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    一株產(chǎn)高活性多酚氧化酶菌株篩選鑒定及其酶學(xué)性質(zhì)

    2021-03-04 06:24:24孫會(huì)剛俞曉丹陳志軒張傳麗李同祥
    中國釀造 2021年12期

    孫會(huì)剛,俞曉丹,陳志軒,張傳麗,湯 薇,李同祥*

    (徐州工程學(xué)院食品與生物工程學(xué)院,江蘇徐州 221018)

    多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是自然環(huán)境中很常見的一類氧化還原酶,是存在于各種動(dòng)植物及微生物體內(nèi)參與其代謝反應(yīng)的一類金屬蛋白酶[1-3],它能針對(duì)性地催化多酚類化合物氧化形成與之相對(duì)應(yīng)的醌類物質(zhì)。無論是在工業(yè)的生產(chǎn)過程中還是在微生物研究中,多酚氧化酶都有著極其特殊的地位,其在食品加工、茶葉加工[4-7]過程中具有重要的應(yīng)用,主要涉及到了啤酒釀造、果汁生產(chǎn)過程中的澄清過程以及食用菌的栽培等各個(gè)領(lǐng)域[8-9]。

    多酚氧化酶在廣義上可以分為三種類型,即單酚氧化酶、雙酚氧化酶和漆酶[10-12]。而微生物中主要的多酚氧化酶是漆酶。漆酶因首次在日本紫膠漆樹中發(fā)現(xiàn)而得名。產(chǎn)漆酶的微生物主要集中在擔(dān)子菌亞門、子囊菌亞門及半知菌亞門等高等真菌,其中被研究最多的是擔(dān)子菌亞門的白腐真菌[13]。另外,也有發(fā)現(xiàn)一些細(xì)菌如芽孢桿菌產(chǎn)較高活性漆酶的報(bào)道[14]。盡管產(chǎn)多酚氧化酶的真菌在自然界中較多,關(guān)于竹黃菌產(chǎn)多酚氧化酶的報(bào)道很少,目前國內(nèi)僅有江南大學(xué)胡艷報(bào)道篩選到一株產(chǎn)多酚氧化酶的竹黃菌,經(jīng)過發(fā)酵條件優(yōu)化后酶活達(dá)到120 U/mL[15-16]。但也有篩選到產(chǎn)漆酶酶活較高的其他屬菌株,如陳中維等[17]篩選要一株黃孢原毛平革菌,經(jīng)過發(fā)酵條件優(yōu)化后,酶活最高達(dá)到1 459.1 U/mL。國外報(bào)道產(chǎn)多酚氧化酶活性比較高的真菌也多集中于擔(dān)子菌類,如JASIM A[18]報(bào)道菇類含有豐富的多酚氧化酶,具有很高的藥用價(jià)值;DONG S J等[19]報(bào)道毛革蓋菌產(chǎn)生的多酚氧化酶具有很高降解木質(zhì)素的能力;WIKEE S等[20]報(bào)道了來源于海洋的真菌擬盤多毛孢菌產(chǎn)生的多酚氧化酶具有較強(qiáng)的脫色能力。雖然目前篩選到的產(chǎn)多酚氧化酶的菌種很多,但普遍存在酶活較低或者發(fā)酵周期長的缺點(diǎn)。

    為了獲得產(chǎn)酶活性高、發(fā)酵周期短的優(yōu)良菌株,本研究采用變色圈法從土壤樣品中分離篩選產(chǎn)多酚氧化酶的菌株,進(jìn)一步對(duì)篩選菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、分子生物學(xué)鑒定,并對(duì)篩選菌株所產(chǎn)多酚氧化酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究,為下一步多酚氧化酶的實(shí)際推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 原料

    土樣:采集于江蘇溧陽天目湖山水園景區(qū)繡球島茶樹下土壤(CY)、江蘇太倉弇山園內(nèi)竹林中腐葉下土壤(ZL)、江蘇徐州工程學(xué)院內(nèi)綠化帶內(nèi)土壤(XN)。

    1.1.2 化學(xué)試劑

    α-萘酚:上海展云化工有限公司;L-多巴、對(duì)苯二酚、間苯二酚、十二烷基硫酸鈉(sodium lauryl sulfate,SDS):合肥博美生物科技有限公司;愈創(chuàng)木酚、焦性沒食子酸、D-山梨醇、硫酸鎂:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;無水檸檬酸:生工生物工程(上海)股份有限公司;亞硫酸氫鈉:天津市大茂化學(xué)試劑廠;硫酸錳:天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司;無水硫酸銅:無錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司;乙二胺四乙酸二鈉:天津市福晨化學(xué)試劑廠;L-抗壞血酸:西隴科學(xué)股份有限公司。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。DL2000 DNA Plus Marker:南京諾唯贊生物技術(shù)有限公司;真菌基因組提取試劑盒:南京鐘鼎生物技術(shù)有限公司。

