奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌的分離鑒定

孫俊峰

(江蘇省泰興市畜牧獸醫(yī)中心，江蘇 泰興 225400)

奶牛乳房炎在中國的發(fā)病率可以達到60%～70%，為此造成的經(jīng)濟損失異常巨大[1-2]。此病的發(fā)生嚴重影響著我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，其發(fā)病原因廣且普遍發(fā)生，主要來源于某些操作不當而引發(fā)的損傷、多種致病菌的混合感染及一系列繼發(fā)的因素[3]。奶牛乳房炎易發(fā)，且因素復(fù)雜、藥療成本高，是一種難防治不易診斷的疾病，由此會引發(fā)牛奶類品質(zhì)下降、奶牛的產(chǎn)奶功能降低等。其初期癥狀為：奶牛乳房區(qū)域會出現(xiàn)輕度的腫脹、發(fā)熱、痛感，并且時常有伴隨牛乳中絮狀或凝塊狀物質(zhì)，偶爾還會呈現(xiàn)為水樣；嚴重時除了會出現(xiàn)初期癥狀外還會因炎癥反應(yīng)而出現(xiàn)不同程度的滲出，最終導(dǎo)致產(chǎn)奶減少甚至停止產(chǎn)奶[4]。為了減少奶牛乳房炎所造成的損失，必須對其致病菌進行分離鑒定并對因?qū)ΠY下藥。

1 材料

1.1 病料來源

奶牛乳房炎奶樣品4份采自于江蘇省某奶牛場。

1.2 樣品采集

選擇有明顯炎癥反應(yīng)癥狀、擠出的奶樣品有顏色或性狀改變的發(fā)病乳房進行采樣，用溫水將患病區(qū)域清理干凈，然后用消毒棉球給患病區(qū)域進行消毒，擠掉一些乳汁后再將10 mL乳汁擠入事先準備好的無菌試管中，做好標記后冷藏備用。

1.3 試驗材料及儀器

吊菌環(huán)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、無菌處理過的試管、心腦浸液培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、高壓滅菌鍋、生化試驗試劑盒等。

1.4 細菌的分離與培養(yǎng)

對采集的無菌奶樣品進行充分的搖晃直至質(zhì)地均勻，然后在準備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、心腦浸液培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基及麥康凱培養(yǎng)基上分別進行劃線，將接種好的培養(yǎng)基做好標記并放置在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后觀察菌落情況。

1.4.1 涂片染色鏡檢 染色的時候需要在載玻片上方滴25 μL左右的生理鹽水，選取單菌落與生理鹽水進行混合均勻后形成適當大小的均勻涂面，在酒精燈上面進行烘干固定處理。然后進行革蘭氏染色，于顯微鏡下觀察其形狀特征，并結(jié)合培養(yǎng)基培養(yǎng)出的菌落特點給出初步的判定。

1.4.2 分離培養(yǎng)與鑒定 選擇疑似金黃色葡萄球菌的菌落進行涂片，通過革蘭氏染色法染色后進行鏡檢，觀察其染色后的特性、形態(tài)及排列。革蘭氏染色鏡檢中，如果是顯微鏡下觀察到兩端鈍圓的淡紅色短桿菌[5]，可以初步判定為檢測到的細菌為大腸桿菌；如果在顯微鏡觀察到了橢圓形、陽性的球菌，單個或者一對一對的出現(xiàn)在視野中，觀察不到芽孢，可初步判定為腸球菌，如觀察到的細菌呈現(xiàn)葡萄狀，成串出現(xiàn)的陽性菌，初步判定結(jié)果為金黃色葡萄球菌。

1.5 生化試驗

將分離到的菌種，在無菌條件下操作，接種到表2中的生化管中，于37 ℃條件，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h左右[6-7]，觀察反應(yīng)結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 細菌的分離培養(yǎng)結(jié)果

由表1結(jié)果顯示，通過單個菌落在不同種類培養(yǎng)基中的形態(tài)顏色等生長特性來初步鑒別金黃色葡萄球菌等致病菌的存在，是可行的，不同菌株在不同種類培養(yǎng)基中會展現(xiàn)出獨特的光澤度、色彩形狀及有無芽孢等特點，給初步鑒定工作提供了大致方向和基本依據(jù)。

表1 細菌分離培養(yǎng)結(jié)果

2.2 細菌的生化試驗結(jié)果

由表2的培養(yǎng)結(jié)果可以看到，1號菌符合腸球菌的生化特性，2、3號菌符合金黃色葡萄球菌的生化特性，4號菌符合大腸桿菌的生化特性。

表2 試驗結(jié)果

3 討 論

金黃色葡萄球菌廣泛的存在于動物生長環(huán)境、飼料中[8]，所以在飼養(yǎng)過程中要十分注意飼養(yǎng)區(qū)域以及采奶區(qū)域的消毒衛(wèi)生工作。當飼養(yǎng)場或者養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的奶牛出現(xiàn)了乳腺炎感染的時候比較適合用恩諾沙星、鏈霉素等抗生素治療。但目前由于各種原因病菌的耐藥性較強，需要對病牛進行有針對性的治療才可以達到更好的治療效果。

由于抗生素使用的不合理現(xiàn)象較多，耐藥的問題也越來越嚴重，對全球的奶牛養(yǎng)殖業(yè)以及畜牧業(yè)都帶來了許多不良的影響。由于目前對抗生素的使用還不夠規(guī)范，很多的細菌產(chǎn)生了耐藥性，隨著細菌的變異、耐藥菌株的增多，也對于目前奶牛乳腺炎臨床治療添加了很大的難度。金黃色葡萄球菌是奶牛乳房炎十分常見的一種致病菌，其對抗生素的耐藥性同樣十分明顯，對于治療工作的難度也有不小的增加，如有報道金黃色葡萄球菌對萬古霉素等產(chǎn)生了耐藥性，面對目前的問題，獸藥研發(fā)企業(yè)還需要進行新藥物的研發(fā)，以面對耐藥性等嚴峻的問題。同時在飼養(yǎng)管理中希望養(yǎng)殖企業(yè)或養(yǎng)殖戶可以更好地推行無抗飼養(yǎng)，提高飼養(yǎng)管理水平，注意奶牛日糧營養(yǎng)均衡，保證消毒殺菌全面，適當使用一些中藥制劑，做好動物飼養(yǎng)的保健工作，有效提高奶牛的免疫力，杜絕出現(xiàn)濫用藥現(xiàn)象。