子宮內(nèi)膜癌中Matriptase、HAI-1及uPA的表達(dá)及臨床意義*

薛秀珍 熊麗麗 范麗麗 焦 娜 馬會(huì)峰 代娟霞 賈源君 張鏞鏞

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南省洛陽(yáng)市 471000

在我國(guó)，作為繼宮頸癌之后第二種常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，子宮內(nèi)膜癌占婦科惡性腫瘤的 20%～30%，部分發(fā)達(dá)城市的子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率已達(dá)婦科惡性腫瘤第一位。且10%～20%早期子宮內(nèi)膜癌術(shù)后的轉(zhuǎn)移，中晚期的子宮內(nèi)膜癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，仍然是子宮內(nèi)膜癌預(yù)后不良的主要問(wèn)題[1]。子宮內(nèi)膜癌的臨床參數(shù)，如疾病的分期、核分級(jí)、組織學(xué)亞型和腫瘤大小與疾病的預(yù)后相關(guān)。目前從分子遺傳學(xué)角度分析其預(yù)后，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是個(gè)復(fù)雜的病理過(guò)程，包括細(xì)胞基質(zhì)的降解、組織重建、信號(hào)傳導(dǎo)等。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)新型Ⅱ型絲氨酸蛋白酶(Matriptase)、尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)及其同源性抑制物肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子活化因子抑制劑1(Hepatocyte growth factor activator inhibitor-1，HAI-1)在多種上皮源性惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及侵襲過(guò)程中相互作用[2]。鑒于此，結(jié)合子宮內(nèi)膜癌同為上皮源性腫瘤的理論基礎(chǔ)，推測(cè)Matriptase、HAI-1及uPA在子宮內(nèi)膜癌中也可能表達(dá)異常，但相關(guān)的研究較少，尚無(wú)明確定論，本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase、HAI-1及uPA的表達(dá)情況，結(jié)合子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征進(jìn)行分析，為患者的預(yù)后及治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源及臨床資料 選取 2016年1月—2018 年6月在我院病理科存檔的內(nèi)膜組織石蠟標(biāo)本160例，術(shù)前未接受放、化療及激素類(lèi)藥物治療，無(wú)其他器官的原發(fā)惡性腫瘤，其中正常子宮內(nèi)膜組：因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)，術(shù)后經(jīng)病理確診的正常子宮內(nèi)膜組織40例，平均年齡(51.06±5.21)歲。不典型增生組：全子宮切除或子宮內(nèi)膜電切術(shù)，術(shù)后經(jīng)病理確診為子宮內(nèi)膜不典型增生50例，平均年齡(51.89±6.14)歲。子宮內(nèi)膜癌組(選擇患者有淋巴清掃指征或術(shù)前影像學(xué)提示淋巴腫大，故給予子宮雙附件切除術(shù)+盆腹腔淋巴結(jié)清掃術(shù))：術(shù)后病理確診為子宮內(nèi)膜癌組織70例，平均年齡(51.23±5.97)歲，按 FIGO(2000) 臨床病理分期標(biāo)本劃分：Ⅰ期26例，Ⅱ期16例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例；組織學(xué)類(lèi)型：腺癌60例，其他病理類(lèi)型10例；組織學(xué)分級(jí): 高分化和中分化40例，低分化30例；有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例；有淋巴血管間隙浸潤(rùn)10例，無(wú)浸潤(rùn)的60例；肌層浸潤(rùn)深度≥1/2的30例，<1/2的40例。

1.2 檢測(cè)方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)組織Matriptase、HAI-1及uPA的表達(dá)，制備石蠟切片，厚約3μm，逐級(jí)脫蠟至蒸餾水，3% H2O2室溫下浸泡8min，蒸餾水沖洗，抗原修復(fù)，抗體稀釋液濃度均為1∶100，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水透明，封片，光鏡觀察，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，免疫組織化學(xué)試劑盒(PV-9000)，DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗Matriptase及兔抗HAI-1單克隆抗體，兔抗uPA多抗分別購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司和北京博奧森生物有限公司。