    1.1.3 培養(yǎng)基

    馬鈴薯葡萄糖肉湯(potato dextrose broth,PDB):上海博微生物科技有限公司。

    馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar,PDA)培養(yǎng)基:為上述PDB培養(yǎng)基添加瓊脂粉15 g/L。121 ℃滅菌20 min。

    愈創(chuàng)木酚、α-萘酚PDA培養(yǎng)基:分別在滅菌PDA培養(yǎng)基中加入經(jīng)過無菌針式過濾器(孔徑0.22 μm)過濾的愈創(chuàng)木酚、α-萘酚乙醇溶液,使培養(yǎng)基中愈創(chuàng)木酚、α-萘酚的最終含量為0.04%。

    液體種子培養(yǎng)基:PDB培養(yǎng)基25.0 g,酵母浸粉5.0 g,KH2PO43.0 g,MgSO4·7H2O 3.0 g,蒸餾水1 000 mL,pH值自然。120 ℃下滅菌20 min。

    液體發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基:葡萄糖20.0 g,氯化銨2.5 g,K2HPO43.2 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,CuSO4·5H2O 0.006 g,蒸餾水1 000 mL,pH值自然。120 ℃下滅菌20 min。

    1.2 儀器與設(shè)備

    5417R低溫臺(tái)式離心機(jī):德國艾本德股份公司;TU-1810紫外-可見分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;Synergy H1多功能酶標(biāo)儀:美國BioTek公司;IS-RDD3臺(tái)式恒溫振蕩器:美國晶鉆儀器公司;303-1電熱恒溫培養(yǎng)箱:紹興市銀河機(jī)械儀器有限公司;FlexCycler2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)儀:德國耶拿分析儀器股份公司。

    1.3 方法

    1.3.1 菌株的初篩

    初篩:取10-4、10-5、10-6三個(gè)梯度的土壤稀釋液各100 μL涂布于愈創(chuàng)木酚PDA平板上,于28 ℃恒溫培養(yǎng)6~8 d,每個(gè)梯度3個(gè)平行,仔細(xì)觀察菌落周圍有無紫紅色的變色圈產(chǎn)生,有紫色變色圈產(chǎn)生說明該菌株可能產(chǎn)生多酚氧化酶,多酚氧化酶將其底物愈創(chuàng)木酚氧化成紫紅色的物質(zhì)。變色圈直徑(D)和菌落直徑(d)之比(D/d)越大說明多酚氧化酶酶活越高,挑選出(D/d)值較大且變色圈顏色較深的菌株進(jìn)行劃線分離直至獲得純菌株;將分離得到的純菌株點(diǎn)接到α-萘酚PDA培養(yǎng)基平板,28 ℃恒溫培養(yǎng)6~8 d,觀察菌落周圍有無紫色的變色圈產(chǎn)生,每個(gè)菌株3個(gè)平行,將有紫色變色圈的菌株接種于PDA斜面培養(yǎng)基,28 ℃恒溫培養(yǎng)6~8 d,4 ℃保存?zhèn)溆肹21]。

    1.3.2 菌株的復(fù)篩

    (1)粗酶液的制備[22]

    將復(fù)篩得到的產(chǎn)多酚氧化酶菌株接種于裝液量為100 mL/250 mL液體種子培養(yǎng)基中,28 ℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)4 d,保存?zhèn)溆?。將種子培養(yǎng)液以1%(V/V)的接種量接種至裝液量為100 mL/250 mL液體發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中,28 ℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)6~8 d,經(jīng)10 000 r/min、4 ℃離心10~20 min,去除沉淀,上清液即為粗酶液,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    (2)多酚氧化酶酶活測定方法[23-24]

    在反應(yīng)體系中加入0.1 mol/L,pH 6.0的磷酸鹽緩沖液3mL,后加入1 mL濃度為0.1 mol/L鄰苯二酚溶液以及0.1 mL粗酶液,混合均勻后于波長600 nm處測定吸光度值(OD600nm值)。每隔30 s記錄一次吸光度值變化,連續(xù)測定10 min。以pH 6.0磷酸鹽緩沖液3 mL和0.1 mol/L鄰苯二酚溶液1 mL作為對(duì)照。多酚氧化酶酶活計(jì)算公式如下:

