靈芝產(chǎn)區(qū)種質(zhì)資源調(diào)查及雜交育種研究

左洪波，夏伯陽，王希亮，李華利，蘇小林，劉紅粉

（1.山東中泰藥業(yè)有限公司 山東，聊城 252000；2.聊城伯陽藥食真菌研究所 山東，聊城 252000 ）

靈芝具有著極高的藥用價(jià)值以及觀賞價(jià)值，造就其有著極大的市場開發(fā)前景。而從我國發(fā)展情況來看，我國在發(fā)展過程中對(duì)于中藥的重視程度較高，而靈芝更是在我國中藥領(lǐng)域占有十分重要的地位。而伴隨著時(shí)代的發(fā)展，新媒體的盛行，靈芝被更加廣泛的宣傳，民眾對(duì)其的認(rèn)識(shí)程度也在不斷提升。在這種環(huán)境下，我國靈芝市場不斷發(fā)展，給我國靈芝種植業(yè)以更大的挑戰(zhàn)。而從我國靈芝種植情況來看，我國早期靈芝種植多是依靠從外國引進(jìn)菌種，而這些菌種經(jīng)過多年的連續(xù)性種植，已經(jīng)產(chǎn)生一定的退化情況，造成靈芝整體質(zhì)量降低。在這種情況下，我國也更加重視靈芝的選育工作，提升我國靈芝整體生產(chǎn)質(zhì)量，讓靈芝能夠?yàn)槲覈t(yī)療行業(yè)提供更大的價(jià)值，也能夠在我國發(fā)展過程中創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

1 靈芝產(chǎn)區(qū)種質(zhì)資源調(diào)查

靈芝作為一種中藥材，在我國有著極高的聲譽(yù)。其最早被收錄于《中國藥典》中，《本草綱目》中記載，靈芝在實(shí)際應(yīng)用的過程中，具有明目，補(bǔ)肝氣；祛心腹五邪，益脾氣；主治咳逆上氣，益肺氣，通利口鼻。而在我國最早的醫(yī)學(xué)古籍《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載，靈芝入五經(jīng)，補(bǔ)益五臟之氣，調(diào)六臟之陰陽，正氣存內(nèi)，邪不可干。而從現(xiàn)階段我國的研究情況來看，靈芝在實(shí)際應(yīng)用的過程中能夠在癌癥，腦溢血，心臟病等疾病治療中有著較為顯著的治療效果[1]。而靈芝也由于自身的藥效，越來越受到人們的關(guān)注。而伴隨著時(shí)代的發(fā)展，科技不斷的進(jìn)步，靈芝養(yǎng)殖也成為可能?？梢灶A(yù)期，靈芝在未來的發(fā)展中能夠更多的被應(yīng)用于普通民眾生活中，也能發(fā)揮其更大的效益。

從世界范圍角度來看，現(xiàn)已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)的靈芝種類高達(dá)250 多種。而多數(shù)的靈芝集中在歐洲北部，南部，非洲中部，南美，以及亞洲東部。從我國靈芝分布情況來看，靈芝分布于我國29個(gè)省市，主要集中在海南，貴州，四川，安徽，吉林，云南等地。

國外關(guān)于靈芝的栽培養(yǎng)育研究主要集中在日本以及韓國，而現(xiàn)階段我國所人工養(yǎng)殖的靈芝栽菌株，也基本是從韓國與日本引進(jìn)。日本最早是在1987年進(jìn)行靈芝栽培養(yǎng)殖技術(shù)的研究，并在空調(diào)進(jìn)行溫度調(diào)控的環(huán)境下，獲得袋栽和瓶栽研究成果。而從我國靈芝養(yǎng)殖技術(shù)發(fā)展實(shí)際情況來看，我國靈芝養(yǎng)殖技術(shù)在20世紀(jì)80年代左右開始發(fā)展，主要是進(jìn)行段木靈芝栽培技術(shù)研究。而伴隨著時(shí)代的發(fā)展，我國在發(fā)展過程中，靈芝栽培技術(shù)也在不斷的進(jìn)行改進(jìn)與完善。從玻璃瓶小量栽種發(fā)展到短段木熟料栽種，而在這個(gè)過程中，靈芝的產(chǎn)量以及栽種周期得到了較為明顯的改善。而我國人工栽種靈芝所選用的原材料，也由原有的單一原木逐漸的轉(zhuǎn)向棉子殼，雜木屑等方向。