1.3 結(jié)果判定 Matriptase、HAI-1及uPA定位于細(xì)胞漿，呈淺黃色至棕黃色染色，采用IP( Intensity + percentages) 評(píng)分方法，綜合考慮染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，(1)染色強(qiáng)度計(jì)分：細(xì)胞漿無(wú)染色計(jì)0分，細(xì)胞漿淡黃色計(jì)1分，細(xì)胞漿棕黃色計(jì)2分，細(xì)胞漿棕褐色計(jì)3分。(2)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)分：細(xì)胞漿無(wú)染色計(jì)0分，染色細(xì)胞數(shù)<1%計(jì)1分，染色細(xì)胞數(shù)1%～10%計(jì)2分，染色細(xì)胞數(shù)11%～33% 計(jì)3分，染色細(xì)胞數(shù)34%～66%計(jì)4分，染色細(xì)胞數(shù)>66%計(jì)5分。染色強(qiáng)度計(jì)分及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)分之和即為總分。總分<2分為陰性，總分2～4分為低表達(dá)(+)，總分5～6分為中等表達(dá)(++)，總分 7～8分為高表達(dá)(+ + +),且(-)和(+)為陰性表達(dá)，(++)和(+++)為陽(yáng)性表達(dá)，判定結(jié)果由兩位病理學(xué)專(zhuān)家獨(dú)立閱片確定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，樣本率的比較用χ2檢驗(yàn),相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Matriptase、HAI-1及uPA在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 正常子宮內(nèi)膜、不典型增生、子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase及uPA表達(dá)陽(yáng)性率逐漸升高，HAI-1表達(dá)陽(yáng)性率逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在子宮內(nèi)膜癌組中Matriptase、HAI-1及uPA的陽(yáng)性表達(dá)情況構(gòu)成比也不完全相同，即Matriptase及uPA是高表達(dá)，而HAI-1是低表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1及圖1～3。

表1 Matriptase、HAI-1及uPA在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)陽(yáng)性率比較[n(%)]

圖1 Matriptase在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(×400)A.正常子宮內(nèi)膜組織 B.子宮內(nèi)膜不典型增生組織 C.子宮內(nèi)膜癌組織

圖2 HAI-1在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(×400)D.正常子宮內(nèi)膜組織 E.子宮內(nèi)膜不典型增生組織 F.子宮內(nèi)膜癌組織

圖3 uPA在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(×400)G.正常子宮內(nèi)膜組織 H.子宮內(nèi)膜不典型增生組織 I.子宮內(nèi)膜癌組織

2.2 Matriptase、HAI-1及uPA與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系 Matriptase及uPA在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率與組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期、肌肉浸潤(rùn)深度、淋巴血管間隙浸潤(rùn)有關(guān)。與組織高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、淺肌層、無(wú)淋巴血管間質(zhì)侵犯組織比較，組織低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、肌肉浸潤(rùn)深度≥1/2、淋巴血管間隙浸潤(rùn)的Matriptase及uPA陽(yáng)性率明顯升高，HAI-1陽(yáng)性率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Matriptase、HAI-1及uPA的陽(yáng)性率在患者年齡<50歲與≥50歲之間，及腺癌與其他病理類(lèi)型之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 Matriptase、HAI-1及uPA在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達(dá)的相關(guān)性 用Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示在子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.514，P=0.000)，見(jiàn)表3。