    多酚氧化酶酶活定義[25]:1 mL粗酶液在1 min內(nèi)使得吸光度值變化0.001定義為1個(gè)酶活力單位(U/mL)。

    1.3.3 菌株鑒定

    形態(tài)學(xué)觀察:直接肉眼觀察菌株ZL-2在愈創(chuàng)木酚、α-萘酚PDA培養(yǎng)基上的菌落及其表面菌絲的顏色、形狀,用接種環(huán)挑起菌落觀察其疏松或緊密情況。

    采用真菌基因組提取試劑盒提取真菌ZL-2基因組,采用引物ITS1(5'-TCCGTTGGTGAACCTGCGG-3'),ITS4(5'-TCCGTTGGTGAACCTGCGG-3')擴(kuò)增其ITS序列,PCR體系及擴(kuò)增條件參考文獻(xiàn)[26]。

    1.3.4 發(fā)酵時(shí)間對(duì)菌株ZL-2多酚氧化酶活性的影響

    參考文獻(xiàn)[13]中的方法并加以修改。將保藏的篩選菌種以1%(V/V)的接種量接種至裝液量為100 mL/250 mL液體發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中,28 ℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)15 d,每天定時(shí)取樣測定多酚氧化酶酶活。

    1.3.5 多酚氧化酶的酶學(xué)性質(zhì)[27-30]

    (1)多酚氧化酶的最適溫度及熱穩(wěn)定性

    將磷酸鹽緩沖液、底物和多酚氧化酶粗酶液分別置于4 ℃、9 ℃、20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃中水浴加熱10 min后測定酶活,以所測最大酶活為100%,計(jì)算相對(duì)酶活,確定多酚氧化酶的最適溫度。

    在20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃溫度條件下,將粗酶液分別處理1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后測定酶活,考察多酚氧化酶的熱穩(wěn)定性。

    (2)多酚氧化酶的最適pH及酸堿穩(wěn)定性

    分別配制pH值為3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的11個(gè)不同pH的磷酸鹽緩沖溶液,按照前述方法測定多酚氧化酶活性,以最大酶活記為100%,計(jì)算相對(duì)酶活力,確定多酚氧化酶的最適pH。

    將粗酶液放入pH值為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的緩沖液中,密封過夜后,按照前述方法測定酶活,考察多酚氧化酶pH穩(wěn)定性。

    (3)多酚氧化酶最適底物

    分別配制0.10 mol/L的鄰苯二酚、沒食子酸、焦性沒食子酸、間苯二酚、對(duì)苯二酚、L-多巴溶液為底物,測定多酚氧化酶酶活。以最大酶活為100%,計(jì)算相對(duì)酶活,確定多酚氧化酶的最適底物。

    (4)金屬離子對(duì)酶活性的影響

    分別配制6 mmol/L 的MgCl2·6H2O、ZnSO4·7H2O、MnSO4·H2O、CaCl2、CuSO4、Al(NO3)3·9H2O、FeCl3·6H2O溶液,分別取上述溶液0.5 mL,其他條件不變,測定酶活。以不添加金屬離子的體系所得的酶活為100%,計(jì)算相對(duì)酶活,考察金屬離子對(duì)酶活性的影響。

    (5)抑制劑對(duì)酶活性的影響

    分別配制10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、60 mmol/L、80 mmol/L、100 mmol/L的SDS、檸檬酸、D-山梨醇和L-抗壞血酸溶液,分別取上述溶液0.5 mL,其他條件不變,按照上述酶活測定方法測定酶活。以不添加抑制劑的體系所測得的酶活記為100%,計(jì)算相對(duì)酶活,考察抑制劑對(duì)酶活性的影響。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 產(chǎn)多酚氧化酶菌株的初篩和復(fù)篩

    從采集的樣品中篩選到三株菌落周圍形成紫紅色變色圈的菌株,分別命名為CY-2、ZL-1、ZL-2,其變色圈直徑(D)和菌落直徑(d)之比(D/d)、顏色強(qiáng)度及變色圈分別見表1和圖1。由表1可知,菌株CY-2、ZL-1、ZL-2的D/d值分別為0.84、1.59、2.38,說明ZL-2菌株產(chǎn)生的多酚氧化酶活性可能較高。由圖1可知,菌絲為白色,菌落質(zhì)地疏松呈絨狀。采用分光光度法測定三株菌多酚氧化酶的酶活,結(jié)果見表2。由表2可知,其中菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶活最高,可達(dá)393 U/mL。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[15],菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶酶活較高。因此,選擇菌株ZL-2進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。

