雙葛止瀉口服液微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證

?？?，李煥娟，楊絨娟，周德剛

(洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司，國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心，河南洛陽(yáng) 471003)

雙葛止瀉口服液是由洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司、普萊柯生物工程股份有限公司和河南新正好生物工程有限公司聯(lián)合研制的三類新獸藥。雙葛止瀉口服液由金銀花、葛根、黃芩、黃連、白芍和炙甘草組成，來源于《傷寒論》中的“葛根芩連湯”。方中金銀花具有解熱、抗炎、抗病毒等藥理作用[1-2]，葛根芩連湯對(duì)感染性腹瀉具有一定的治療作用[3-4]。由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜，中藥制劑中的不同成分對(duì)微生物有一定的抑制和殺滅作用，常規(guī)法進(jìn)行微生物限度檢測(cè)，不能真實(shí)反應(yīng)樣品中的微生物情況，需采用適當(dāng)?shù)姆椒?，例如薄膜過濾法、中和劑、培養(yǎng)基稀釋法等，去除其抑菌作用，并對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證來確定所采用的微生物限度檢查方法的可行性和有效性[5-7]。依據(jù)2015年版 《中華人民共和國(guó)獸藥典(二部)》通則1102非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法，以及通則1103非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法和通則1104非無菌獸藥微生物限度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，建立適合雙葛止瀉口服液的微生物限度檢查方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器 集菌儀，型號(hào)HTY-602，浙江泰林生物技術(shù)股份有限公司；電子天平，型號(hào)JA2003，上海上平儀器有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號(hào)DNP-9272BS-Ⅲ，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；生化培養(yǎng)箱，型號(hào)SPX-150BSH-Ⅱ，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；生物安全柜，型號(hào)Nu-425-400S，美國(guó)Nuaire公司；全自動(dòng)立式電熱壓力蒸汽滅菌鍋，型號(hào)YXQ-LS-100A，上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；微量移液器，規(guī)格100 μL、1000 μL、5 mL，德國(guó)Eppendorf公司；電動(dòng)移液槍，型號(hào)E4XLS，規(guī)格20～200 μL，美國(guó)Rainin公司。

1.1.2 供試品 雙葛止瀉口服液；批號(hào)：20170201；規(guī)格：每1 mL相當(dāng)于原生藥0.45 g；包裝：口服液體藥用聚丙烯瓶；生產(chǎn)廠家：洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司。

1.1.3 菌株、試劑及材料 金黃色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕、銅綠假單胞菌〔CMCC(B)10104〕、枯草芽孢桿菌〔CMCC(B)63501〕、大腸埃希菌〔CMCC(B)44102〕、白色念珠菌〔CMCC(F)98001〕、黑曲霉菌〔CMCC(F)98003〕，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。

胰酪大豆蛋白胨液體培養(yǎng)基，批號(hào)20170116；胰酪大豆蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，批號(hào)20161018；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，批號(hào)20160924；沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，批號(hào)20160224；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，批號(hào)20170113；麥康凱液體培養(yǎng)基，批號(hào)20161222；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，批號(hào)20161021；pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，批號(hào)20160321；Kovacs氏靛基質(zhì)，批號(hào)20161117；甲基紅試劑盒，批號(hào)20161208；V-P試劑盒批號(hào)，20170214，均購(gòu)自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司。量筒、EP管、一次性無菌平皿、涂布棒、試管架、酒精燈、鑷子。無菌薄膜過濾器，型號(hào)FC752，浙江泰林生物技術(shù)股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法 依照2015版《中華人民共和國(guó)獸藥典(二部)》通則1102、1103、1104[8]有關(guān)非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證。

1.2.1 菌液制備 取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌第二代甘油保存物100 μL加到10 mL胰酪大豆蛋白液體培養(yǎng)基中，置35 ℃培養(yǎng)24 h。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物1 mL加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5、10-6、10-7，取稀釋液各0.1 mL加入制備好的胰酪大豆蛋白胨瓊脂平皿，涂布棒涂勻后置35 ℃培養(yǎng)24 h，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，計(jì)菌落數(shù)。

取白色念珠菌的第二代甘油保存物100 μL加到10 mL沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，置25 ℃培養(yǎng)48 h。取培養(yǎng)物1 mL，加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-4、10-5、10-6，取稀釋液各0.1 mL加入制備好的沙氏葡萄糖瓊脂平皿，涂布棒涂勻后置25 ℃培養(yǎng)2 d，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，計(jì)菌落數(shù)。

