已有外用制劑雙氯芬酸鈉的含量為0.9%～1.3%，本處方將雙氯芬酸鈉含量定位1%，因此最終處方為雙氯芬酸鈉0.1 g，硬脂酸0.7 g，吐溫80為0.5 g，十八醇 0.8 g，羊毛脂1.0 g，凡士林 0.95 g，甘油1.0 g，月桂氮卓酮0.5 g，山梨酸鉀0.02 g，去離子水加至10 g。

2.1.6 軟膏劑制備：按照2.1.5項下處方量將硬脂酸、十八醇、羊毛脂、凡士林、月桂氮卓酮加熱到80 ℃熔化為油相，雙氯芬酸鈉、甘油、吐溫80、山梨酸鉀、去離子水加熱到80 ℃溶化為水相，使油相和水相均完全溶解，然后將水相緩慢的加入到油相中，邊加水相邊攪拌，直到冷凝即得乳膏劑。

2.1.7 驗證試驗：按最優(yōu)處方制備雙氯芬酸鈉乳膏，按照2.1.1項的方法對乳膏劑進行穩(wěn)定性考察，結果顯示所制得的雙氯芬酸鈉乳膏劑符合質(zhì)量要求。

2.2 雙氯芬酸鈉乳膏劑的體外透皮實驗

2.2.1 色譜柱：C18柱(260 mm×4.7 mm)；流動相：甲醇0.005 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH =3.8) (70∶30) ，檢測波長280 nm；取對照品溶液10 μL注入液相色譜儀[10]，見圖1。

2.2.2 制備標準曲線：精密稱取雙氯芬酸鈉對照品10 mg，置于50 mL量瓶中使雙氯芬酸鈉溶解，用甲醇稀釋至刻度。然后用甲醇分別稀釋成濃度為0.24、0.4、0.8、2.4、4.8、7.2 μg/mL的溶液，采用高效液相色譜法測定，雙氯芬酸鈉在此范圍內(nèi)線性方程為y=81345.1259x+21423.1893，r=0.9999。

2.2.3 儀器精密度試驗：精密吸取儲備液5.0 mL，配成濃度為5.0 μg/mL的雙氯芬酸鈉溶液，重復進樣3次，雙氯芬酸鈉峰面積的RSD為0.87%。

圖1 雙氯芬酸鈉對照品色譜圖

2.2.4 體外透皮試驗：取小鼠將其斷頸處死，用剪刀將小鼠腹部體毛剃凈，再用硫化鈉溶液脫掉剩余鼠毛，取腹部無損傷處皮膚，用0.9%的氯化鈉溶液沖洗小鼠皮膚內(nèi)表面，把處理好的小鼠皮膚放在擴散池上室和下室中間，角質(zhì)層應朝向上方，甲醇作為接收液，取0.5 g雙氯芬酸鈉乳膏均勻涂布于小鼠皮膚上，擴散池放在37 ℃水浴中攪拌，分別于2、4、6、8、10、12 h 取樣，取樣后同時補加同溫度等體積的接受液[11-16]。樣品用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取10 μL樣品注入高效液相色譜儀計算累積滲透量(Q)，計算公式如下，見表4。

表4 雙氯芬酸鈉乳膏劑的累積滲透量(Q)

時間(h)累積滲透量(μg/cm2)123平均值(μg/cm2)225.6426.5826.8926.37434.5335.5235.8235.29645.1844.8945.7345.27857.5658.2857.7357.861071.2670.8771.5471.221283.4784.2384.3984.03

以累積滲透量Q(μg/cm2)對時間(t)制作的曲線可知雙氯芬酸鈉乳膏劑的滲透量隨時間的延長逐漸增大，且?guī)缀醯人俾试黾?，回歸方程為Q=5.8383t+12.472，R2=0.9940，P<0.05，說明雙氯芬酸鈉乳膏劑具有很好的滲透性，見圖2。

2.3 雙氯芬酸鈉乳膏劑的皮膚刺激性試驗

取家兔16只，雌雄各半，給藥前24 h剃凈背部脊椎兩側兔毛，分為完整皮膚組和破損皮膚組。其中8只完整皮膚組隨機分成兩組，即空白對照組、雙氯芬酸鈉乳膏組，分別將1 g乳膏均勻涂抹于背部脊椎兩側，另8只家兔用注射針在完整皮膚上劃出數(shù)條劃痕以滲血為宜，分組及給藥方法同正常皮膚組，每8 h給藥1次，24 h后用生理鹽水清洗掉乳膏劑。分別于給藥后1、24、48、72 h時觀察涂抹部位有無紅斑和水腫等情況及恢復情況[17-20]。

圖2 雙氯芬酸鈉乳膏劑的釋放曲線

試驗結果表明完整皮膚刺激試驗中涂抹雙氯芬酸鈉乳膏與涂抹空白乳膏的家兔皮膚均未出現(xiàn)紅斑和水腫，表明雙氯芬酸鈉乳膏無刺激性。破損皮膚刺激試驗中在劃痕區(qū)涂抹雙氯芬酸鈉乳膏和空白乳膏后，均未見紅斑及水腫，同樣表明雙氯芬酸鈉乳膏無刺激性。

3 討 論

在實際應用中發(fā)現(xiàn)乳膏長期貯存后有時會出現(xiàn)破乳、分層、絮凝等不穩(wěn)定現(xiàn)象，本實驗采用正交設計法優(yōu)化雙氯芬酸鈉乳膏處方，結果表明本處方可以有效避免乳膏劑的不穩(wěn)定問題。

吐溫80為雙氯芬酸鈉乳膏的主乳化劑，其用量關系到乳膏制劑的穩(wěn)定性和有效性；凡士林化學性質(zhì)穩(wěn)定，無刺激性，但僅能吸收5%的水，加入適量的羊毛脂可提高凡士林吸水性與滲透性，兩者合用可以起到很好的保濕作用，十八醇既可作輔助乳化劑，又具有調(diào)節(jié)乳膏稠度的作用，提高軟膏劑的穩(wěn)定性能。

常用的透皮吸收促進劑有表面活性劑、二甲基亞砜及其類似物、月桂氮卓酮等，表面活性劑類促進滲透效果差，連續(xù)應用后會引起紅腫、干燥或粗糙化。二甲基亞砜長時間大量應用對皮膚有刺激性和惡臭，甚至引起肝損害和神經(jīng)毒性等，通過透皮滲透實驗表明選用月桂氮卓酮為促滲透劑效果良好。

體外透皮滲透實驗結果表明雙氯芬酸鈉軟膏劑具有良好的滲透性能，且對完整皮膚及破損皮膚均無刺激性,進而更好的發(fā)揮臨床作用。