集菌涂片染色法在檢測痰液中抗酸桿菌中的應(yīng)用分析

李關(guān)華

（廣東省羅定市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 羅定 527200）

0 引言

結(jié)核病主要是由結(jié)核桿菌引起的一種傳染性病癥，該病具有較高的患病率、致死率，該病在單一傳染病中致死率排在首位，依據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）2020年最新發(fā)布數(shù)據(jù)得出，2019年，全球約有1000萬人患上結(jié)核病，140萬人因此死亡[1]。結(jié)核病常會(huì)累及多個(gè)器官，包括腎、骨、肺等，其中以肺結(jié)核最為常見，且最具傳染性，已成為危害人們身體健康的一個(gè)重要病癥。因此針對結(jié)核病患者，對其進(jìn)行早期診斷至關(guān)重要，以盡早防控與治療，改善預(yù)后[2]。目前針對結(jié)核病，臨床多以直接涂片、羅氏培養(yǎng)最為常見，其中直接涂片操作簡便、經(jīng)濟(jì)，但其陽性率較低；羅氏培養(yǎng)陽性率高，已成為診斷結(jié)核病“金標(biāo)準(zhǔn)”，但其培養(yǎng)周期較長，影響疾病診治結(jié)果[3]。因此選擇一種高效、檢出率高的檢測方式一直是臨床關(guān)注的重點(diǎn)。集菌涂片染色法是一種新的檢測方式，具有操作簡便、易分辨、檢測時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)[4]。但目前關(guān)于集菌涂片染色法用于痰液抗酸桿菌檢測中的相關(guān)文獻(xiàn)較少，故本文就本院選取的100例疑似肺結(jié)核患者進(jìn)行研究，分析使用集菌涂片染色法檢測痰液中抗酸桿菌的臨床價(jià)值，闡述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將本院2020年1月-2021年1月收治的100例疑似肺結(jié)核患者納入研究，所有患者均知情同意，并經(jīng)院內(nèi)倫理委員會(huì)審核、批準(zhǔn)〔批號：2019年審（22）號〕。100例疑似肺結(jié)核患者中男、女各68、32例，年齡在19～65歲，平均（38.52±5.37）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①入選病例均為疑似肺結(jié)核患者（患者均持續(xù)咳嗽、咳痰≥3周，伴咯血或伴血痰；發(fā)熱或胸痛≥2周）；②經(jīng)胸部X線片檢查結(jié)果顯示異常；③均為合格痰液標(biāo)本[5]：血性、膿性、干酪性與黏液性痰，痰液量≥2mL；④均為首次患病。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者既往存在精神病史；②既往伴肺結(jié)核病史；③伴肝、腎等其他器官功能衰竭。

1.2 方法

集菌涂片染色法：選擇竹簽挑取0.05～0.1mL痰標(biāo)本，將其置于玻片正面靠右2/3左右位置，隨后均勻涂抹成適合厚薄的卵圓形痰膜（10mm＊20mm），隨后將其置于生物安全柜內(nèi)，利用紫外線等進(jìn)行照射，時(shí)間為15min，實(shí)施痰涂片火焰固定。將剩余痰標(biāo)本加等體積的5%濃度的次氯酸鈉溶液，混勻，靜置30min，隨后液化、滅菌，倒入離心管內(nèi)，實(shí)施振蕩搖勻，用離心機(jī)4000r/min，離心15min，去上清，保留1mL沉渣，搖勻后制成集菌痰涂片，將剩余沉渣保存?zhèn)溆茫S后進(jìn)行染色。染色應(yīng)嚴(yán)格依據(jù)試劑盒操作說明實(shí)施。將已固定的痰涂片滴加石炭酸復(fù)紅溶液初染10min；水洗、瀝水后滴加酸性酒精脫色1～2min或無色；水洗、瀝水后滴加亞甲基藍(lán)溶液復(fù)染30s，水洗、晾干待檢，將染色好的痰涂片置于OLYMPUS CX21普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

直接涂片法按照《中國結(jié)核病防治規(guī)劃痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》[6]進(jìn)行操作。羅氏培養(yǎng)法按照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行操作[7]。

集菌涂片染色法安全性測試：取直接涂片法與集菌涂片染色法均位3+或4+痰液標(biāo)本共12份，各標(biāo)本均為2mL，分6份，將1倍標(biāo)本保存液加入其中，進(jìn)行處理，時(shí)間選為5～15min，其中3份進(jìn)行加熱，另3份不做處理，實(shí)施羅氏培養(yǎng)；另外6份將2倍的樣本保存液加入其中，處理方式同上，對抗酸桿菌生長狀況進(jìn)行檢查。

1.3 觀察指標(biāo)

①此次100例患者診斷結(jié)果由專業(yè)醫(yī)師出具，并以“羅氏培養(yǎng)法”作為金標(biāo)準(zhǔn)，確定最終肺結(jié)核確診例數(shù)，觀察直接涂片法、集菌涂片染色法特異度、靈敏度、診斷符合率、誤診率。特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100.00%[8]；靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100.00%；診斷符合率=（真陽性+真陰性）/100×100.00%。誤診率=假陽性/（真陰性+假陽性）×100.00%[9]；②對集菌涂片法安全性進(jìn)行檢測，對痰液標(biāo)本分別進(jìn)行加熱、進(jìn)行羅氏培養(yǎng)，觀察抗酸桿菌生長情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 100例患者確診結(jié)果