取黑曲霉凍干粉，溶于0.9%氯化鈉溶液中，混勻，用接種環(huán)蘸取，劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置25 ℃培養(yǎng)5 d。取沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)物，加0.9%氯化鈉溶液5 mL，洗下孢子，轉(zhuǎn)移至另一空管，取1 mL加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-4、10-5、10-6，取稀釋液各0.1 mL加入制備好的沙氏葡萄糖瓊脂平皿，涂布棒涂勻后置25 ℃培養(yǎng)5 d，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，計(jì)菌落數(shù)。

在大興安嶺，最早的春色出現(xiàn)在向陽(yáng)坡。嫩綠的草芽像繡花針一樣頂破豐厚的腐殖土，要以它的妙手，給大地繡出生機(jī)時(shí)，背陰山坡往往還有殘雪呢。這樣的殘雪，還妄想著做冬的巢穴。然而隨著冰河乍裂，達(dá)子香花開了，是透著清香的樹、爛漫的山花和飛起飛落的鳥兒。那蜿蜒在林間的一道道春水，被暖風(fēng)吹拂得起了魚苗似的波痕。投在水面的陽(yáng)光，便也跟著起了波痕，好像陽(yáng)光在水面打起蝴蝶結(jié)了。

1.2.2 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

為了評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精度,計(jì)算了重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和平均相對(duì)誤差。在全量程范圍內(nèi)和同一工作條件下,傳感器系統(tǒng)的重復(fù)性誤差指標(biāo)以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD表示,其計(jì)算公式如下[19]:

判定依據(jù)：試驗(yàn)組檢出大腸埃希菌，陰性對(duì)照組無菌生長(zhǎng)，則試驗(yàn)成立。反之，則判斷試驗(yàn)無效。試驗(yàn)組若未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。

試驗(yàn)成立時(shí)，供試品組麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上無菌生長(zhǎng)，或者雖有菌生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判定未檢出大腸埃希菌。

供試品對(duì)照組：用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，潤(rùn)濕濾膜后(水膜)，取供試液10 mL加入100 mL pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中混勻，加入薄膜過濾器的濾筒中過濾，用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗3次，每次100 mL。

王劍波先生：汽車行業(yè)供應(yīng)鏈非常復(fù)雜。主機(jī)廠在歐洲、北美洲和亞洲都有。一級(jí)供應(yīng)商在全球范圍內(nèi)也都有。但是說到汽車電子這一部分，生產(chǎn)商主要集中在亞洲，而在亞洲范圍內(nèi)看，又主要集中在中國(guó)。不過反過來看，中國(guó)自主品牌主機(jī)廠的供應(yīng)鏈也不一定都在中國(guó)。因此，這是水乳交融的狀態(tài)。由于合同與法律問題的限制，我不能透露全部具體客戶的名字，但是可以透露的是，在汽車領(lǐng)域，保時(shí)捷、吉利領(lǐng)克和廣汽是我們的合作伙伴，此外，還有哈雷摩托也是我們的客戶。

菌液對(duì)照組：用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，潤(rùn)濕濾膜后(水膜)，用100 mL pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液代替供試液過濾，再用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩緩沖液沖洗3次，每次100 mL，最后一次沖洗時(shí)，沖洗液中加入不大于100 CFU/mL的試驗(yàn)菌1 mL，搖勻后，濾過濾膜。

課堂是語(yǔ)文教學(xué)的主陣地，與我們朝夕相處的課本，它是一座富礦，是一口深井，是提高學(xué)生語(yǔ)文素養(yǎng)的力量源泉。用足語(yǔ)文課本，開動(dòng)腦筋，靈活處理好中華優(yōu)秀傳統(tǒng)文化的傳承，有利于學(xué)生的健康發(fā)展，全面發(fā)展。

陰性對(duì)照組：用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，潤(rùn)濕濾膜后(水膜)，用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗3次，每次100 mL。

結(jié)果分析：選用計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中較常見的金黃色葡萄球菌作為添加菌株，由計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)結(jié)果可知，菌液回收比值為0.421，未在藥典規(guī)定的0.5～2之間，菌液回收率較低，表明本試驗(yàn)供試品雙葛止瀉口服液具有一定的抑菌作用，需要采用一定的方法消除其抑菌作用，保證菌液回收率在0.5～2范圍內(nèi)再進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)檢測(cè)。