表3 子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程主要由蛋白水解酶的表達(dá)調(diào)控，是導(dǎo)致癌癥患者治療失敗和死亡的主要原因之一。已有研究報(bào)道腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力與蛋白酶產(chǎn)生程度密切相關(guān)[3]，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生大量蛋白水解酶降解基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移[4]。在惡性腫瘤組織和細(xì)胞中，有四種主要的蛋白水解酶：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬基質(zhì)蛋白酶。目前認(rèn)為Matriptase可能參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程[5-6]，已確定Matriptase作用底物有4個(gè)：HGF/SF、uPA、蛋白酶活化受體2(PAR-2)和前列腺蛋白酶原[7]。HGFA受兩種抑制劑即HAI-1和HAI-2的調(diào)控?？梢?jiàn)HAI對(duì)癌癥的發(fā)生、轉(zhuǎn)移可能有抑制作用。故有學(xué)者發(fā)現(xiàn)當(dāng)HAI-1表達(dá)減少可能與前列腺癌、乳腺癌和胃癌的進(jìn)展有關(guān)[8-10]。本研究也發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中Matriptase為高表達(dá)而HAI低表達(dá)。Matriptase最初是在乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，它與多種上皮源性實(shí)體瘤的臨床分期、病理分級(jí)及預(yù)后等密切相關(guān)。據(jù)報(bào)道， Matriptase在食管鱗癌中過(guò)表達(dá)，在晚期和預(yù)后較差的食管癌中尤為顯著，且高表達(dá) Matriptase的患者預(yù)后明顯較差，因而提出Matriptase高表達(dá)是食管癌預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[5]。uPA是一種重要的絲氨酸蛋白酶，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的同時(shí)也參與了這些腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[11-12]。故同樣在本研究中發(fā)現(xiàn)正常子宮內(nèi)膜、不典型增生、子宮內(nèi)膜癌組織中uPA表達(dá)逐漸升高。本文采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)結(jié)果顯示：正常子宮內(nèi)膜、不典型增生、子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase表達(dá)逐漸升高，HAI-1表達(dá)逐漸降低，子宮內(nèi)膜癌組Matriptase高表達(dá)所占比例高于正常子宮內(nèi)膜組和不典型增生組，HAI-1高表達(dá)所占比例低于正常子宮內(nèi)膜組和不典型增生組，值得一提的是不典型增生組HAI-1高表達(dá)的比例也低于正常子宮內(nèi)膜組，推測(cè)Matriptase高表達(dá)及HAI-1低表達(dá)在子宮內(nèi)膜正常到癌變的轉(zhuǎn)變過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。本研究同樣也發(fā)現(xiàn)，在組織低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、肌肉浸潤(rùn)深度≥1/2、淋巴脈管間隙浸潤(rùn)的Matriptase及uPA陽(yáng)性率明顯升高，HAI-1陽(yáng)性率明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Matriptase、HAI-1及uPA的陽(yáng)性率在不同年齡、組織學(xué)類(lèi)型之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。考慮Matriptase及uPA高表達(dá)、HAI-1低表達(dá)也可能是子宮內(nèi)膜癌預(yù)后不良、腫瘤轉(zhuǎn)移的因素。

在直腸癌中發(fā)現(xiàn)Matriptase/HAI比值失調(diào)，與正常對(duì)照組織相比，Matriptase/HAI比值在取自結(jié)直腸癌、腺瘤、中重度異型增生的病變組織中增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢?jiàn)，Matriptase/HAI比值失調(diào)存在于整個(gè)腫瘤惡性進(jìn)展過(guò)程[8，13]。這與本研究一致，即子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證明了HAI-1是通過(guò)抑制Matriptase來(lái)發(fā)揮生物學(xué)作用的。Matriptase的底物包括HGF/SF、uPA，而HGFA受兩種抑制劑即HAI-1和HAI-2的調(diào)控。故在整個(gè)腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中Matriptase、HAI-1及uPA有著千絲萬(wàn)縷的關(guān)系。

總之，Matriptase、HAI-1、HGF/SF和uPA等形成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)可能共同調(diào)節(jié)惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移這一復(fù)雜的過(guò)程。作為HGF/SF和 uPA上游調(diào)控分子的Matriptase有望成為腫瘤診斷和預(yù)后判斷新的生物標(biāo)記物，同時(shí)Matriptase基因表達(dá)的調(diào)節(jié)分子如HAI亦有望成為新的治療靶標(biāo)，為中晚期腫瘤患者帶來(lái)福音。由于本研究中病例數(shù)較少，且并未對(duì)患者進(jìn)行隨訪(fǎng)，這將是我們下一步的研究方向。