100例疑似肺結(jié)核患者，經(jīng)羅氏培養(yǎng)法最終確診為71例。

2.2 兩種檢測方式與金標(biāo)準(zhǔn)對比

集菌涂片染色法、直接涂片法與羅氏培養(yǎng)法檢測結(jié)果對比。見表1。

表1 兩種檢測方式與金標(biāo)準(zhǔn)

2.3 3種檢測方法檢出情況

羅氏培養(yǎng)法特異度、靈敏度、診斷符合率、誤診率100.00%、100.00%、100.00%、0.00%，集菌涂片染色法分別為93.10%、95.77%、95.00%、6.90%，直接涂片法分別為51.72%、81.68%、73.00%、48.28%，羅氏培養(yǎng)法、集菌涂片染色法特異度、靈敏度、診斷符合率均高于直接涂片法，誤診率均低于直接涂片法（P＜0.05），羅氏培養(yǎng)法與集菌涂片法對比無明顯差異（P＞0.05）。見表2。

表2 3 種檢測方法檢出情況對比[n（%）]

2.4 集菌涂片染色法安全性試驗(yàn)結(jié)果

在標(biāo)本中加入1倍或2倍痰液保存液，將2份標(biāo)本分別放置5～15min，對標(biāo)本進(jìn)行加熱，在羅氏培養(yǎng)基上進(jìn)行接種，培養(yǎng)2周后，均未見抗酸桿菌生長。

3 討論

肺結(jié)核是臨床常見病癥，其主要是由結(jié)核桿菌感染所致，以發(fā)熱、咯血、咳嗽、盜汗、消瘦等為主要臨床表現(xiàn)，若不盡早采取有效的治療措施，隨著病情進(jìn)展，可引發(fā)結(jié)核菌耐藥性，增加治療難度，對患者生理、心理帶來嚴(yán)重影響，故針對肺結(jié)核患者，應(yīng)盡早采取有效的治療措施，以改善患者臨床癥狀，提升其生活質(zhì)量[10-11]。而采取有效的診斷措施，是提升療效、改善預(yù)后的關(guān)鍵。

目前，部分主流的結(jié)核病診斷方式存在一定的局限性，其中結(jié)核素皮膚實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用，因結(jié)核桿菌存在高感染率與卡介苗的應(yīng)用，造成其在臨床應(yīng)用率較低，而CT、X線等影像學(xué)檢測方式，極易受醫(yī)師主觀意識影響，降低診斷結(jié)果準(zhǔn)確性[12]。內(nèi)鏡與病理學(xué)檢查雖有較高的準(zhǔn)確性，但其具有一定的侵入性，且操作較為困難，因此針對結(jié)核病，臨床多采取實(shí)驗(yàn)室檢測，其具有操作簡便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，對臨床早期診斷疾病具有重要意義[13]。近年來，隨著實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)不斷發(fā)展，痰涂片抗酸桿菌檢測技術(shù)成為防控結(jié)核病的主要方式，具有操作簡便、易行、可靠、迅速等優(yōu)點(diǎn)[14]。本文使用的集菌涂片染色法中，使用次氯酸鈉法，具有較高的敏感性，且價(jià)格低廉，所需離心力極易達(dá)到，同時(shí)因次氯酸鈉是一種有效的消毒劑，故可顯著減少實(shí)驗(yàn)室感染發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，具有一定的安全性。本文研究顯示，100例疑似肺結(jié)核患者，經(jīng)羅氏培養(yǎng)法確診共71例，表明肺結(jié)核仍具有較高的發(fā)病率。同時(shí)本文研究顯示，相較于直接涂片染色法，集菌涂片染色法檢測特異度、靈敏度、診斷符合率較高，誤診率較低；集菌涂片染色法檢測痰抗酸桿菌特異度、靈敏度、診斷符合率略低于羅氏培養(yǎng)法，誤診率略高于羅氏培養(yǎng)法，但兩種檢測方式對比無明顯差異，表明集菌涂片染色法具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，有利于提升痰抗酸桿菌診斷準(zhǔn)確性[15]。同時(shí)，本文還對集菌涂片染色法安全性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對12份痰液標(biāo)本經(jīng)不同比例的標(biāo)本保存液處理5～10min，經(jīng)加熱或不加熱，采取羅氏培養(yǎng)法進(jìn)行檢測，其結(jié)果得出，均未見抗酸桿菌生長、繁殖，由此得出，集菌涂片染色法具有較高的生物安全性，對比直接涂片法檢測，其對實(shí)驗(yàn)室工作人員的安全更具保障。

綜上所示，集菌涂片染色法檢測痰液中抗酸桿菌臨床應(yīng)用價(jià)值較高，該檢測方式具有較高的診斷特異度、靈敏度、診斷符合率，可有效彌補(bǔ)直接涂片法檢測的不足，且集菌涂片染色法操作方式簡便、經(jīng)濟(jì)、人為因素影響較少，具有較高的生物安全性，值得借鑒。但本文尚存在一定的不足之處，例如樣本數(shù)量少、未引用客觀性指標(biāo)以及研究時(shí)間少等，故在今后研究中可進(jìn)一步增加樣本數(shù)、引用客觀性指標(biāo)以及延長研究時(shí)間等，以深入研究集菌涂片染色法在檢測痰液中抗酸桿菌的臨床價(jià)值。