1.2.2.1 常規(guī)法(培養(yǎng)基平皿傾注) 試驗(yàn)組：無菌取供試液1 mL和稀釋至不大于100 CFU/mL的金黃色葡萄球菌1 mL注入無菌培養(yǎng)皿后，傾注20 mL 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基于平皿中，混勻，制備2份平行樣本的平皿放入培養(yǎng)箱中，35 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)后取平均值。供試品對(duì)照組：參照試驗(yàn)組的方法，不加菌液，測(cè)供試品的菌數(shù)。菌液對(duì)照組：參照試驗(yàn)組的方法，不加供試品，測(cè)供菌液的菌數(shù)。結(jié)果判定：菌液回收比值=(試驗(yàn)組菌數(shù)-供試品對(duì)照組菌數(shù))/菌液對(duì)照組菌數(shù)。

1.2.3 控制菌檢查(常規(guī)法) 無菌操作取2瓶雙葛止瀉口服液混合均勻后，取出10 mL至無菌玻璃瓶中，加入pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為1∶10的供試液。

取100 mL胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基3瓶，試驗(yàn)組加入10 mL供試液及不大于100 CFU/mL的大腸埃希菌1 mL；菌液對(duì)照組加入10 mL pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液及不大于100 CFU/mL的大腸埃希菌1 mL；供試品對(duì)照組加入10 mL供試液。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組?；靹蚝笾糜?5 ℃培養(yǎng)24 h。

結(jié)果分析：由常規(guī)法可知，雙葛止瀉口服液具有一定的抑菌作用，需要采用一定的方法消除供試品的抑菌活性。由于本產(chǎn)品為中藥口服溶液，水溶性好，可順利通過濾膜，故采用較常用且去除抑菌作用效果好的薄膜過濾法進(jìn)行方法驗(yàn)證。

表1 大腸埃希菌與非大腸埃希菌的生化鑒別

1：如出現(xiàn)表1以外的生化反應(yīng)類型，表明培養(yǎng)物可能不純，應(yīng)重新劃線分離，必要時(shí)做重復(fù)試驗(yàn)。2：IMViC 生化試驗(yàn)為“++--”或“-+--”判定為大腸埃希菌。

1.2.2.2 薄膜過濾法 制備供試液：無菌操作取2瓶雙葛止瀉口服液混合均勻后，取出10 mL至無菌玻璃瓶中，加入pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為1∶10的供試液。分別按以下方法對(duì)5種試驗(yàn)菌株進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。試驗(yàn)組：用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，潤(rùn)濕濾膜后(水膜)，取供試液10 mL加入100 mL pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中混勻，加入薄膜過濾器的濾筒中過濾，用pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗3次，每次100 mL，最后一次沖洗時(shí)，沖洗液中加入不大于100 CFU/mL的試驗(yàn)菌1 mL，搖勻后，濾過濾膜。

5) 換向。當(dāng)車鐘手柄從非海上全速正車位置直接扳到倒車任意位置時(shí)，主機(jī)轉(zhuǎn)速下降到制動(dòng)轉(zhuǎn)速，輸出停車指令控制主機(jī)停機(jī)，待主機(jī)停機(jī)之后反向啟動(dòng)主機(jī)。

第二種的推薦算法是基于流行度：這種算法是現(xiàn)在的機(jī)器學(xué)習(xí)應(yīng)用領(lǐng)域中最為常見也是當(dāng)前應(yīng)用得最為廣泛的算法。原因是因?yàn)檫@個(gè)算法的運(yùn)算方式非常簡(jiǎn)便迅捷。將各個(gè)項(xiàng)目的流行度進(jìn)行排序，再將排行靠前的流行項(xiàng)目推薦給用戶即可。例如微博的熱搜，音樂APP中的最熱歌曲，各大新聞等。這個(gè)算法的優(yōu)點(diǎn)是算法簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便快捷，推薦內(nèi)容適用于大眾和新用戶。而它的缺點(diǎn)是不能推薦相對(duì)個(gè)性化的內(nèi)容和領(lǐng)域。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌液計(jì)數(shù) 各菌株菌落計(jì)數(shù)結(jié)果如表2所示，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果用0.9%氯化鈉溶液將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌10倍稀釋至10-7，白色念珠菌10倍稀釋至10-6，黑曲霉菌10倍稀釋至10-5，約為不大于100 CFU/mL的菌懸液備用。