本文在研究的過程中主要是進(jìn)行山東靈芝栽種情況的研究。山東是我國四大靈芝產(chǎn)地之一，其主要的品種為韓芝，品種是在1993年從韓國引入[2]。而這種靈芝伴隨著多年的連續(xù)性栽種，品種已經(jīng)產(chǎn)生一定程度的菌種退化情況，靈芝整體質(zhì)量以及產(chǎn)量明顯的下降。在這種情況下，山東地區(qū)積極的進(jìn)行靈芝種質(zhì)資源的收集并進(jìn)行菌種選育方面的研究。將現(xiàn)有的靈芝品種與野生靈芝品種進(jìn)行雜交。經(jīng)過多年的實(shí)驗(yàn)以及人工馴化，培養(yǎng)出抗雜菌能力強(qiáng)、子實(shí)體和孢子粉相對(duì)產(chǎn)量高、穩(wěn)定、抗逆性強(qiáng)的優(yōu)良品種新菌株御蕈堂靈芝1 號(hào)和2 號(hào)。而這兩種靈芝也成為現(xiàn)階段山東種植的主要的靈芝品種。

表1 子實(shí)體中多糖及三萜含量，孢子粉中多糖，三萜及油脂含量

1 雜交育種研究

1.1 資料與方法

1.1.1 資料 菌株的選擇：在進(jìn)行清楚選擇的過程中，所選擇的部分可以分成對(duì)照組以及實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組所使用的為山東1993年所引入的韓芝。而實(shí)驗(yàn)組主要分成三個(gè)部分。山東泰安泰山野生泰山赤芝，吉林長白山野生靈芝以及昆崳山野生靈芝。再進(jìn)行靈芝的采集以及標(biāo)本的確定之后，將所采集的標(biāo)本交由聊城伯陽藥食真菌研究所進(jìn)行研究。

1.1.2 培養(yǎng)基的選擇 靈芝在雜交育種研究過程中，所使用的培養(yǎng)基有三種，分別為母種培養(yǎng)基原種和栽種培養(yǎng)基，生產(chǎn)培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)在研究的過程中所使用的母種培養(yǎng)基為PDA 培養(yǎng)基，原種和栽種培養(yǎng)基主要是由中藥渣，木屑，麥麩，石膏，葡萄糖組成，以上幾種成分的比例為48:30：20:1:1。而在進(jìn)行培養(yǎng)基調(diào)配的過程中需要保證料水的比在1:1.2 左右。Ph 值保持正常。生產(chǎn)培養(yǎng)基主要是由中藥渣，木屑，麩皮，玉米粉，石膏，生石灰以及過磷酸鈣組成。以上成分的比例約為48:30：15:3:1:2:1。

1.2 靈芝選育過程與方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)組組織分離與母鐘篩選 主要分成三個(gè)步驟。第一步，再進(jìn)行野生靈芝的采集后，在無菌環(huán)境下進(jìn)行組織分離工作，并將每個(gè)野生靈芝標(biāo)本分離成十支試管母鐘。第二步，培養(yǎng)孕育部分。將處理好的標(biāo)本，放置在26℃左右的恒溫箱中，進(jìn)行避光培養(yǎng)工作。這個(gè)過程的持續(xù)時(shí)間大概三天，而在這三天之內(nèi)，相關(guān)的研究人員需要每天對(duì)試管進(jìn)行檢查。在試管內(nèi)部產(chǎn)生污染的情況下，需要將其丟棄。第三步，篩選部分。再進(jìn)行靈芝母鐘培養(yǎng)之后需要選擇，生長情況最為良好，顏色干凈的母鐘進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并需要對(duì)已經(jīng)選擇的部分進(jìn)行進(jìn)一步的純化。

1.2.2 初篩與復(fù)篩 這一部分工作主要分成兩個(gè)步驟。第一步，原種培養(yǎng)，選擇帶孔透氣且已經(jīng)經(jīng)過殺菌處理的玻璃培養(yǎng)瓶進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組所篩選出的優(yōu)良某種培養(yǎng)工作。在這個(gè)過程中需要注意，靈芝培養(yǎng)的過程中需要保證其溫度在26℃～28℃左右，且需要避光進(jìn)行靈芝的培養(yǎng)工作[3]。第二步，栽培種培養(yǎng)，將篩選出來的實(shí)驗(yàn)組菌株以及對(duì)照組菌株接種在同一個(gè)培養(yǎng)基中，溫度以及其他條件與原種培養(yǎng)條件一致。

1.2.3 試驗(yàn)與比較 在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的過程中，為保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，需要保證實(shí)驗(yàn)在兩次以上。首先，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的過程中需要選擇上述培養(yǎng)中，綜合得分較高的菌株進(jìn)行培養(yǎng)。將菌株放在袋栽設(shè)備中進(jìn)行培養(yǎng)，每種菌株需要進(jìn)行100袋的實(shí)驗(yàn)。之后對(duì)所有的數(shù)據(jù)進(jìn)行詳細(xì)的記錄。

