微小RNA-493- 5 p表達(dá)與肝癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系

劉亮，韓曉書

撫順市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，遼寧 撫順 113006

在中國(guó)，肝病的發(fā)病率較高，多種肝病均可誘導(dǎo)肝癌發(fā)生。近年來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，肝癌的臨床檢出率逐漸升高。肝癌主要分為肝細(xì)胞癌、膽管細(xì)胞癌和混合型肝癌，其中，以肝細(xì)胞癌較為常見。目前，臨床上，肝移植和根治性切除是肝癌的主要治療手段，但部分肝癌早期患者的臨床癥狀不明顯，就診階段就已發(fā)展為中晚期，導(dǎo)致治療效果欠佳，且治療后存在較高的復(fù)發(fā)率。近年來(lái)，隨著關(guān)于腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷增多，臨床對(duì)微小RNA（microRNA，miRNA）的認(rèn)知不斷增加，多項(xiàng)研究證實(shí)某些miRNA的調(diào)控失常會(huì)導(dǎo)致某些腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，同時(shí)，可通過(guò)某些miRNA對(duì)腫瘤的預(yù)后、復(fù)發(fā)情況進(jìn)行判斷。miRNA-493-5p作為其中之一，被證實(shí)存在潛在的抑癌作用。基于此，本研究對(duì)miRNA-493-5p表達(dá)水平在肝癌患者病情及預(yù)后中的評(píng)估價(jià)值進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年5月至2017年5月?lián)犴樖兄行尼t(yī)院收治的肝癌和良性肝病患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2017年版）》中關(guān)于肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)；②采樣前均未接受過(guò)抗腫瘤治療；③肝癌患者均接受根治性手術(shù)治療；④良性肝病患者均符合慢性肝炎、肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)缺陷、重要臟器（心、肺、腎）功能不全、造血及凝血功能嚴(yán)重障礙等疾?。虎诖嬖谄鞴僖浦?、藥物性肝損傷等。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入78例肝癌患者作為肝癌組和40例同期良性肝病患者作為良性組。肝癌組中，男46例，女32例；年齡40～75歲，平均（55.12±8.36）歲。根據(jù)血清miRNA-493-5p表達(dá)水平的均值將肝癌患者分為高表達(dá)組（

n

=36）和低表達(dá)組（

n

=42）。良性組中，男22例，女 18例；年齡41～73歲，平均（54.76±8.83）歲；疾病類型：慢性肝炎24例，肝硬化16例。另選取25例健康體檢者作為對(duì)照組，其中，男14例，女11例；年齡40～75歲，平均（55.80±8.02）歲。

1.2 檢測(cè)方法

抽取所有受試者的空腹外周靜脈血5 ml，其中，肝癌組患者的抽血時(shí)間為術(shù)前1 d，以3000 r/min的速度于4℃下離心10 min，收集上清液，置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。選用RNA提取分離試劑盒，采用離子交換層吸法對(duì)血清中總RNA進(jìn)行提取，再選擇核酸蛋白檢測(cè)儀對(duì)其吸光度進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算miRNA水平；使用miRcute miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒將miRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再將反轉(zhuǎn)錄后的cDNA樣本存放于-20℃低溫保存。對(duì)cDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，進(jìn)行5個(gè)循環(huán)；95℃變性15 s，60℃退火20 s，72℃延伸40 s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)；以

GAPDH

為內(nèi)參，利用2法計(jì)算miRNA-493-5p的表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo)及隨訪

比較肝癌組、良性組和對(duì)照組患者血清miRNA-493-5p的表達(dá)水平，分析血清miRNA-493-5p表達(dá)情況與肝癌患者臨床特征[年齡、性別、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染、巴塞羅那臨床肝癌（Barcelona clinic liver cancer，BCLC）分期等]的關(guān)系，比較不同血清miRNA-493-5p表達(dá)水平的肝癌組患者的生存情況，分析血清miRNA-493-5p表達(dá)水平對(duì)肝癌患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值。對(duì)肝癌組患者進(jìn)行為期3年的隨訪，隨訪截止時(shí)間為2020年5月。治療后，每3個(gè)月隨訪1次，隨訪內(nèi)容包括腹部B超檢查、CT檢查、外周血甲胎蛋白檢測(cè)、外周血癌胚抗原水平檢測(cè)等，并記錄其生存情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 血清miRNA-493- 5 p表達(dá)水平的比較

肝癌組患者血清miRNA-493-5p的表達(dá)水平為（1.082±0.095），明顯低于良性組的（1.425±0.109）和對(duì)照組的（1.677±0.141），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

t

=19.714、17.650，

P

＜0.01）；良性組患者血清miRNA-493-5p的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

t

=8.090，

P

＜0.01）。三組受試者血清miRNA-493-5p的表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

F

=335.509，

P

＜0.05）。

2.2 血清miRNA-493- 5 p表達(dá)情況與肝癌患者臨床特征的關(guān)系

根據(jù)血清miRNA-493-5p表達(dá)水平的均值將肝癌組患者分為高表達(dá)組（

n

=36）和低表達(dá)組（

n

=42）。高表達(dá)組與低表達(dá)組患者的TNM分期、BCLC分期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；高表達(dá)組與低表達(dá)組患者的年齡、性別、HBV感染情況、腫瘤直徑、血清甲胎蛋白水平、分化程度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。（表1）