表2 細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果(CFU/mL)

2.2 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 常規(guī)法(培養(yǎng)基平皿傾注) 采用常規(guī)平皿法培養(yǎng)基傾注進(jìn)行樣品中需氧菌總數(shù)的方法驗(yàn)證，具體結(jié)果見表3所示。

表3 常規(guī)法進(jìn)行方法適用性檢查

過濾完成后將濾膜取出，將濾膜的菌面朝上貼于瓊脂平板上。金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌制備的濾膜貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，35 ℃培養(yǎng)3 d，計(jì)數(shù)。白色念珠菌和黑曲霉平行制備2份濾膜，一份貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，35 ℃培養(yǎng)5 d，計(jì)數(shù)；另一份貼于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)5 d，計(jì)數(shù)。

2.2.2 薄膜過濾法 采用薄膜過濾法，每個(gè)樣品沖洗3次，100 mL/次，并重復(fù)進(jìn)行3次獨(dú)立平行薄膜過濾法試驗(yàn)驗(yàn)證，計(jì)數(shù)驗(yàn)證結(jié)果見表4和表5。

從我國(guó)刑法的發(fā)展過程來看，自從新中國(guó)第一部刑法典誕生以來，我國(guó)刑事立法在總體上就呈現(xiàn)出擴(kuò)張刑法懲罰范圍的態(tài)勢(shì)，并且，在很長(zhǎng)的一段歷史時(shí)期內(nèi)，可以預(yù)見，我國(guó)刑法的發(fā)展方向依然是犯罪化。近年來刑法修正案對(duì)金融犯罪、有組織犯罪、環(huán)境犯罪、食品安全犯罪、貪污賄賂犯罪以及侵犯公民人身和財(cái)產(chǎn)權(quán)利的諸多罪名的入罪標(biāo)準(zhǔn)和構(gòu)成形態(tài)的修改足以說明，我國(guó)刑事立法呈現(xiàn)出大規(guī)模的犯罪化的趨勢(shì)，以積極而充分發(fā)揮刑罰對(duì)社會(huì)基本安全和秩序的塑造和保護(hù)作用。

表4 需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果(CFU/皿)

表5 霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果(CFU/皿)

取上述培養(yǎng)物1 mL接種至100 mL麥康凱液體培養(yǎng)基中，42 ℃培養(yǎng)24 h。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，35 ℃培養(yǎng)24 h。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上若有菌落生長(zhǎng)，挑取符合大腸埃希菌菌落特征(鮮桃紅色，圓形，邊緣整齊、表面光滑)的菌落在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，挑取符合大腸埃希菌菌落特征的菌落進(jìn)行靛基質(zhì)試驗(yàn)、MR-VP試驗(yàn)和檸檬酸鹽利用實(shí)驗(yàn)。大腸埃希菌與非大腸埃希菌的生化鑒別見表1(GB 4789.38-2012)。

結(jié)果可知，各試驗(yàn)菌試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試液對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值均在0.5～2范圍內(nèi)，符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》 適用性試驗(yàn)要求規(guī)定。且陰性對(duì)照均無菌生長(zhǎng)，本方法可用于雙葛止瀉口服液需氧菌和霉菌及酵母菌的總數(shù)測(cè)定。

2.3 控制菌檢查結(jié)果 依據(jù)《中華人民共和國(guó)獸藥典》2015版二部1103非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法和1104非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，本產(chǎn)品雙葛止瀉口服液，應(yīng)檢測(cè)的控制菌為大腸埃希菌。采用常規(guī)法進(jìn)行控制菌方法驗(yàn)證，結(jié)果如表6所示。

表6 控制菌方法驗(yàn)證結(jié)果

結(jié)果分析：試驗(yàn)組與菌液對(duì)照組麥康凱平板上有菌落生長(zhǎng)，IMViC生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果均為“++--”，供試品對(duì)照組和陰性對(duì)照組無菌生長(zhǎng)。證實(shí)了常規(guī)法可用于雙葛止瀉口服液大腸埃希菌控制菌檢查，此方法成立。