    表1 3株產(chǎn)多酚氧化酶菌株變色圈大小和顏色強(qiáng)度Table 1 Color-changing circle size and intensity of 3 strains producing polyphenol oxidase

    圖1 多酚氧化酶產(chǎn)生菌株初篩結(jié)果Fig. 1 Preliminary screening results of strains producing polyphenol oxidase

    表2 產(chǎn)多酚氧化酶菌株復(fù)篩結(jié)果Table 2 Rescreening results of strains producing polyphenol oxidase

    2.2 菌株ZL-2分子生物學(xué)鑒定

    以真菌ITS序列通用引物ITS1和ITS4為引物,菌株ZL-2基因組脫氧核糖核酸(DNA)為模板擴(kuò)增ITS序列,電泳檢測結(jié)果見圖2。由圖2可知,以真菌PCR基因組DNA為模板擴(kuò)增ITS序列,通過真菌的特異性PCR擴(kuò)增,用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測產(chǎn)生了單一DNA片段條帶,與DNA Marker對(duì)比顯示,PCR擴(kuò)增的DNA片段長度約為600 bp,與設(shè)計(jì)的擴(kuò)增序列長度一致。

    圖2 菌株ZL-2基于ITS序列PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig. 2 Electrophoresis of PCR amplification products of strain ZL-2 based on ITS sequence

    擴(kuò)增產(chǎn)物送南京鐘鼎生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序,將所得序列在美國國家生物技術(shù)信息中心(national center of biotechnology information,NCBI)網(wǎng)站上進(jìn)行基本局部比對(duì)搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)分析,并用MEGA-X軟件以鄰接(neighbor-joining,NJ)法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹見圖3。由圖3可知,菌株ZL-2與竹黃菌屬(Shiraiasp.)進(jìn)化親緣關(guān)系最近(達(dá)到99%)。根據(jù)該菌株的菌落及菌絲特征,鑒定菌株ZL-2為竹黃菌屬(Shiraiasp.)。

    圖3 菌株ZL-2基于ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3 Phylogenetic tree of strain ZL-2 based on ITS sequence

    2.3 發(fā)酵時(shí)間對(duì)酶活性的影響

    由圖4可知,隨著培養(yǎng)時(shí)間在0~15 d范圍內(nèi)的增加,多酚氧化酶活性呈現(xiàn)先增大后減少的趨勢。在培養(yǎng)的第4天產(chǎn)生胞外的多酚氧化酶,才能測出多酚氧化酶活性,第8天達(dá)到酶活最大值521 U/mL,之后酶活開始逐漸下降,發(fā)酵第15天時(shí)酶活為226 U/mL,僅為最高酶活的43.37%。結(jié)果表明,最佳發(fā)酵產(chǎn)酶時(shí)間為8 d。

    圖4 發(fā)酵時(shí)間對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶活性的影響Fig. 4 Effect of fermentation time on activity of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    2.4 多酚氧化酶酶學(xué)性質(zhì)分析

    2.4.1 多酚氧化酶的最適溫度和熱穩(wěn)定性

    對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶在反應(yīng)溫度4~80 ℃范圍內(nèi)酶活變化進(jìn)行了分析,結(jié)果見圖5。由圖5可知,在反應(yīng)溫度4~30 ℃范圍內(nèi),酶活隨反應(yīng)溫度升高逐步增加,并在30 ℃時(shí)達(dá)到最高。反應(yīng)溫度>30 ℃之后,酶活開始降低。因此,該酶的最適反應(yīng)溫度為30 ℃。

    圖5 反應(yīng)溫度對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶活性的影響Fig. 5 Effect of reaction temperature on activity of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    進(jìn)一步研究菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶的熱穩(wěn)定性,結(jié)果見圖6。由圖6可知,在反應(yīng)溫度20 ℃、30 ℃及40 ℃的條件下,3 h內(nèi)酶活較為穩(wěn)定,均可保持初始酶活80%左右,5 h內(nèi)仍然能保持初始酶活的60%以上;反應(yīng)溫度為50 ℃時(shí),多酚氧化酶熱穩(wěn)定性出現(xiàn)降低,2 h內(nèi)剩余酶活為初始酶活的42.31%,4 h后降為初始酶活的14.26%,其半衰期約為1.5 h;反應(yīng)溫度在60 ℃時(shí),該酶不穩(wěn)定,約0.5 h即達(dá)到該多酚氧化酶的半衰期,5 h后剩余酶活僅為初始酶活2.15%。結(jié)果表明,該酶在反應(yīng)溫度20~40 ℃時(shí)具有較好的熱穩(wěn)定性,適合應(yīng)用于食品等相關(guān)行業(yè)。