1.2.4 實(shí)地栽培試驗(yàn) 實(shí)地栽培實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)室不同，其在實(shí)際應(yīng)用的過程中是為檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室所培養(yǎng)出的菌種是否適合自然環(huán)境。首先需要選擇合適的實(shí)驗(yàn)場地，需要保證實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組實(shí)驗(yàn)條件基本保持一致。使用兩頭接種的栽種方法進(jìn)行種植，每個(gè)菌株栽種的數(shù)量為10000袋，并在栽種結(jié)束之后進(jìn)行詳細(xì)的數(shù)據(jù)記錄。

1.3 檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)

本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中，其檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)是按照《中國藥典》中的方法對(duì)其子實(shí)體和孢子粉進(jìn)行抽樣檢測。主要檢測的內(nèi)容包括多糖及三萜含量，孢子粉中多糖，三萜及油脂含量。

2 結(jié)果

2.1 母種篩選情況

從某中篩選的時(shí)間角度來看，實(shí)驗(yàn)組內(nèi)菌株發(fā)菌的時(shí)間大概在7天左右，且菌絲潔白純正，整齊。相比于實(shí)驗(yàn)組而言，對(duì)照組所需要的時(shí)間較長。平均時(shí)間在9d。

2.2 原種生長情況

從原種的生長情況來看，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝標(biāo)本以及吉林長白山所采集的野生靈芝標(biāo)本，在養(yǎng)殖的過程中，菌株發(fā)菌情況較為良好，菌絲潔白且茂密，而其所使用的時(shí)間平均為25天。而昆崳山品種在生長的過程中出現(xiàn)不良反應(yīng)，部分出現(xiàn)生長緩慢甚至于死亡情況，故而，從研究中排除。而對(duì)照組在試驗(yàn)的過程中，其菌株生長狀態(tài)與實(shí)驗(yàn)組一致，而其所使用的時(shí)間在30天。

2.3 栽培種生長情況

山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝在試驗(yàn)的過程中所使用的時(shí)間在30d，吉林長白山所采集的野生靈芝標(biāo)本在實(shí)際生長的過程中所使用的時(shí)間在35d。而對(duì)照組在試驗(yàn)的過程中所使用的時(shí)間在40d[4]。從栽培種的實(shí)際情況來看，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝生長情況最佳。

2.4 品種比較情況

在進(jìn)行三次的重復(fù)實(shí)驗(yàn)之后，兩種新品種的靈芝菌株整體表現(xiàn)較為優(yōu)良。從污染角度上說，實(shí)驗(yàn)組被污染的概率在3%，而對(duì)照組被污染概率在12%，從污染概率角度上來說，實(shí)驗(yàn)組靈芝性能更加優(yōu)發(fā)均速度角度上說，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝三次試驗(yàn)平均發(fā)菌時(shí)間在34d左右，吉林長白山所采集的野生靈芝的發(fā)菌時(shí)間在39d左右。而對(duì)照組數(shù)據(jù)則不理想，時(shí)間在47d左右。故而從發(fā)菌時(shí)間角度分析，實(shí)驗(yàn) 組的菌株更為優(yōu)秀。

2.5 區(qū)域栽培情況

從發(fā)均速度角度上來說，其與實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有明顯差異。而從污染對(duì)角度上來說，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝在培養(yǎng)過程中，其受污染的概率在1%左右。吉林長白山所采集的野生靈芝在培養(yǎng)過程中受污染的概率在3%。而對(duì)照組在試驗(yàn)過程中其受到污染的概率在12.5%，其種植質(zhì)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于新品種，不符合企業(yè)種植的實(shí)際需求，難以創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)利益。

2.6 活性成分測定

從研究的結(jié)果來看，兩種新品種的靈芝，其的質(zhì)量較高，數(shù)據(jù)也在中國藥典要求之上。證明，新品種的靈芝有著較高的質(zhì)量，能夠滿足現(xiàn)階段社會(huì)發(fā)展的同時(shí)，也能夠?yàn)槠髽I(yè)創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)利益。

3 討論與分析

從各個(gè)國家對(duì)于食藥用菌的研究情況來看，多數(shù)食用菌均來自野外，需要通過人工馴化才能夠在人們的生活中發(fā)揮更大的作用。通過人工的選擇，能夠更加具有針對(duì)性的定向的進(jìn)行食藥用菌的馴化工作，使其在發(fā)展過程中能夠更多的保留對(duì)人類有益的部分。使其更加滿足現(xiàn)階段社會(huì)發(fā)展的實(shí)際需求，進(jìn)而更好的服務(wù)與社會(huì)，服務(wù)于市場，為人們提供更加高質(zhì)量的醫(yī)療功效以及食用功效。通過雜交育種研究工作能夠在找出更加優(yōu)質(zhì)的靈芝品種，使靈芝能夠在我國的法扎過程中創(chuàng)造更大的藥用價(jià)值以及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。