3 討論與結(jié)論

3.1 方法驗(yàn)證的必要性 中藥制劑成分復(fù)雜，其中任何成分具有抑菌性均可影響微生物限度檢查的準(zhǔn)確性。2015版《中華人民共和國(guó)獸藥典》規(guī)定，中藥制劑進(jìn)行微生物限度檢查時(shí)，對(duì)可能具有抑菌作用的產(chǎn)品，必須首先采用合適的方法消除其抑菌作用，再進(jìn)行對(duì)應(yīng)供試品的檢查。因此，微生物檢測(cè)方法必須經(jīng)過方法的適用性試驗(yàn)驗(yàn)證[9-10]，才可確保微生物檢查方法的可靠性和檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。

女人來得最晚，被介紹的時(shí)候，坐正首的一個(gè)黑臉男人笑著說知道她。女人很驚詫，說您是哪位呀，怎么知道我？女人以為這個(gè)男人曾經(jīng)是她的患者也說不定，就沒在意?？赡侨私又f我叫田連民，道外區(qū)的稅收員。

3.2 微生物計(jì)數(shù)法 雙葛止瀉口服液由金銀花、葛根、黃芩、黃連、白芍和炙甘草組成，其組分中金銀花、黃芩對(duì)金黃色葡萄球菌等菌株均有一定的抑制作用[11]，由本試驗(yàn)結(jié)果可知，常規(guī)法進(jìn)行需氧菌總數(shù)的測(cè)定時(shí)，菌液回收比值較低(0.421)，未能達(dá)到試驗(yàn)要求(菌液回收比值0.5～2)。故采取薄膜過濾法消除其抑菌作用后，再次進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)方法學(xué)考察，薄膜過濾法采用一次性無菌過濾器，將外界影響和操作者的主觀因素減少到最低，是檢驗(yàn)各種成分劑型的首選方法[12]。雙葛止瀉口服液采用薄膜過濾法可消除其抑菌作用，各菌回收率均在規(guī)定范圍內(nèi)。

當(dāng)前我國(guó)高校每年都在不斷擴(kuò)招，招收人數(shù)的上升，使得高校由以往的精英教育轉(zhuǎn)變?yōu)榇蟊娊逃?。但是高校?nèi)部的教育資源卻沒有得到相應(yīng)程度的擴(kuò)展，使得許多高校內(nèi)部的軟硬件資源達(dá)不到條件，影響到廣大師生正常教學(xué)工作開展。實(shí)質(zhì)上學(xué)校的這種經(jīng)營(yíng)管理方法，在很大程度上損害了學(xué)生的利益，在實(shí)際教育之中反映出對(duì)學(xué)生的關(guān)心愛護(hù)程度不夠、服務(wù)意識(shí)較弱等問題，使得大學(xué)生許多的愿望和要求無法得到滿足。積累較長(zhǎng)時(shí)間后，便可能造成一些突發(fā)事件的發(fā)生，學(xué)生以極端方式宣泄自身心中的怨氣。例如：媒體經(jīng)常報(bào)道的畢業(yè)證發(fā)放問題和食堂食品質(zhì)量安全問題等，就容易導(dǎo)致學(xué)生長(zhǎng)時(shí)間不滿并引發(fā)突發(fā)事件。

3.3 控制菌檢查法 依照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2015版規(guī)定[8]，雙葛止瀉口服液應(yīng)對(duì)大腸埃希菌進(jìn)行控制菌檢查，本研究采用常規(guī)法進(jìn)行控制菌檢查，方法成立。供試品雙葛止瀉口服液在微生物計(jì)數(shù)法驗(yàn)證時(shí)，常規(guī)法菌落回收比值(0.4)，低于0.5，表明本產(chǎn)品具有一定的抑菌作用，但抑菌作用較輕微。在進(jìn)行控制菌檢查時(shí)，常規(guī)法方法驗(yàn)證合格。分析原因?yàn)榭刂凭鷻z查時(shí)所用培養(yǎng)基體積較多，有培養(yǎng)基稀釋去除抑菌作用的原因。故本供試品檢查時(shí)，微生物計(jì)數(shù)法需采用薄膜過濾法，控制菌檢查法可采用常規(guī)法。

我們就沿著河堤，匆匆往上游趕。五月的太陽(yáng)毒得很，差不多是申時(shí)了，太陽(yáng)還掛得老高。河面不時(shí)吹來陣陣熱風(fēng)，熏得人閉氣。大約走了二十來里，天剛擦黑，大梁說今朝就走到這兒吧，你有身孕，往后可得悠著點(diǎn)兒。

供試品雙葛止瀉口服液的細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法采用薄膜過濾法，控制菌檢查方法可采用常規(guī)方法進(jìn)行。