    圖6 菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶的溫度穩(wěn)定性Fig. 6 Temperature stability of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    2.4.2 多酚氧化酶的最適pH和酸堿穩(wěn)定性

    pH值對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶催化活性的影響結(jié)果見圖7。由圖7可知,pH值為3~6時(shí),酶活逐漸增高,在pH值為6時(shí)達(dá)到最高,為最適pH值,pH值>6之后,酶活開始逐步下降。結(jié)果表明,該酶的最適pH值為6。

    圖7 pH值對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶活性的影響Fig. 7 Effect of pH on activity of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶pH值穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見圖8。由圖8可知,菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶經(jīng)pH值為3~6的緩沖溶液處理過夜后,酶活性較穩(wěn)定,剩余酶活能達(dá)到初始酶活的80%以上;在pH值為7~8時(shí),酶活下降明顯。結(jié)果表明,菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶的酶活性在pH酸性范圍內(nèi)(pH3~6)穩(wěn)定性較好。

    圖8 菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶的pH穩(wěn)定性Fig. 8 pH stability of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    2.4.3 多酚氧化酶的最適底物

    由圖9可知,多酚氧化酶對(duì)底物的催化能力由大到小分別為鄰苯二酚>愈創(chuàng)木酚>焦性沒食子酸>沒食子酸>對(duì)苯二酚>間苯二酚>L-多巴。因此,該菌株多酚氧化酶最適底物為鄰苯二酚,其次為愈創(chuàng)木酚,對(duì)焦性沒食子酸和沒食子酸有一定催化作用,對(duì)對(duì)苯二酚、間苯二酚和L-多巴而言幾乎沒有催化作用,說明該多酚氧化酶屬于漆酶。

    圖9 不同底物對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶活性的影響Fig. 9 Effects of different substrates on activity of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    2.4.4 金屬離子對(duì)多酚氧化酶活性的影響

    由表3可知,Cu2+、Mg2+、Mn2+、Fe3+、Zn2+對(duì)該酶都有促進(jìn)作用,其中Cu2+的促進(jìn)作用較明顯,相對(duì)酶活達(dá)到了150.76%,文獻(xiàn)報(bào)道漆酶是一種含銅的氧化酶,銅離子對(duì)其有激活作用[6]。而Ca2+、Al3+對(duì)該菌株酶活具有一定抑制作用。

    表3 金屬離子對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶酶活影響Table 3 Effects of metal ions on activity of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    2.4.5 抑制劑對(duì)酶活性的影響

    由圖10可知,抑制劑SDS、EDTA-2Na、D-山梨醇、檸檬酸、L-抗壞血酸、亞硫酸氫鈉對(duì)多酚氧化酶都有抑制作用,其中抑制作用最強(qiáng)的分別為L-抗壞血酸和亞硫酸氫鈉。該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的抑制劑對(duì)多酚氧化酶的抑制也基本一致[13]。

    圖10 不同抑制劑對(duì)菌株ZL-2產(chǎn)多酚氧化酶活性的影響Fig. 10 Effects of different inhibitors on activity of polyphenol oxidase produced by strain ZL-2

    3 結(jié)論

    通過初篩和復(fù)篩,獲得一株產(chǎn)多酚氧化酶活性較高的竹黃菌屬真菌(Shiraiasp.),發(fā)酵8 d其酶活達(dá)到521 U/mL。多酚氧化酶最適底物為鄰苯二酚;最適pH值為6.00;最適溫度為30 ℃;酶活在溫度20~40 ℃及pH 3~6范圍穩(wěn)定。金屬離子Cu2+激活作用最強(qiáng),Ca2+、Al3+對(duì)酶活有一定抑制作用;L-抗壞血酸和亞硫酸氫鈉對(duì)該酶抑制作用較強(qiáng)。菌株產(chǎn)ZL-2多酚氧化酶酶學(xué)性質(zhì)與文獻(xiàn)報(bào)道的漆酶的性質(zhì)基本一致,適合應(yīng)用于食品等相關(guān)行業(yè);該竹黃菌含有優(yōu)良的多酚氧化酶基因,但其發(fā)酵周期較長,下一步可以通過克隆其基因,在原核中進(jìn)行表達(dá),大大縮短其發(fā)酵周期,有望得到優(yōu)良的產(chǎn)多酚氧化酶基因工程菌。

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