表1 血清miRNA-493- 5 p表達(dá)情況與肝癌患者臨床特征的關(guān)系（ n=78）

2.3 血清miRNA-493- 5 p表達(dá)水平與肝癌患者生存情況的關(guān)系

截至隨訪結(jié)束，肝癌組患者的總生存率為47.44%。其中，血清miRNA-493-5p高表達(dá)組患者的生存率為61.11%，高于低表達(dá)組患者的35.71%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=4.624，

P

＜0.05）。（圖1）

圖1 血清miRNA-493- 5 p高表達(dá)組（ n=36）與低表達(dá)組（ n=42）肝癌患者的生存曲線

2.4 血清miRNA-493- 5 p表達(dá)水平對(duì)肝癌患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miRNA-493-5p表達(dá)水平對(duì)肝癌組患者預(yù)后評(píng)估的AUC為0.675（95%CI：0.554～0.796），靈敏度、特異度分別為56.76%、75.61%。（圖2）

圖2 血清miRNA-493- 5 p表達(dá)水平評(píng)估肝癌患者預(yù)后情況的ROC曲線

3 討論

原發(fā)性肝癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)居高不下，而肝細(xì)胞肝癌仍是肝癌中最常見的類型，其作為高度惡性腫瘤之一，具有較高的侵襲性，但早期不易被發(fā)現(xiàn)，多數(shù)患者被確診時(shí)已處于中晚期，導(dǎo)致治療效果不佳。手術(shù)、化療等是臨床治療肝癌的主要治療手段，但中晚期患者多已錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)，因此，即便患者接受手術(shù)治療，預(yù)后仍欠佳，生命安全受到嚴(yán)重威脅。肝癌與其他惡性腫瘤一樣，其發(fā)生、發(fā)展均涉及較復(fù)雜的生理過(guò)程和分子生物學(xué)機(jī)制。隨著臨床醫(yī)學(xué)對(duì)惡性腫瘤的研究逐步轉(zhuǎn)向miRNA，發(fā)現(xiàn)miRNA作為非編碼小分子RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后可對(duì)靶基因水平進(jìn)行調(diào)控，進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等，導(dǎo)致其在惡性腫瘤的預(yù)測(cè)中發(fā)揮巨大潛能。腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)等均與新生血管生成密切相關(guān)，血管內(nèi)皮細(xì)胞作為腫瘤血管生成因子之一，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可以加速生成大量結(jié)構(gòu)、功能異常的新生血管，進(jìn)而加速腫瘤形成和體積增大，而miRNA在血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)，能夠在一定程度上抑制腫瘤新生血管的生成?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究還發(fā)現(xiàn)，上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化在促進(jìn)肝癌細(xì)胞侵襲中發(fā)揮重要作用，而miRNA還可抑制上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，進(jìn)而防止肝癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步降低其侵襲能力。

研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-493-5p在多種腫瘤中的表達(dá)水平均較低，與本研究結(jié)果一致。本研究通過(guò)調(diào)查肝癌患者、良性肝病患者和健康體驗(yàn)者血清miRNA-493-5p的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)其在肝癌患者血清中的表達(dá)水平最低，證實(shí)其對(duì)惡性腫瘤具有一定的抑制作用。miRNA-493-5p能夠通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞有絲分裂從而抑制缺陷蛋白2的表達(dá)，發(fā)揮與紫杉醇化療類似的功效，同時(shí)其還能通過(guò)降低細(xì)胞活力、抑制細(xì)胞的侵襲和增殖能力，進(jìn)一步促使細(xì)胞凋亡。為此，本研究對(duì)肝癌患者血清miRNA-493-5p水平與臨床特征的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，血清miRNA-493-5p高表達(dá)肝癌患者的TNM分期明顯低于低表達(dá)患者，與陳琳等的研究結(jié)果基本一致，證明血清miRNA-493-5p水平與肝癌患者的病情惡化程度密切相關(guān)。本研究進(jìn)一步分析了血清miRNA-493-5p表達(dá)水平與肝癌患者預(yù)后情況之間的關(guān)系，并對(duì)肝癌患者的3年生存情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)血清miRNA-493-5p高表達(dá)組患者的生存率高于低表達(dá)組，且ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miRNA-493-5p表達(dá)水平評(píng)估肝癌組患者預(yù)后的 AUC為 0.675（95%CI：0.554～0.796），靈敏度、特異度分別為56.76%、75.61%，提示血清miRNA-493-5p表達(dá)水平可作為肝癌預(yù)后評(píng)估的客觀指標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-493-5p通過(guò)調(diào)控突觸小泡締合型膜蛋白2，抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

綜上所述，miRNA-493-5p在肝癌患者血清中的表達(dá)水平較低，其表達(dá)水平與肝癌患者的臨床分期密切有關(guān)，且血清miRNA-493-5p高表達(dá)患者的預(yù)后相對(duì)較好，有望成為肝癌患者預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)。